苗药土三七栽培品中总酚酸的含量测定

殷 海 秦翠玲 杜 江

(贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002)

苗药三七为景天科植物土三七(费菜)Sedumaizoon L.的根及全草，多鲜用，又称为血山草、打不死、晒不干等、苞菜还阳等，是苗族民间常用于治伤止血的药物，故被誉为骨伤圣药。近年来，土三七的食用和观赏价值逐渐被认识，其防治心脑血管疾病的活性也受到重视，对其研究也在不断深入。目前在贵州已具有一定的人工种植规模，具有产业化前景。总酚酸是土三七中抗氧［1－5］化、止血方面的重要物质，因而其含量与药材的品质息息相关。国内仅付煜荣［5－8］等人利用高效液相色谱法和分光光度法分别对土三七中没食子酸和总酚酸含量进行了相关研究。但由于地区不同，药材成分及其含量可能会有明显的差异，目前对于黔产土三七的研究仍处于空白状态，故对黔产品种的品质研究是相当必要的。

1 仪器与试剂

UV－1800岛津紫外分光光度计(SHMADZU CORPORATION)，梅特勒－托利多New classic型电子天平(梅特勒－托利多仪器(上海)有限公司)，KQ5200E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

没食子酸对照品购自中国药品生物制品检定所。土三七采自贵州省贵阳市乌当区，经本校中药学专业赵俊华教授鉴定为费菜(Sedumaizoon L.)全草。甲醇(上海振兴化工一厂)、无水乙醇(重庆川东化工有限公司)及其它试剂均为分析纯，纯净水(贵阳市娃哈哈食品有限公司)。

2 方法与结果

2.1 紫外分光度法的方法学考察

2.1.1 对照品溶液的制备：精密称取一定量没食子酸的对照品，用无水乙醇溶解，定容配成没食子酸(50.50 μg/m L)贮备液液。

2.1.2 供试品溶液的制备：精密称取土三七药材粉末约1g，加8倍量70%的乙醇回流提取3次，每次60min。过滤、合并虑液，定容至50.00 m L，精密吸取提取液0.40 m L，水浴挥干，加无水乙醇定容至25 m L，即得。

2.1.3 检测波长的测定：取一定量的对照品溶液与供试品溶液，同时以相应的溶剂为空白对照，分别用紫外分光光度仪扫描200nm－400nm波长范围内，测定结果表明对照品溶液，供试品溶液均在273nm处有最大吸收，因此选择273nm为测定波长(见图1)。因此确定328 nm为最示波长。

图1 对照品与供试品溶液吸收波长的选择

2.1.4 标准曲线绘制：精密移取对照品贮备液3.00、3.50、4.00、4.50、5.00 和 5.50mL 置于 25 m L 量瓶，加无水乙醇至刻度，在273nm处测定，记录吸光度A，以A为纵坐标，以含量C为横坐标，求得回归方程为：A=0.04841C+0.05652，r=0.99984(C：μg·ml－1)。结果表明没食子酸含量在 6.060 ～ 11.110 μg·ml－1范围内，线性关系良好(见图2)。

2.1.5 精密度试验：精密吸取3.0 m L对照品溶液6份，分别置于25 m L量瓶加无水乙醇定容，在273nm处测定吸光度，结果RSD为1.41%(n=6)，精密度良好。

图2 没食子酸的标准曲线

2.2.6 重现性试验：精密称取1.0 g同一批药材6份，按“2.2.2供试品溶液的制备”项下进行操作，在273nm处测定吸光度，结果RSD为1.00%(n=6)。表明本方法重现性良好。

2.2.7 稳定性试验：按“2.2.2供试品溶液的制备”项下的方法制备供试液一份，于室温下放置 15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 min 后，取适量分别在 273nm 处测定吸光度，结果RSD为0.15%，结果表明样品在15～60 min内稳定。

2.2.8 回收率试验：精密称取已知总酚酸含量的样品6份，分别加入一定量没食子酸对照品，按“2.2.2供试品溶液的制备”项下的方法制备供试液，在273nm处测定吸光度，结果测得没食子酸的回收率为99.87%(见表1)。

表1 总酚酸测定的回收率(n=6)

2.2 样品测定：精密称取土三七样品3份制备供试品溶液，测定吸光度，按回归方程计算总酚酸的含量，结果见表2。

表6 样品测定试验结果

3 讨论

3.1 国内外的各种研究表明，总酚酸是苗药土三七的活性部位，而苗药土三七的总酚酸中没食子酸的含量相对较高，所以选择没食子酸作为对照品。运用分光光度法测定了土三七中总酚酸的含量，方法简单，重现性好，可作为土三七质量控制的方法之一。

3.2 试验过程中曾考察了不同溶剂(甲醇、乙醇、水)，用于土三七中总酚酸的提取，结果表明乙醇的提取率最高;提取方法考察了超声提取法和回流提取法，由于不同地区的土三七存在差异性，本试验采用的药材通过方差分析图和趋势图试验结果表明，采用8倍量的70%乙醇回流提取3次提取率最好。从分析结果计算，土三七乙醇提液中没食子酸含量占总酚酸的3.25%。其余酚酸成分有待进一步研究。

3.3 目前，2010年版药典尚未收录有关土三七质量控制标准，本文建立了测定土三七中总酚酸含量的方法，该方法简单、快捷，重现性好，可用于该药的质量控制及定量分析。同时对含总酚酸和没食子酸的其它药材分析具有重要参考价值。

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