CIK细胞治疗对晚期恶性肿瘤患者疗效研究*

王 双

(泰山医学院附属泰山医院肿瘤内科，山东 泰安 271000)

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell, CIK)是以CD3+CD8+T 细胞和 CD3+CD56+T 细胞为主要效应细胞的异质细胞群，是一类体外增殖能力强、杀瘤活性高、对多重耐药肿瘤细胞敏感的广谱抗瘤免疫活性细胞[1]。它可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下,直接杀伤肿瘤细胞,并可调节和增强机体的免疫功能。我科自2010年6月～2011年12月为38例晚期癌症患者进行了CIK细胞治疗,现将结果报告如下。

1 资料和方法

1.1临床资料 本组38例患者均经病理或细胞学检查确诊为恶性肿瘤。其中肺癌20例,鼻咽癌2例,乳腺癌4例,肾癌4例,原发性肝癌6例, 恶性黑色素瘤 2 例。按照国际抗癌联盟(UICC)肿瘤分期标准,本组均为III期或IV期病例。男性26例,女性12例。中位年龄 58岁(34～86 岁)。在行CIK细胞治疗前有27例进行过化疗,占71%,有11例进行过放疗,占29%。放化疗与CIK细胞治疗间隔在4周以上。均有可测量肿瘤病灶；Karnofsky 评分≥60 分；预计生存期>3 个月;治疗前心、肝、肾功能及血常规大致正常。 治疗前通过医院伦理委员会批准，并签治疗知情同意书。

1.2方法

1.2.1CIK细胞培养与回输 MCS+血细胞采集仪采集患者外周血单个核细胞,经淋巴细胞分离液进一步分离纯化。用pH 7.4的PBS洗涤3次,将细胞置于含人血清的培养基中,细胞密度为1.5～2.0×106个/ml,置于37℃5%CO2条件下培养。第0 d加入生长培养基IFN-γ 1000 U/ml,24 h后加入人重组IL-1 100 U/ml、人重组IL-2 1 000 U/ml、抗CD3单抗100 ng/ml,每2～3 d更换培养基一次,补加IL-1、IL-2,并调整细胞密度为1.5～2.0×106个/ml,培养至第8 d,经细菌、霉菌等微生物培养阴性,革兰氏染色无菌生长后再收集细胞,培养10～14 d后,将收集培养的CIK细胞用无菌生理盐水洗涤3次,细胞溶于1%人血白蛋白生理盐水配成100 ml液体静脉回输。隔天回输 1 次， 每次回输细胞数量在 2～3×109，连续输注4次为一个疗程。每位患者输注1～3个疗程。

1.2.2免疫学及其他临床相关指标的检测 治疗前后常规检查患者体温、血压等指标,取患者CIK治疗前及CIK细胞回输治疗后2周外周血,检测肿瘤标志物,同时用流式细胞仪测定患者外周血CD3、CD4、CD8及NK细胞中CD16、CD56等免疫学指标。

1.2.3生活质量评估 用Karnofsky评分及体重、疼痛程度、睡眠、食欲等的改变来评估生活质量的改善。

1.2.4疗效评价 患者治疗结束后4周进行疗效评定, 参照实体瘤疗效标准,以患者治疗前及治疗后1个月CT及B超进行对照比较，分为完全缓解(CR)，部分缓解(PR)，轻度缓解(MR)，稳定(SD)，病情进展(PD)。有效率=CR+PR+MR。并观察治疗前、后对心、肝、肾及消化道的影响。

1.2.5毒副反应观察 静脉回输过程中及回输后2 h内密切观察患者是否出现发热、皮疹、乏力、肌肉酸痛、呕吐等毒副反应。

1.2.6统计分析 采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,2组独立样本均数比较采用t检验。

2 结 果

2.1肿瘤标志物的测定 29例CEA升高的患者经CIK细胞治疗后23例下降,6例稳定;4例CA125升高患者经CIK治疗后3例下降,1例增加;6例AFP升高患者经CIK治疗后均下降。

2.2CIK细胞治疗前后T细胞亚群变化 接受CIK细胞免疫治疗的患者,T细胞亚群变化与治疗前相比,其外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞(CD16+、CD56+)均显著上升(P<0.05),CD8+下降。见表1。

表1 CIK治疗前后T细胞亚群的变化

2.3生活质量改善 治疗后Karnofsky评分平均提高10～20分,其中提高29例,稳定4例,下降5例,提高率为76%。治疗后患者平均体重增加2.5 kg,其中提高26例,稳定7例,下降5例,提高率为68%。疼痛评分(按数字评分法)平均下降3分，其中下降27例，稳定8例，加重3例，下降率为71%；病人疲倦乏力及失眠、食欲不振等临床症状有明显改善。见表2。

2.4疗效评价 38例患者部分缓解15例，轻度缓解10例，稳定8例，进展5例，总缓解率为66%。

2.5毒副反应观察 5例患者出现一过性发热,体温在 37.5℃以下，未行特殊处理自行消退；3例患者出现轻度皮疹、 乏力等症状，均能耐受, 未作特殊处理自行缓解。 绝大多数患者耐受较好， 无其他严重不良反应。治疗前后肝、肾功能检测均无明显改变。

表2 CIK治疗前后临床症状改善分析

3 讨 论

CIK 细胞是 1991 年由美国斯坦福大学医学院 Schmidt Wolf 等发现在外周血淋巴细胞中加入多种细胞因子，经培养收获大量肿瘤杀伤细胞，将其命名CIK细胞。CIK细胞是一种新型、高效、广谱的免疫细胞，为目前肿瘤过继免疫治疗的研究热点之一。其对多种肿瘤具有杀伤活性，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非主要组织相容性复合物(MHC)限制性杀瘤的特点,CD3+CD56+T细胞是主要的效应细胞。CIK细胞的一个重要特性是对肿瘤细胞的杀伤为非特异性和非MHC限制性，不参与抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用[2-3]。另一重要特性是，CIK细胞被活化后可以产生多种细胞因子和趋化因子，如TNF-α、IL-2、GM-CSF、IFN-γ等,不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用,还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。CIK细胞的效应细胞CD3+CD56+细胞在正常人外周血中极其罕见,仅1%～5%,在体外经多种因子培养28～30天后,其数目迅速增多，便于培养应用;实验证明,扩增出的CD3+CD56+细胞来源于CD3+CD56-T细胞,而非CD3-CD56+NK细胞，但具有NK细胞的表面标志CD56+抗原[4]。Wolf等[7]研究发现,CIK细胞对多重耐药肿瘤细胞仍具有敏感性,对化疗敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞杀伤活性无明显差别[5-6]。由于CIK细胞既具有T淋巴细胞强大杀伤活性,也具有NK细胞杀伤时的非MHC限制性,所以其对于多种肿瘤细胞系(包括K562、人B淋巴瘤细胞系、胃癌细胞系MGC-803、肝癌细胞系BEL-7402、乳腺癌细胞系MCF-7等)均表现出强大的杀伤活性;同时CIK细胞对正常骨髓的细胞毒性小,在不损伤机体免疫系统和功能的前提下，直接杀伤肿瘤[8]，病人耐受性好。

本研究中患者经过CIK细胞免疫治疗后，T细胞亚群变化与治疗前相比,其外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞(CD16+、CD56+)均显著上升,CD8+下降，NK细胞百分率和杀伤活性明显升高，CIK细胞治疗后CD3+、CD4+细胞的增高说明CIK细胞生物治疗能增强机体的细胞免疫功能。相关肿瘤标志物呈下降趋势，29例CEA升高的患者经CIK细胞治疗后23例下降,6例稳定;4例CA125升高患者经CIK治疗后3例下降,1例增加;6例AFP升高患者经CIK治疗后均下降。临床疗效方面有效率为66%。在生活质量上，治疗后Karnofsky评分平均提高10～20分,患者平均体重增加2.5 kg,疼痛评分(按数字评分法)平均下降3分，其中下降27例，稳定8例，下降率为71%；另外病人疲倦乏力及失眠、食欲不振、恶性呕吐、腹胀等临床症状有明显改善。相关生活质量的改善明显，与输入CIK细胞后产生的一些细胞因子的作用可能有关。CIK细胞输注过程中不良反应轻微，5例出现低热，3例有轻微皮疹、乏力，未作特殊处理，自行缓解。

临床研究表明，CIK细胞过继免疫治疗晚期恶性肿瘤患者，能明显提高患者免疫功能，有利于控制肿瘤生长，改善临床症状，提高晚期肿瘤病人的生活质量，并且毒副反应轻微，临床应用安全，病人耐受性好，易于被晚期肿瘤病人接受，是一种安全、有效的方法，对于晚期肿瘤病人的支持治疗及改善生活质量有积极意义。

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