亲和离心法检测甲胎蛋白异质体在肝癌诊断中的临床应用

邸晓辉，郑 绯，徐 娟，贾志玲，刘 洋

亲和离心法检测甲胎蛋白异质体在肝癌诊断中的临床应用

邸晓辉1，郑 绯2，徐 娟1，贾志玲3，刘 洋4

目的采用亲和离心管法检测甲胎蛋白异质体(alpha Fetoprotein－L3，AFP－L3)，分析甲胎蛋白异质体AFPL3在诊断肝癌的临床应用价值。方法选择150例临床检测甲胎蛋白AFP阳性者(≥20 ng/ml)，使用亲和离心管方法检测甲胎蛋白异质体AFP－L3，研究检测甲胎蛋白异质体(AFP－L3)用于临床鉴别肝癌的作用。结果以甲胎蛋白异质体AFPL3≥10%作为诊断指标，对78例临床确诊为肝癌的患者甲胎蛋白异质体AFP－L3的诊断灵敏度是91.03%(71/78);在72例临床诊断为其他肝脏疾病的患者甲胎蛋白异质体AFP－L3的诊断特异性达到95.83%(69/72);甲胎蛋白异质体AFP－L3的符合率为93.33%［(71+69)/150］。结论新型亲和离心柱法检测甲胎蛋白异质体AFP－L3对良、恶性肝病的鉴别诊断具有重要临床价值。

甲胎蛋白异质体;肝癌;亲和离心管法

原发性肝癌(primary carcinoma of the liver，PHC)是位列世界第五、我国第三的恶性肿瘤［1，2］，且在世界范围内发病率逐年上升。目前临床肝癌确诊多属中、晚期，预后较差，因此早诊早治显得尤为重要。甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)定量结合影像学检查是目前早期发现肝癌的主要手段，但影像学受诸多因素的限制，对早期肝癌的发现率不高;AFP作为目前应用最广泛的肝癌血清学标志物，其敏感性为60% ～80%，特异性为70% ～90%，不能满足临床需要［1－3］。临床迫切需要寻找肝癌早期诊断高特异性的指标。随着近几十年的研究发现，AFP作为单链糖蛋白存在糖链异质性，其与植物外源性凝集素的亲和力不同，依据亲和力的不同可以分为3类:AFP－L1、AFP－L2、AFP－L3。其中 AFP－L1主要存在于良性肝病;AFP－L2来自孕妇，AFP－L3即甲胎蛋白异质体主要由肝癌细胞产生［2，4，5］。AFP － L3 是新一代肝癌生物学高特异性标志物。本研究采用国产AFP－L3亲和吸附离心管法分离AFP－L3，并用贝克曼电化学发光免疫分析系统对2010－09至2011－01本院的150例肝癌、肝炎、肝硬化患者的血清进行了检测，探讨甲胎蛋白异质体检测用于鉴别肝癌的临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取我院门诊及住院患者150例，男135例，女15例，年龄27～77岁，平均49.8岁;其中肝癌78例，肝硬化42例，慢性活动型肝炎(慢肝)30例。以上病例均经本院肝病科明确诊断，诊断标准符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎诊断标准及中华人民共和国卫生部医政司组织并由全国肿瘤防治办公室与中国抗癌协会合编的《新编常见恶性肿瘤诊治规范》［3，6］中有关原发性肝癌的诊断标准。

1.2 试剂和方法 AFP－L3亲和吸附离心管由北京热景生物技术有限公司提供，甲胎蛋白试剂(AFP)检测采用贝克曼化学发光免疫分析系统(美国贝克曼库尔特公司)。所有患者采集血清标本分离后保存在－80℃超低温冰箱备用。

1.3 统计学处理 应用SPSS 13.0软件进行统计分析，不同组别间AFP、AFP－L3的比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。浓度分布图采用GraphPad Prism 5.0统计软件进行绘制。

2 结 果

2.1 AFP、AFP－L3的水平分布 AFP≥20 ng/ml、AFP－L3≥10%做为判定肝癌阳性的标准。AFP、AFP－L3的阳性率在肝癌组差异无统计学意义，但在肝硬化组和慢肝组差异具有统计学意义(P＜0.01，表1)。

应用GraphPad Prism 5.0统计软件分析，肝癌、肝硬化和慢肝患者AFP、AFP－L3的分布水平见图1。

2.2 AFP、AFP－L3对肝癌的诊断价值 AFP－L3的敏感度为91.03%，与AFP敏感度(97.44%)差异无统计学意义;但 AFP－L3特异性(95.83%)与AFP的特异性(51.39%)差异有统计学意义(P＜0.01，表2)。

2.3 AFP－L3在肝癌诊断中的作用分析 AFPL3对良恶性肝病鉴别诊断性能评价见图2。ROC的曲线下面积(AUC)为0.9760［95%可信限(CI)为0.9540 ～ 0.9979，P ＜ 0.0001］，敏感度为 91.03%(71/78)，特异性为 95.83%(69/72)，准确度为93.33%(140/150)。

表1 AFP、AFP－L3的阳性检出率比较 (n;%)

图1 肝癌、肝硬化及慢性活动性肝炎患者AFP、AFP－L3水平分布(A)及AFP－L3百分率(B)特征相似

图2 AFP－L3诊断肝癌的ROC曲线ROC曲线下面积0.9760

表2 AFP、AFP－L3检测对肝癌的诊断价值 (%)

3 讨 论

我国发现的肝癌绝大部分与慢性肝炎、肝硬化有关。在这些高危人群中进行跟踪随访，早期发现肝癌并及时治疗可以提高5年生存率［2］。肝癌的早期诊断是基于对长期患有慢性肝脏疾病的高危人群的跟踪筛查，目前临床主要通过腹部超声和血清AFP的检测对肝癌进行早期筛查。有研究显示，血清AFP对肝癌的阳性预测值达32%，腹部超声的阳性预测值达54%，可以看出目前临床所用方法对PHC的预测率不足。而AFP－L3对于肝癌的预测已经是一个非常有效的指标，其特异性达95%以上。FDA已于2005年批准检测该指标应用于肝癌诊断［7，8］。

本研究表明，仅以AFP水平作为肝癌诊断指标时，大量的肝硬化和慢性肝炎患者会出现假阳性结果，而以AFP－L3为诊断指标时，肝癌和肝硬化、慢性活动性肝炎可以得到有效区分(P＜0.01)。AFP－L3鉴别良恶性肝病的ROC曲线下面积为0.9760，敏感度为 91.03%，特异性为 95.83%。说明以AFP－L3≥10%为鉴别诊断指标时，肝癌和良性肝病可以得到明显区分。

目前，AFP－L3检测常用的方法有植物凝集素免疫交叉电泳技术，该方法技术要求高、操作繁琐、试剂昂贵，限制了AFP－L3检测在临床的应用。本研究采用亲和离心管法检测AFP－L3，原理为采用亲和离心柱技术分离出AFP－L3，然后再定量测定样本中AFP和AFP－L3含量，两者相比较即可得到患者血清中AFP－L3的比例，用于诊断肝癌。该方法实验室配套仪器只需要常温低速离心机即可，方法简便，操作简单，标本处理时间约为1 h，比原来电泳方法大大缩短了时间。标本处理后可以用多种AFP定量检测试剂检测，成本较低，同时结果准确，适合临床应用［9，10］。

总之，对肝癌的准确诊断是提高患者生存率和生活质量的重要前提。本研究利用亲和离心柱法检测AFP－L3，操作简便且节约了成本，用于肝癌的诊断有较好的敏感性和特异性。

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The detection of alpha－fetoprotein isoforms using with centrifugal column method in diagnosis of hepatocelluar carcinoma

DI Xiaohui1，ZHENG Fei2，XU Juan1，JIA Zhiling3，and LIU Yang4.1.Department of Pharmacology，Beijing Military Command General Hospital，BeiJing 100700，China;2.Department of pharmacy，No 302 Hospital of PLA，Beijing 100024，China;3.Department of oncology laboratory，Beijing Military Command General Hospital，BeiJing 100700，China;4.Department of Pharmacy，the General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces，Beijing 100039，China

ObjectiveTo explore the clinical significance of alpha－fetoprotein－L3%(AFP－L3)with centrifugal column method in the diagnosis of hepatocelluar carcinoma.Methods The serum samples of 150 patients with elevated AFP level(≥20 ng/ml)were detected by chemiluminescence immunoassay for AFP and centrifugal column method for AFP －L3，and the clinical value of AFP－L3 were studied in the differentiation diagnosis of hepatocelluar cancer.Results Taking AFP－L3≥10 ng/ml as the diagnositic criteria，the sensitivity of AFP － L3 was 91.03%(71/78)in 78 hepatocellular carcinoma patients and the specificity of AFP － L3 was 95.83%(69/72)in 72 other liver diseases patients.The diagnostic accuracy was 93.33% ［(71+69)/150］.Conclusion Detection of AFP －L3 seemed be of clinical value in benign or malignant liver disease.

alpha－fetoprotein isoforms;hepatocelluar;carcinoma;centrifugal column method

R446.112

邸晓辉，女，1961年出生。本科学历，副主任药师。主要从事新药临床研究工作。

1.100700 北京，北京军区总医院药理科;2.100024 北京，解放军302医院药学部;3.100700 北京，北京军区总医院肿瘤科实验室;4.100039 北京，武警总医院药剂科

刘 洋，E－mail:c2205@yahoo.cn

(2012－03－11收稿 2012－08－16修回)

(责任编辑 梁秋野)