DOG-1在胃肠道间质瘤中的表达及其临床意义

张秀梅 时 磊 王 海 王舒靖 朴正爱

胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors，GIST)是消化道常见的间叶源性肿瘤，起源于胃肠道Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)，遗传学上存在c-kit或血小板源性生长因子受体A(platelet-derived growth factor receptor A,PDGFRA)基因激活突变，组织学上主要由梭形和(或)上皮样细胞组成。本研究对61例GIST患者的肿瘤切除标本进行DOG-1检测，探讨其在GIST诊断及预后中的意义。

1 材料与方法

1.1 病例和标本

收集我院2005年1月1日～2012年2月29日经外科手术切除的食管、胃肠道、肠系膜及腹膜后并经病理检查证实为GIST的标本61例，其中男性25例，女性36例，年龄21～80岁，中位年龄52岁。肿瘤位于胃29例，小肠12例，大肠 9 例，肠系膜7 例,腹膜后2例，食管2例。其中复发及转移13例(复发8例，肝转移3例，腹膜转移2例)。复发转移病例经病理、CT、B超、X光检查4项中至少1项证实。同时收集我院外科手术切除的胃平滑肌瘤5例，神经鞘瘤3例。根据2002年美国国立卫生研究院NIH共识方案[1]，将61例GIST分为极低度及低度危险性21例，中度危险性18例，高度危险性22例。

1.2 试剂与方法

采用免疫组织化学EnVision法，兔抗人DOG-1、鼠抗人CD117单克隆抗体及EnVision试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。将入选病例的原发灶病理蜡块进行常规切片， 0．01 mol/L柠檬酸盐缓冲液高温高压修复，免疫组织化学染色。染色步骤严格按照说明书进行，DAB显色，苏木精复染细胞核。正常胃肠黏膜组织作为对照，同时用PBS代替一抗做空白对照。DOG-1和CD117均为细胞膜和(或)细胞质棕黄色着色。阴性：细胞阳性率<25%或肿瘤细胞不表达；弱阳性：细胞阳性率25%～50%；中度阳性：细胞阳性率51%～75%；强阳性：细胞阳性率>75%。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 11.5进行分析，率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著统计学意义。

2 结果

2.1 CD117及DOG-1在GIST中的表达

21例极低度及低度危险性GIST中，DOG-1阳性19例(90.5%)，CD117阳性20例(95.2%)，其表达差异无统计学意义(P>0.05)。40例中度及高度危险性GIST中，CD117为强阳性(100.0%)，DOG-1阳性39例(97.5%),表达差异亦无统计学意义(P>0.05)。胃平滑肌瘤及神经鞘瘤中DOG-1和CD117均为阴性，正常胃肠道黏膜组织中DOG-1和CD117均为阴性，空白对照组(PBS代替一抗)也均无表达。

2.2 DOG-1在GIST中的表达与临床病理特征的关系

DOG-1表达与GIST发生部位、肿瘤大小、分级和年龄无关；13例复发转移GIST中，3例均为DOG-1阴性，与GIST复发转移显著相关(P<0.01)，见表1。

表1 DOG-1表达与GIST临床病理特征的关系(例，%)

2.3 GIST组织病理学形态

61例GIST中主要由梭形细胞和(或)上皮样细胞按不同比例混合或单一组成。梭形细胞型细长，类似平滑肌细胞，呈束状、编织状或漩涡状排列，部分呈栅栏状排列，细胞核呈杆状，两端钝圆或呈长梭形；上皮样细胞呈圆形、卵圆形或多边形，呈弥漫状或巢状排列，胞质丰富，部分出现胞质空泡，呈印戒样细胞。高度危险性中肿瘤细胞多形性，核大，异型性明显，核分裂象多见。

3 讨论

GIST是消化道常见的间叶源性肿瘤[2],占消化道肿瘤的0.1%～3%。以往被认为是平滑肌瘤、平滑肌肉瘤或神经鞘瘤，直到1983年研究发现这类肿瘤缺乏平滑肌细胞和施旺细胞的超微结构和免疫表型特征，提出用GIST来命名此类肿瘤。

1998年首次发现GIST中表达KIT 蛋白和具有KIT基因突变[3],有学者认为GIST可能起源于胃肠道Cajal间质细胞(ICC)[4]。目前研究较多的是CD117和CD34、CD117是原癌基因c-kit的产物，是跨膜酪氨酸激酶受体，大约95%的GIST表达CD117[5]。大多数GIST中KIT高表达的同时伴随KIT基因外显子9、11、13或17突变[6,7]，这种突变导致配体不依赖受体激活，在免疫组织化学水平同样可以检测出来，这为证实GIST的诊断提供了非常有用的工具。本组研究61例GIST中极低度及低度危险性肿瘤21例，其阳性表达率为95.2%(20/21)，中度及高度危险性肿瘤40例，其阳性表达率为100%(40/40)，与文献报道结果一致[8]。

DOG-1基因是2004年West等[9]利用cDNA微阵列筛选出的1个选择性高表达与GIST有关的基因，定位于人染色体11q13上的CCD1-EMS1位点。近来被认为是钙调控的氯离子通道蛋白[10]。这个基因在许多肿瘤，包括头颈部、膀胱和乳腺肿瘤中存在扩增。尽管在许多肿瘤中发现DOG-1表达，但在GIST中的生物学功能和过表达机制尚不清楚。West等[9]提出ICC对DOG-1与KIT一样起免疫反应，这提示DOG-1可能在受体激酶Ⅲ信号传导通路中起作用。又有学者提出DOG-1可能是偶然发现的GIST表型标记物，与KIT和PDGFRA信号通路无关[11]。DOG-1在KIT和PDGFRA突变的GIST中高表达[9,12],这些为伊马替尼的治疗提供重要的临床价值，同时可能是GIST潜在的治疗靶点。Espinosa等[13]对DOG-1与CD117进行比较，发现DOG-1是GIST更加敏感和特异的标记物。而Miettinen等[12]研究了1168例不同部位和病理亚型的GIST及672个其它肿瘤及正常组织中DOG-1的表达，发现GSIT中DOG-1和KIT的总体敏感性几乎相同。本组研究中发现DOG-1无论在哪一级别的GIST都呈特异性的表达，21例极低度及低度危险组GIST，其阳性表达率90.5%(19/21)，40例中度及高度危险组GIST，其阳性表达率97.5%(39/40)。同时将DOG-1与CD117进行比较观察，发现在任何级别的GIST中DOG-1和CD117的表达差异均无统计学意义。DOG-1作为诊断GIST的1个新的标记物，目前文献报道较少，其在GIST中表达的预后意义尚不十分清楚。本研究发现DOG-1的表达与肿瘤发生部位、大小、分级和年龄均无关，而在13例复发转移病例中DOG-1阴性3例，与复发转移显著相关，与文献报道相一致[13,14]。这表明DOG-1在GIST的发展中起重要作用，可作为判断GIST预后的潜在参考指标。

综上所述，DOG-1在大多数GIST中高表达，对诊断GIST及判断预后提供潜在参考价值。

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