FOXP1和pVHL在肾透明细胞癌中的表达及意义

陈建欧，万丽，陈霖，黄卡特，吴秀玲

（1.温州市第八人民医院 病理科，浙江 温州 325000；2.温州医学院附属第一医院 病理科，浙江温州 325000）

肾细胞癌占成人肾脏恶性肿瘤的80%，居泌尿系统肿瘤第二位，每年全世界约9.5万人死于肾癌，约1/3肾癌患者初诊时已发生转移，其生物学行为极为多变，难以预测[1]。了解肾细胞癌的形成机制、提高预后评估水平对患者的治疗具有重要的意义。

基因变异在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，CCRCC）的发生中发挥重要的作用，尤其是染色体3p位点缺失或突变，可见于96%的散发性CCRCC，其中VHL基因（3p25）变异是CCRCC的典型特征。VHL基因通过其蛋白产物pVHL降解低氧诱导因子（HIF）、调节血管内皮生长因子（VEGF）等发挥抑制肿瘤的作用[2]。pVHL是一种多功能蛋白，不仅能抑制VHL依赖性肾细胞癌的生长，而且在维持p53稳定性、细胞内环境调节中亦起关键作用[3]。FOXP1属于叉头转录因子家属，位于3p14.1，是新近发现的候选肿瘤抑制基因，在细胞转录、分化和增殖过程中起重要作用。FOXP1在正常组织中主要表达于细胞核，而在肿瘤细胞中则可出现异常表达，即胞浆、胞膜或胞核、胞浆同时表达，除B细胞恶性淋巴瘤外[4]，FOXP1在其他各种肿瘤中的临床意义尚不清楚。据报道，CCRCC的FOXP1的表达率高达90%[5]。本研究旨在探讨FOXP1在CCRCC中的表达和定位情况，及其与临床病理参数和pVHL表达的相关性。

1 材料和方法

1.1 一般资料 收集2008年2月-2009年12月经病理确诊的CCRCC患者共48例，其中男38例，女10例，年龄32～68岁，平均52岁。临床表现为腰部不适、血尿21例，其余均为体检发现。肿块位于左肾31例，右肾17例，大小为3～8 cm。pT1期19例，pT2期15例，pT3/pT4期14例。病理分级：G1 10例，G2 25例，G3 13例。8例伴有淋巴结转移，10例伴出血和坏死。均行肾癌根治术。

1.2 检测方法 所有标本均经4%中性甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜观察。免疫组织化学染色采用Envision二步法。FOXP1特异性单克隆抗体（JC12抗体，由英国牛津大学Banham AH馈赠，工作浓度为1:80）及pVHL（北京中杉公司产品，工作浓度为1:50）两种免疫组化标记，操作均按说明书进行。以反应性增生的扁桃体作FOXP1阳性对照，以已知的肾透明细胞癌标本作pVHL阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。FOXP1染色结果判定：肿瘤细胞无表达定义为阴性，胞浆、胞核、胞膜表达定义为阳性；每例均选择表达最强区域计算阳性细胞数，定义1%～10%阳性细胞数为0（阴性），11%～30%为 1（弱表达），31%～70%为2（中度表达），>70%为3（强表达）[6]。pVHL染色结果判定：胞浆或胞膜浅黄至棕黄色为阳性，不着色为阴性。

1.3 统计学处理方法 使用SPSS12.0软件，FOXP1和pVHL两者表达与临床病理参数用x2和Fisher检验，两者的相关性用Speaman等级相关分析。

2 结果

2.1 FOXP1在CCRCC中的表达 正常肾组织中，近曲小管FOXP1胞浆阳性，远曲小管和集合管胞核呈阳性表达，肾小球和细段呈阴性或弱表达（见图1）。48例CCRCC患者中FOXP1阴性者8例（占16.7%），弱表达者23例（占47.9%），中至强表达者17例(占35.4%)，其中胞核、胞浆同时表达者9例，胞膜、胞浆同时表达者3例，余28例仅胞浆表达（见图2-3）。13例高级别CCRCC中有8例FOXP1阳性表达，而35例低级别CCRCC中有32例FOXP1阳性表达，高级别组明显低于低级别组，差异有统计学意义（P＜0.05），FOXP1在各临床分期中表达无明显差异（P＞0.05），在有淋巴结转移的CCRCC和无淋巴结转移的CCRCC病例中，FOXP1的表达无明显差异（P＞ 0.05）（见表1）。

2.2 pVHL在CCRCC中的表达 正常肾小管、肾小球pVHL呈弱表达。48例CCRCC患者中呈胞浆阳性者25例（占52.1%）（见图4）。pVHL表达与肿瘤分级、临床分期、淋巴结转移均无明显相关性（P＞0.05），见表1。

图1 FOXP1在正常肾组织中的表达情况（×200）

图2 CCRCC中FOXP1胞核与胞浆同时表达（×200）

图3 CCRCC中FOXP1胞膜与胞浆同时表达（×100）

图4 CCRCC中pVHL胞浆表达（×200）

2.3 FOXP1与pVHL表达的相关性 48例CCRCC中9例胞核、胞浆同时表达，此9例CCRCC中8例pVHL阳性，其余31例FOXP1非胞核、胞浆同时表达的CCRCC中17例pVHL阳性，FOXP1胞核表达与pVHL表达具有正相关关系（r=0.594，P＜0.05）。

3 讨论

FOXP1属于叉头/翼状转录因子FOX家族成员之一，其cDNA开放读码区包含677个氨基酸，由质粒pAB195cDNA序列的249～2279个核苷酸编码。据动物及体外实验等结果报道，FOXP1具有广泛的功能，从调节B细胞发育、单核细胞分化到促进心肌细胞和肺的发育[6-7]。FOXP1在不同器官中功能不同，FOXP1基因敲除会导致胚胎鼠死亡，而缺乏FOXP1表达的心肌增殖活性增加[7]。

表1 FOXP1、pVHL表达与临床病理参数的关系

FOXP1在不同的组织中其蛋白表达的水平及定位也不同，如在次级淋巴滤泡中，大部分边缘区B细胞呈阳性表达，而生发中心B细胞中FOXP1蛋白的阳性表达率在10%～50%之间[7]；正常肾组织近曲小管中FOXP1胞浆阳性表达，在远曲小管和集合管中胞核呈阳性表达，肾小球和细段中呈阴性或弱表达[6]。不仅如此，FOXP1在不同的肿瘤中其临床意义也不同，在弥漫大B细胞淋巴瘤中胞核过表达预示肿瘤预后较差；在MALT型淋巴瘤中胞核高表达预示肿瘤恶性转化[4]；在乳腺癌中胞核表达与雌激素受体密切相关，且预示患者无瘤生存时间较长[8]。FOXP1蛋白在细胞中定位的区分化以及多种生物学功能意味着FOXP1转录因子在不同肿瘤中存在不同的调节机制。

本研究通过免疫组织化学方法检测FOXP1在48例CCRCC中的表达及定位，结果发现，其阳性表达率为83.3%，与Toma等[5]对22例CCRCC研究发现FOXP1蛋白表达率达90%的结果基本一致。FOXP1在肿瘤细胞中既有胞浆表达又有胞膜表达或胞核、胞浆同时表达，表明FOXP1参与CCRCC的发生，其蛋白定位的不同提示FOXP1在CCRCC中存在着多种发生机制。本研究还发现，FOXP1在低级别CCRCC中表达率明显高于高级别的CCRCC，表明FOXP1与CCRCC恶性程度有关。

3号染色体短臂（3p）的杂合性缺失是CCRCC常见的基因事件，研究已经发现此区存在多个肿瘤抑制基因，如VHL（3p25）、DUTTI/ROBO1（3p12-13）、FHIT（3p14.1）和FOXP1（3p14.1）等，其中VHL变异是CCRCC特征性的基因改变，多数基因的功能发挥有赖于此基因的失活[2，9]，因此VHL基因被认为是“看家”基因。VHL mRNA编码的蛋白pVHL包含213个氨基酸残基，仍保留了肿瘤抑制功能。pVHL通过与elongins B、elongins C等结合形成VEC-E3泛素连接酶复合物，降解HIF-1途径抑制肿瘤生长，这一作用机制已被证实，并已应用于临床治疗。除此以外，pVHL还能促进肾细胞分化与生长，通过Mdm2途径修复DNA酶，而且在维护P53核因子的稳定，调节纤维连接蛋白基质信号，以及细胞内环境调节中起关键作用[2-3]。本实验结果显示，CCRCC中 pVHL阳性表达率为52.1%，呈胞浆和胞膜表达。而Magyarlaki等[10]报道CCRCC中pVHL阳性表达率为71.6%，多为胞膜表达，胞浆表达多见于高级别CCRCC，两者结果稍有差异。本研究发现pVHL与CCRCC的临床分期、病理分级、淋巴结转移均无关，提示pVHL异常仅在部分CCRCC形成中起关键作用。

本研究还发现9例FOXP1胞核、胞浆同时阳性的CCRCC中8例pVHL阳性。而Banham等[7]研究10例CCRCC、1例嫌色细胞癌及1例乳头状肾细胞癌，发现FOXP1阳性定位既可在胞核，也可在胞浆或两者均有，同时发现4例伴有VHL基因突变或VHL综合征的CCRCC中3例FOXP1呈胞核表达，与本研究结果类似，推测FOXP1可能单独或依赖于VHL基因的缺失或突变，调节促进CCRCC的发生发展。至于FOXP1是否如已经证实的P53肿瘤抑制蛋白的胞核运输一样[11]，在pVHL调节下改变了转录方式，需做进一步探讨。

综上所述，FOXP1在CCRCC中存在高表达，可能参与肿瘤形成的早期阶段，其胞核表达与pVHL蛋白的相关性值得我们进一步探讨。

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