盐酸普鲁卡因注射液稳定性考察

尤本明，宋洪杰

(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)

盐酸普鲁卡因注射液稳定性考察

尤本明，宋洪杰

(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)

目的考察温度和湿度对普鲁卡因注射液的稳定性影响。方法取3批供试品，在温度(40±2) ℃、相对湿度(75±5)% 的条件下，分别取放置0、2、4、6个月的样品。用高效液相色谱法测定盐酸普鲁卡因注射液中盐酸普鲁卡因和其降解产物对氨基苯甲酸的含量。结果普鲁卡因注射液中盐酸普鲁卡因的含量随时间延长逐渐下降，6个月下降了10.42%，降解产物对氨基苯甲酸随时间延长逐渐增加，6个月增加了412.89%。结论普鲁卡因注射液在温度(40±2) ℃和相对湿度(75±5)%条件下不稳定。

盐酸普鲁卡因注射液；稳定性；对氨基苯甲酸；高效液相色谱法

普鲁卡因注射液临床广泛适用于浸润麻醉、外周神经(丛)阻滞，能阻断神经纤维传导，具有麻醉作用，用于局部麻醉。盐酸普鲁卡因易受外界因素如温度、湿度等因素的影响，产生降解产物对氨基苯甲酸。笔者动态测定盐酸普鲁卡因和降解产物对氨基苯甲酸的含量变化情况，来考察温度和湿度对1%普鲁卡因注射液稳定性的影响。

1 材料和仪器

1．1材料 普鲁卡因注射液(第二军医大学长海医院自制，规格10 ml /支，每100 ml 中含有盐酸普鲁卡因1.0 g，批号为090902、090904、090908)；盐酸普鲁卡因(含量99.5%，辽源市百康药业有限责任公司，批号090502)；对氨基苯甲酸(含量99.5%，上海五联化工厂，批号870828)； 氢溴酸加兰他敏(含量98.0%，浙江康恩贝制药股份有限公司)；SDS(含量99.0%，美国Amresco.lnc公司)；乙腈(色谱纯，美国TEDIA公司)；双蒸水(本院制剂室提供)；磷酸、磷酸二氢钾等其他试剂均为分析纯。

1．2仪器 LC-10A vp高效液相色谱仪(日本岛津制作所，包括LC-10ATvp泵、SPD-10Avp紫外检测器、CLASS vp色谱工作站和SCL-10Avp系统控制器)；调温调湿箱(上海实验仪器厂有限公司，302A型)；FA-2004电子天平(万分之一，上海天平仪器厂)；电子天平(十万分之一，Sartorius)；精密酸度计(上海天达仪器有限公司)。

2 方法和结果

2．1取3批样品(批号分别为090902、090904、090908)置于调温调湿箱中。参数设定为温度(40±2) ℃，相对湿度(75±5)%，分别测定盐酸普鲁卡因和降解产物对氨基苯甲酸在0月份、2月份、4月份和6月份时的含量。

2．2溶液的制备

2．2．1内标溶液的配制 精密称取氢溴酸加兰他敏2 mg，置于50 ml量瓶中，用水稀释至刻度，配成40 μg/ml氢溴酸加兰他敏溶液。

2．2．2对照品溶液的配制 精密称取盐酸普鲁卡因对照品10 mg，对氨基苯甲酸对照品4 mg，分别置于100 ml量瓶中，用水稀释至刻度，配成含100 μg/ml盐酸普鲁卡因和40 μg/ml对氨基苯甲酸的对照品贮备液。

2．2．3供试品溶液的配制 精密量取1%普鲁卡因注射液0.1 ml，置于100 ml量瓶中，用水稀释至刻度。精密量取稀释液2.0 ml和内标溶液0.1 ml，混匀即得供试品溶液。

2．2．4阴性样品溶液的制备 除盐酸普鲁卡因外，其他原料按处方比例配制，按制剂工艺制备阴性样品溶液。

2．3色谱条件和系统适用性实验 色谱柱为Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特科学仪器有限公司)；流动相为乙腈 0.05 mol/L-磷酸二氢钾溶液(内含3 μmol/LSDS，用磷酸调pH 至2.5)45:55，以氢溴酸加兰他敏为内标，流速为1.0 ml/min，紫外检测波长为283 nm，进样量为20 μl，柱温为室温[1, 2]。

取阴性样品溶液、对照品溶液和供试品溶液分别进样，得到色谱图(见图1)。由图1可见，降解产物对氨基苯甲酸、内标氢溴酸加兰他敏和盐酸普鲁卡因的保留时间分别为2.168、4.193和5.849 min，阴性对照不干扰测定。

图1 1%普鲁卡因注射液的色谱图

2．4标准曲线 分别取两种对照品贮备液适量，用水稀释，配成系列浓度的对照品混合溶液。盐酸普鲁卡因浓度分别为0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0 μg/ml ，对氨基苯甲酸浓度分别为0.025、0.05、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5 μg/ml。精密量取各浓度对照品溶液2.0 ml和内标溶液0.1 ml，混匀即得对照品溶液。按“2．3”项下色谱条件进样，记录峰面积。以浓度(C)为横坐标，对氨基苯甲酸或盐酸普鲁卡因峰面积与氢溴酸加兰他敏峰面积比值(y)为纵坐标，求回归方程。对氨基苯甲酸浓度在0．025～1.5 μg/ml范围内，回归方程为y=4.863C+0.018(n=7，r=0.999 8)；盐酸普鲁卡因浓度在0.5～30 μg/ml范围内，回归方程为y=2.290 7C+0.036(n=7，r=0.999 9)。

2．5加样回收率实验 精密吸取已知含量的盐酸普鲁卡因液适量，分别加入含盐酸普鲁卡因(3.325 0、6.650 0、13.30 μg/ml)和对氨基苯甲酸(0.037 5、0.075 0、0.150 0 μg/ml)的低、中、高混合对照品适量，按供试品溶液的配制方法操作，进样，计算加样回收率。结果盐酸普鲁卡因的平均加样回收率为(100.06±1.51)%、(101.66±0.31)%、(100.99±0.32)%(n=3)，对氨基苯甲酸的平均加样回收率为(100.53±1.67)%、(100.71±1.09)%、(101.64±1.50)%(n=3)。

2．6精密度实验 分别吸取盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸对照品贮备液适量，配成3组内含盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸浓度分别为1.0和0.05 μg/ml、10.0和0.5 μg/ml 、20.0和1.0 μg/ml的对照品混合溶液。精密量取上述低、中、高对照品溶液各2.0 ml，加入内标溶液0.1 ml，混匀后按2．3项下色谱条件进样，每组浓度重复测定3次；样品放置3 d，每天进样1次，记录峰面积，分别进行日内精密度和日间精密度考察。日内精密度：盐酸普鲁卡因低、中、高浓度的RSD分别为1.60%、1.17%和0.91% (n=3)；对氨基苯甲酸低、中、高浓度的RSD分别为1.28%、1.46%和0.58% (n=3)。日间精密度：盐酸普鲁卡因低、中、高浓度的RSD分别为1.85%、1.64%和1.18% (n=3)；对氨基苯甲酸低、中、高浓度的RSD分别为1.60%、1.90%和0.96% (n=3)。

2．7重复性实验 取1%普鲁卡因注射液(批号090902)的供试品溶液5份，按“2．2．3”项下操作，进样，测定峰面积并计算含量，盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸的RSD分别为0.13%和0.72% (n=5)。

2．8稳定性实验 在供试品溶液配制后的8 h内，每隔2 h测定一次，盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸的RSD分别为0.29%和0.88% (n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2．9样品测定 3个批号的1%普鲁卡因注射液，分别取放置0、2、4、6个月的样品，按“2．2．3”项下操作，进样，代入线性回归方程，测定盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸的含量，结果见表1，普鲁卡因注射液中盐酸普鲁卡因的含量随时间延长逐渐下降，6个月下降了10.42%，降解产物对氨基苯甲酸随时间延长逐渐增加，6个月增加了412.89%。以盐酸普鲁卡因、对氨基苯甲酸含量以及二者的比值对时间作图，如图2所示。可见对氨基苯甲酸的含量随时间变化曾明显增加，而盐酸普鲁卡因随时间变化含量降低较为明显，同时二者的比值随时间增加显著增加。

表1 盐酸普鲁卡因注射液稳定性考察结果

注：存放条件为温度(40±2)℃，相对湿度 (75±5)%

图2 盐酸普鲁卡因、对氨基苯甲酸含量以及二者的比值随时间的变化趋势图

3 讨论

本实验建立了普鲁卡因注射液中盐酸普鲁卡因和降解产物对氨基苯甲酸的含量的测定方法。实验过程中发现SDS和乙腈在流动相中的比例是影响盐酸普鲁卡因出峰时间的主要因素。特别是SDS影响较显著，在无SDS条件下，乙腈-缓冲盐比例为45:55时，二者同在2.1 min出峰，峰不能分离，增加缓冲盐至80%时，对氨基苯甲酸保留时间为3.1 min，盐酸普鲁卡因保留时间为3.6 min，但峰形较差；当缓冲盐中加入3 μmol/L的SDS时，在乙腈-缓冲盐比例为45:55条件下，对氨基苯甲酸保留时间为2.1 min，盐酸普鲁卡因为5.8 min，增加缓冲盐至65%时，对氨基苯甲酸保留时间为3.1 min，而盐酸普鲁卡因则增至13.8 min。实验还考察缓冲盐pH对各组分保留时间影响，无明显变化。在波长的考虑上兼顾对氨基苯甲酸和盐酸普鲁卡因的测定需要，选用283 nm作为检测波长。

彭贤东和唐志立[3]曾报道室温留样条件下盐酸普鲁卡因注射液放置1 年含量为97. 46 %，放置2 年为91. 63 %。在本实验中，盐酸普鲁卡因在6个月时间内业已下降了10.42%，考虑温度可能是影响盐酸普鲁卡因注射液稳定性的主要因素之一。关于降解产物对氨基苯甲酸的含量变化情况未见报道，而2010版《中国药典》对盐酸普鲁卡因注射液检查项下对此有明确要求[4]。精密量取本品适量，用水定量稀释制成每1 ml中含盐酸普鲁卡因0. 2 mg的溶液，作为供试品溶液；取对氨基苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量制成每1 ml中含2.4 μg的溶液，作为为对照品溶液。照液相色谱法测定，供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸保留时间一致的色谱峰，按外标法计算，不得过标示量的1.2%。在6个月时间内其降解产物对氨基苯甲酸和盐酸普鲁卡因所占比从开始0.41%增加到2.32%，增加了465.85%，详见表一。4个月样品其对氨基苯甲酸和盐酸普鲁卡因含量的比值已经超过1.2%。0月时的样品中降解产物对氨基苯甲酸与盐酸普鲁卡因比值为0.40%，说明1%普鲁卡因注射液在配制过程中盐酸普鲁卡因业已有降解，这主要是由于盐酸普鲁卡因的分子结构中含有酯键，在溶液状态下容易水解的缘故。虽然盐酸普鲁卡因在血浆中大部分被水解成对氨基苯甲酸，但制剂中降解产生的对氨基苯甲酸对临床应用是利是弊，尚待进一步研究。

[1] 叶 卿，宋洪杰，石力夫. 用RP-HPLC法测定心肌保护液中盐酸普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸的含量[J]. 药学服务与研究， 2009，9(1)：40.

[2] 祝清兰，李方实.普鲁卡因分析方法的研究进展[J]. 华西药学杂志，2004 ，19(1) ：51.

[3] 彭贤东，唐志立. 盐酸普鲁卡因注射液的稳定性考察[J]. 现代医药卫生，2005，21(12)：1500.

[4] 中国药典2010 年版.二部[S] .2010：794.

2010-07-22

[修回日期]2010-12-15

Investigationonstabilityofprocainehydrochlorideinjection

YOU Ben-ming, SONG Hong-jie

( Department of Pharmacy, Changhai Hospital ,Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)

ObjectiveTo investigate the effect of temperature and humidity on the stability of procaine hydrochloride injection.MethodsThree batches of the test samples were stored in condition of 40±2 centigrade, relative humidity 75%±5% for 0 month,2 months, 4 months and 6 months respectively. Contents of procaine hydrochloride and its degradation product p-amino benzoic acid were determined in procaine hydrochloride injection by RP-HPLC.ResultsThe content of procaine hydrochloride injection gradually decreased by 10% in 6 months, degradation products p-amino benzoic acid gradually increased by 412.89% in 6 months.ConclusionProcaine hydrochloride injection was instability in 40±2 centigrade and 75%±5% relative humidity condition.

procaine hydrochloride injection；stability；P-Amino benzoic acid；HPLC

尤本明(1982-)，男，药师. Tel:(021)81873724.

宋洪杰.E-mail:hjsong123@yahoo.com.cn.

R971+.2;R94

A

1006-0111(2011)02-0125-03