鲍鱼性腺多糖的体内抗氧化活性

2011-11-20 03:09娜,薇,明,
大连工业大学学报 2011年3期
关键词:鲍鱼性腺活力

刘 娜, 朱 蓓 薇, 孙 黎 明, 刘 俊 荣

(1.大连工业大学 食品学院,辽宁 大连 116034;2.大连海洋大学 食品工程学院,辽宁 大连 116023)

0 引 言

鲍鱼多糖是鲍鱼重要的生理活性物质之一。沈鸣[1]、陈倩 超[2]、许 东 晖[3]及 王 兵[4-5]等 研 究 发现,鲍鱼多糖具有增强免疫力、抗肿瘤等作用。本课题组殷红玲等[6]对鲍鱼肉中多糖的提取工艺进行了研究,李冬梅[7]、程婷婷[8-9]等研究了鲍鱼脏器多糖的提取条件,李韬等[10]从鲍鱼性腺中提取多糖并研究了其体外抗氧化活性,为鲍鱼的综合开发及深入研究奠定了理论基础。本研究以鲍鱼性腺为主要原料,采用酶促水解、乙醇醇沉等方法提取鲍鱼性腺中的多糖并研究其体内抗氧化活性,旨在为鲍鱼性腺多糖类功能产品的开发提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 原料与试剂

皱纹盘鲍性腺,由大连獐子岛渔业集团股份有限公司提供。总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、单胺氧化酶(MAO)、过氧化氢酶(CAT)试剂盒,均由南京建成生物工程研究所提供。

昆明种小白鼠,30只,雌性,18~22g;SD 大鼠42只,雌性,180~220g;购自大连医科大学实验动物中心。

1.2 试验方法

1.2.1 鲍鱼性腺多糖的提取

以新鲜鲍鱼性腺为原料,加入3倍体积的水煮沸,用6mol/L 的NaOH 调pH 值为10.0,加入2.0%的碱性蛋白酶,45 ℃酶解3h后迅速升温至90 ℃维持10 min灭酶,冷却至室温调pH为中性,离心10min(4 000r/min),取上清液即得多糖水溶液,然后加入3倍体积95%的乙醇醇沉12h,离心取沉淀。复溶后离心去杂质。上清液冷冻干燥待用,即鲍鱼性腺多糖(CAGP)。CAPG 中含糖37.1%、蛋白19.7%、硫酸根19.31%、糖醛酸14.69%。

1.2.2 CAGP对正常小鼠抗氧化能力的影响

30只昆明种小鼠随机分成3组,生理盐水对照组(NS组)、阳性对照组(VC1g/kg,用前新鲜配制)、CAGP 组(200 mg/kg)。连 续 灌 胃 给 药15d。末次给药后摘眼球取血制备血清,颈椎脱臼法处死小鼠,取肝脏和脑,检测血清和肝脏MDA、肝脏T-AOC和CAT 及脑组织MAO。

1.2.3 CAGP对高脂血症大鼠抗氧化损伤能力的影响

采用自行配制的高脂饮食(猪油15%+胆固醇6%+胆盐3号2%+丙基硫氧嘧啶0.2%)给雌性SD 大鼠灌胃。每只大鼠灌胃2mL,连续灌胃20d。根据血清甘油三酯含量,取24 只雌性SD 大鼠,随机分为3 组,阳性对照组(血脂康200mg/kg)、CAGP组(200 mg/kg)及阴性对照组(生理盐水),另取同批次未饲喂高脂饮食大鼠8只作为正常对照组(生理盐水)。各组腹腔注射连续给药40d。

于第37天,除正常对照组外,其他3组大鼠均腹腔注射四氧嘧啶,200mg/kg。72h后,用乙醚麻醉,腹腔主动脉取血,检测血清MDA 与SOD 以及肝脏的T-AOC。

1.2.4 统计学方法

数据以(平均值±标准偏差)表示。采用SPSS 12.0统计学软件对各组数据进行单因素方差分析(One-way AVOVA),P<0.05 为有统计学差异,P<0.01表示差异极其显著。

2 结果与分析

2.1 CAGP对正常小鼠抗氧化能力的影响

2.1.1 血清及肝组织中的MDA 含量

丙二醛是氧自由基损伤组织或细胞导致脂质过氧化的代谢产物,因此丙二醛浓度越低,脂质过氧化程度越低,机体抗氧化能力就越强。由表1可以看出,多糖组和VC组血清和肝组织中的丙二醛浓度均明显低于NS组(P<0.01)。上述结果表明,CAGP 可有效降低血清及肝组织中MDA 的形成,减少细胞膜脂质过氧化。

表1 CAGP对正常小鼠抗氧化能力的影响Tab.1 The effect of CAGP on the antioxidant capability of normal mice

2.1.2 脑组织中的MAO 活力

脑组织匀浆中单胺氧化酶数据分析如表1所示。MAO 是催化芳香族、脂肪族单胺类氧化脱氨基反应的酶,主要是调节单胺类递质的含量。随着年龄的增长,体内MAO 活性逐渐增强,继而氧自由基生成增多,促进神经系统老化[12]。如表1 所示,多糖组的MAO 活力明显低于NS 组(P<0.01),证明CAGP 可有效降低脑组织中单胺氧化酶的活力,具有抗氧化活性。

2.1.3 肝脏T-AOC

体内具有还原能力的抗氧化物质可将Fe3+还原成Fe2+,后者与菲啉类物质形成稳定的络合物,其含量可反映出机体总抗氧化能力的高低。如表1所示,CAGP 组及Vc组的T-AOC 较NS组显著增强。

2.1.4 肝组织中CAT 活力

过氧化氢酶是一种酶类清除剂,是以铁卟啉为辅基的结合酶。它可促使H2O2分解为分子氧和水,清除体内的过氧化氢,从而使细胞免于遭受H2O2的毒害,是生物防御体系的关键酶之一。如表1所示,多糖组中CAT 活力明显高于NS组和阳性对照组,表明CAGP可显著提高体内CAT 活力。

2.2 CAGP对高脂血症大鼠抗氧化损伤能力的影响

2.2.1 血清中SOD 活力

机体代谢过程中会产生各种自由基,过量的自由基可造成细胞和组织损伤。生物进化过程中,为消除过多自由基,机体已经产生了一套完整而精细的防护体系。首要防御体系为生物体内的各种抗氧化酶,例如SOD,其活力的高低可以表征机体抗氧化损伤能力的强弱。如表2所示,阴性对照组血清SOD 活性明显低于正常对照组(P<0.01),说明四氧嘧啶可明显降低机体抗氧化酶的活力。CAGP 组的SOD 活性明显高于阴性及阳性对照组(P<0.01),提示CAGP对氧化损伤具有一定的防御作用。

表2 CAGP对高脂血症大鼠体内抗氧化能力的影响Tab.2 Protective effect of CAGP against oxidative damage in hyperlipidemia rats

2.2.2 血清中MDA 含量

由表2可以看出阴性对照组血清MDA 浓度明显高于正常对照组(P<0.01),说明四氧嘧啶造成大鼠氧化损伤,产生大量脂质过氧化代谢产物。CAGP组MDA 浓度明显低于阴性对照组(P<0.01),而与正常对照组的浓度接近。这说明CAGP可抵御四氧嘧啶造成的氧化损伤。

2.2.3 血清T-AOC

如表2 所示,阴性对照组T-AOC 明显低于正常对照组(P<0.01),说明四氧嘧啶造成大鼠T-AOC 显著降低。CAGP 组的T-AOC 明显高于阴性及阳性对照组(P<0.01),表明,CAGP还可以提高氧化损伤大鼠的T-AOC,从而抵御氧化剂造成的氧化损伤。

3 结 论

研究结果显示,CAGP 可以显著提高正常小鼠肝组织CAT 活力及T-AOC,降低其血清及肝脏MDA 含量及脑组织MAO 活力。此外,CAGP还可以显著降低四氧嘧啶致高脂大鼠的氧化损伤程度,可提高其血清SOD 活力及肝脏T-AOC,并降低其血清MDA 含量。因此,CAGP 具有较强的体内抗氧化作用。

[1]沈鸣,陈建伟.氨基多糖的药理研究进展[J].上海医药,2001,22(6):268-269.

[2]陈倩超.鲍鱼多糖的提取及抗肿瘤试验[J].中国现代应用药学,1998,15(1):8-10.

[3]许东晖,王兵,许实波,等.鲍鱼多糖对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞活性及迟发型超敏反应的作用[J].中药材,1999,22(2):88-89.

[4]王兵,许东晖,许实波,等.鲍鱼多糖对环磷酰胺的增效减毒作用[J].中药材,1999,22(4):198-200.

[5]王兵,蒋建敏,许东晖,等.鲍鱼多糖对人鼻咽癌裸鼠抗癌作用的研究[J].中草药,2000,31(8):597-599.

[6]殷红玲,杨静峰,李冬梅,等.酶法提取鲍鱼多糖的研究[J].食品与发酵工业,2006,32(12):158-160.

[7]李冬梅,谭风芝,杨静峰,等.皱纹盘鲍脏器多糖的分离纯化及鉴定[J].水产科学,2007,26(9):485-488.

[8]程婷婷,李冬梅,李韬,等.鲍鱼脏器多糖提取条件的研究[J].食品工业科技,2008(6):208-211.

[9]程婷婷,李冬梅,刘娜,等.一种鲍鱼脏器多糖的鉴定及活性研究[J].中国海洋药物,2008,27(2):9-13.

[10]李韬,周大勇,杨静峰,等.皱纹盘鲍性腺多糖抗氧化活性研究[J].水产科学,2009,28(4):179-182.

[11]金宗濂.功能食品评价原理与方法[M].北京:北京大学出版社,1995:168.

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