油酰乙醇胺对高脂血症大鼠降血脂及肝脏的保护作用

陈 博，沈燕慧，卢 伟，朱 浩，孙丽娟，唐杨顺，赵 云，田 风，金 鑫

(厦门大学 医学院，福建 厦门 361005)

油酰乙醇胺(OEA)是动物体内的一种脂肪酸乙醇胺类化合物，是过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)的一个具有高亲和性的天然配体［1］。PPARα的合成配体已成为治疗高脂血症和动脉粥样硬化等疾病的一线药物［2］，但长期应用该类药物易引起肝脏损伤［3］。因此，寻找降血脂效果明显且毒副作用少的新型PPARα激动剂具有积极的临床意义。近年来研究表明，OEA具有抑制食欲和抗肥胖等作用［1］，但其对血脂代谢及肝脏的影响少见报道。本研究旨在观察OEA对高脂血症模型大鼠血脂代谢、肝脏脂质水平及过氧化脂质的影响，为进一步研究OEA的药理作用提供依据。

1 材料

OEA，厦门大学医学院药学系合成;胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒，北京北化康泰试剂有限公司;考马斯亮蓝、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒，南京建成生物工程研究所。

雄性SD大鼠，体重(100±5)g购于上海斯莱克动物实验中心，许可证号:SCXK(沪)2007-0005。

SpectraMax-M2多功能酶标仪，美国分子仪器公司;CM 1850 UV冰冻切片机，德国莱卡公司;ECLIPSE 50I倒置显微镜，日本尼康公司。

2 方法

2.1 造模与分组

动物于实验前适应性饲养1周。大鼠按血脂水平随机分成5组:即正常对照组，模型对照组，OEA低、中、高剂量组。正常对照组给予普通饲料，其余各组均给予高脂饲料造模。高脂饲料组成为［4-5］:2%胆固醇、0.5%胆酸钠、10%猪油、5%黄豆、5%蔗糖、77.5%基础饲料。造模14 d后，各治疗组分别腹腔注射OEA(10，20，30mg/kg)，正常对照组和模型对照组给予生理盐水，1次/d。正常对照组继续给予普通饲料，其他组继续给予高脂饲料，持续21 d。每周测定体重，动物处理前12 h禁食不禁水，然后以4%水合氯醛10mL/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，取肝脏称重后保存于－80℃，供肝组织生化指标测定用。另取相应部位肝脏分别以4%多聚甲醛溶液固定，病理切片观察肝组织中脂肪沉积情况。

2.2 血清指标和肝脏系数测定

血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT 按试剂盒说明测定。肝脏系数=肝重(g)/鼠重(100 g)。

2.3 组织学观察

肉眼观察肝脏后，每鼠取肝脏相应部位迅速制作冰冻切片，油红O染色，200倍光镜下观察脂质在肝脏组织中的沉积，脂肪为红色着色。

2.4 肝脂质和肝组织中MDA、GSH-Px测定

每鼠称取相应部位肝组织200mg，加三氯甲烷-甲醇(1∶1)至2mL后冰浴匀浆，匀浆液于4℃静置24 h后，3 000 r/min离心10 min，室温放置12 h以上挥去上层液体，抽干残余液体，加入无水乙醇1mL，取上清分别按试剂盒方法测定肝中的TC和TG含量［6］。另称取相应部位肝组织200mg，加冰生理盐水2mL匀浆，离心取上清，分别按试剂盒方法测定MDA、GSH-Px和蛋白含量。

2.5 统计学处理

采用Graphpad Prism 5(GraphPad Software Inc，USA)软件进行分析，所有数据以(±s)表示，两组间样本均数比较采用t检验。

3 结果

3.1 OEA对高脂血症大鼠血脂代谢的影响

与正常对照组相比较，高脂血症模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C明显升高(P＜0.01)，HDL-C明显降低(P＜0.01)，表明大鼠高脂模型造模成功。连续给药21 d后，OEA能明显地降低高脂血症大鼠血清 TC、TG、LDL-C 的水平(P＜0.01)，同时对血清HDL-C有一定的升高作用(P＜0.01)。见表1。

表1 OEA对高脂血症大鼠血脂水平的影响(n=10，±s)Tab.1 Effect of OEA on serum lipid levels in hyperlipidemic rats(n=10，±s)

表1 OEA对高脂血症大鼠血脂水平的影响(n=10，±s)Tab.1 Effect of OEA on serum lipid levels in hyperlipidemic rats(n=10，±s)

与模型对照组相比:1P＜0.05，2 P＜0.01 1P＜0.05，2 P＜0.01 vs model group

组 别 剂量/(mg/kg) TG/(mmol/L) TC/(mmol/L) HDL/(mmol/L) LDL/(mmol/L)正常对照组模型对照组OEA低剂量组OEA中剂量组OEA高剂量组－－1 0 20 30 0.34±0.082 1.65±0.46 1.18±0.471 0.69±0.172 0.50±0.182 1.19±0.242 5.87±1.84 5.31±1.39 3.53±0.982 3.38±1.292 1.05±0.192 0.53±0.07 0.66±0.24 0.78±0.102 0.84±0.212 0.73±0.162 2.46±1.47 1.82±1.39 0.91±0.651 0.74±0.582

3.2 OEA对高脂血症大鼠体重、肝重、肝脏系数及肝功能指标的影响

与正常对照组相比较，高脂血症模型组大鼠血清ALT水平、肝重和肝脏系数明显升高(P＜0.05或0.01)。连续给药21 d后，OEA能明显降低高脂血症大鼠血清ALT、体重、肝重和肝脏系数(P＜0.05或 0.01)。见表2。

3.3 OEA对高脂血症大鼠肝组织中TC、TG、MDA和GSH-Px的影响

与正常对照组相比较，高脂血症模型组大鼠肝组织中TC、TG和MDA明显升高(P＜0.01)，GSHPx明显降低(P＜0.01)。连续给药21 d后，OEA能明显降低高脂血症大鼠肝组织中TC、TG和MDA水平(P＜0.05或 0.01)，升高 GSH-Px活力(P＜0.01)。见表3。

3.4 组织学观察

肉眼观察空白对照组肝组织无异常变化，模型对照组肝组织呈无光泽的灰黄色，肝脏体积明显增大;OEA各剂量组肝组织颜色较空白对照组颜色稍浅，光泽度稍差，体积较模型对照组减小。肝脏冰冻切片脂质染色结果表明，空白对照组肝细胞内基本未见脂滴，基本无着色;模型对照组肝细胞内可见大量脂滴，呈大面积着色，其中肝小叶中央区着色较深，边缘略浅;OEA各剂量组大鼠肝细胞内脂滴较模型对照组有所减少，着色面积和深度随剂量增加有减少趋势。见图1。

表2 OEA对高脂血症大鼠血清ALT、体重、肝重和肝脏系数的影响(n=10，±s)Tab.2 Effect of OEA on serum ALT，body weight，hepatic weight，and coefficient of hepatic weight in hyperlipidemic rats(n=10±s)

表2 OEA对高脂血症大鼠血清ALT、体重、肝重和肝脏系数的影响(n=10，±s)Tab.2 Effect of OEA on serum ALT，body weight，hepatic weight，and coefficient of hepatic weight in hyperlipidemic rats(n=10±s)

与模型对照组相比:1 P＜0.05，2 P＜0.011 P＜0.05，2 P＜0.01 vs model group

组 别 剂量/(mg/kg) 体重/g 肝重/g 肝脏系数/(g/100 g) ALT/(u/L)正常对照组模型对照组OEA低剂量组OEA中剂量组OEA高剂量组－－1 0 20 30 277±14 286±23 251±262 245±142 230±312 12.0±0.82 16.1±1.3 12.6±1.62 12.1±1.62 11.6±1.52 4.33±0.172 5.65±0.47 5.09±0.87 4.85±0.711 4.72±0.602 27.5±7.91 41.6±16.6 30.9±6.5 19.8±10.72 17.1±7.32

表3 OEA对高脂血症大鼠肝组织中TC、TG、MDA和GSH-Px的影响(n=10，±s)Tab.3 Effect of OEA on liver tissue TC，TG，MDA and GSH-Px in hyperlipidemic rats(n=10，±s)

表3 OEA对高脂血症大鼠肝组织中TC、TG、MDA和GSH-Px的影响(n=10，±s)Tab.3 Effect of OEA on liver tissue TC，TG，MDA and GSH-Px in hyperlipidemic rats(n=10，±s)

与模型对照组相比:1 P＜ 0.05，2 P＜ 0.011 P＜ 0.05，2 P＜ 0.01 vs model group

组 别 剂量/(mg/kg)TC/(mg/g)TG/(mg/g)MDA/(μmol/g Prot)GSH-Px/(u/mg Prot)正常对照组模型对照组OEA低剂量组OEA中剂量组OEA高剂量组－－1 0 20 30 0.91±0.142 4.28±0.52 4.20±0.48 4.08±0.42 3.63±0.551 4.03±0.962 14.03±2.73 7.98±3.082 7.58±2.132 7.51±2.352 1.56±0.242 2.56±0.77 1.64±0.302 1.61±0.242 1.61±0.412 578.3±95.12 429.2±34.9 492.3±27.92 527.5±42.42 589.4±75.62

图1 各组大鼠肝脏冰冻切片油红O染色(×200)Fig.1 Oil red O staining of liver frozen slices from control，model and drug-treated rats(×200)

4 讨论

OEA是PPARα的内源性高亲和力配体，在激活PPARα时存在结构选择性，激活PPARα的半数有效浓度(EC50)仅为120 nmol/L，并可通过激活核受体PPARα调节进食和体重［7］。研究表明，OEA的抗肥胖作用与其激活PPARα刺激脂肪分解有关［8］。本研究观察到，OEA亦能显著降低高脂血症大鼠体重，与文献报道［8］一致，同样表明OEA调节体重与其调节脂质代谢有关。

PPARα与脂质代谢关系密切，贝特类 PPARα激动剂主要通过激活脂蛋白酯酶、抑制载脂蛋白B的合成等作用降低血中TG，同时可以增强载脂蛋白A-1的表达，升高血中HDL-C，进而预防高脂血症、动脉粥样硬化等疾病的发展［9］。有报道，OEA同样具有抗动脉粥样硬化的潜力［10］。本研究结果显示，饲喂高脂饲料21 d后，大鼠血清的TG、TC和LDL-C均比饲喂正常饲料的大鼠血清的相应指标有显著性升高，且HDL-C显著性降低，而给予不同剂量的OEA后，TG、TC和LDL-C均相应降低，HDL-C升高，且有剂量依赖性。此结果表明，OEA具有调节血脂作用，进而推测其对动脉粥样硬化有防治潜力。

高脂血症是导致脂肪肝的重要因素之一。长期摄入高脂饮食会导致高脂血症、肝内TG合成增加，当TG过量超过肝脏转运能力时则导致TG在肝内质网堆积，压迫肝血窦逐渐坏死，而肝脏的脂肪病变又会影响脂质代谢，从而加重高脂血症［11］。本研究结果表明，在给予OEA治疗21 d后可明显降低高脂血症大鼠肝脏 TG、TC，肝重及肝脏系数，血清ALT，肝脏MDA水平，升高GSH-Px活力，表明OEA可调节肝脏脂质代谢，改善肝功能，其清除自由基作用可能与存在某些高水平的内源性抗氧化剂(GSH)有关。结果提示OEA可能通过调节血脂及肝脏脂质代谢，提高肝脏自由基清除酶的活性，抵抗自由基介导的脂质过氧化，减轻肝脏自由基损伤，对肝脏具有一定保护作用。

本研究表明OEA具有较好的降血脂及肝脏保护作用。OEA由于口服后易被水解［12］，故本文采用腹腔注射给药的方式。然而OEA兼具高效低毒性的优势，表明其有潜力作为治疗高脂血症的一种先导化合物，为今后开发安全有效的降血脂药物提供思路。

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