鸡肉参中总三萜含量的测定

张世梅，杨 艳，陈 萍，马丽军，邓咏铭，杨月娥

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

鸡肉参中总三萜含量的测定

张世梅，杨 艳，陈 萍，马丽军，邓咏铭，杨月娥*

（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）

目的：采用紫外分光光度法对鸡肉参中总三萜成分的含量进行测定。方法：以齐墩果酸为对照品，以5%香草醛-冰醋酸溶液、高氯酸为显色系统，在480 nm波长处测定样品吸光度。结果：齐墩果酸在0.04～0.24 mg/mL范围内吸光度与含量成良好的线性关系，其回归方程为：A=0.001 5 C+0.002 3，r=0.999 9，平均回收率为99.37%，RSD=1.075%（n=6），所测鸡肉参中总三萜含量以齐墩果酸计为1.41%。结论：该方法操作简便、快速，灵敏度高和重现性好，测定结果准确可靠，可用于鸡肉参的质量控制。

鸡肉参；总三萜；紫外分光光度法；质量控制

鸡肉参为民族民间常用中药，植物名为滇川角蒿Incarvillea maire（iH.Léveillé）Grierson，俗名土地黄、波罗花、红花角蒿（丽江）、山洋参等〔1〕。云南主产滇西北及东部地区，生长在海拔2 400～3 655 m高山石砾堆、山坡路旁向阳处〔2〕。具有滋补强壮功效，用于治疗产后少乳、久病虚弱、头晕、贫血等证〔3〕。目前，国内对角蒿属植物进行了生药学、化学成分及药理活性的研究，其化学成分主要有单萜生物碱、大环精胺类生物碱、三萜类、环烯醚萜苷类、黄酮类和甾醇类等〔4〕。萜类化合物是鸡肉参的主要有效化学成分之一，具有抗感受伤害和抗炎镇痛作用〔4〕。经查阅相关文献，未见对鸡肉参中三萜类化合物含量测定的报道。为此，本实验以鸡肉参的根为原料，采用超声波提取法提取三萜类化合物〔5〕，用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法测定鸡肉参中总三萜含量〔6-8〕。

1 仪器与试药

1.1 仪器 TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器）；KQ5200DB型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器公司）；F120中药粉碎机（北京中兴伟业仪器有限公司）；SSY4电热恒温水浴锅（北京泰仪器有限公司）；DHG-9123A电热鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）。

1.2 试药 甲醇、乙酸乙酯、高氯酸、冰醋酸、香草醛均为分析纯；齐墩果酸对照品购买于中国药品生物制品检定所（批号：110709－200505）；鸡肉参药材采自大理苍山花甸坝东山，准确鉴定，其根自然干燥粉碎，过四号筛。

2 方法及结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品20 mg置100 mL量瓶中用甲醇定容，摇匀，即得对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 取鸡肉参粉末0.5 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，加甲醇20 mL，超声处理90 min，滤过，放冷，滤液置50 mL量瓶中，甲醇定容，摇匀，精密量取0.5 mL至10 mL量瓶中，甲醇定容，即得供试品溶液。

2.3 波长的选择 取齐墩果酸对照品溶液1.0 mL（空白对照为不加对照品溶液用乙酸乙酯稀释至刻度的混合溶液），置具塞试管中，水浴挥干，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL，高氯酸1.6 mL，70℃水浴加热15 min，冰水中冷却后，移至10 mL量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，于紫外可见分光光度计上扫描。结果表明，对照品溶液在480 nm处有最大吸收峰，故确定测定波长为480 nm，（见图1）。

图1 齐墩果酸的吸收光谱图

2.4 显色剂的条件及用量选择

2.4.1 5%香草醛-冰醋酸溶液用量的选择 取齐墩果酸对照品溶液1.0 mL 5份，水浴挥干，分别加入5%香草醛-冰醋酸0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，各加入高氯酸1.4 mL，70℃水浴加热15 min，冰水中冷却后，移至10 mL量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，在480 nm波长处测定吸收值，结果见表1。实验结果显示，5%香草醛-冰醋酸用量为0.4 mL时最佳。

表1 5%香草醛-冰醋酸用量结果

2.4.2 高氯酸用量的选择 取齐墩果酸对照品溶液1.0 mL 5份，水浴挥干，分别加入5%香草醛-冰醋酸0.4 mL，高氯酸1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL，70℃水浴加热15 min，冰水中冷却后，移至10 mL量瓶中加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，在480 nm波长处测定吸收值，结果见表2。实验结果显示，高氯酸用量为1.6 mL时最佳。

2.5 标准曲线的制备 精密吸取齐墩果酸对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别置具塞试管中，按“2.3”项下方法在480 nm波长处测定吸收值，以不加对照品溶液而直接加5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL，高氯酸1.6 mL，用乙酸乙酯稀释至刻度的混合溶液为空白对照，并以吸光度A为纵坐标，浓度C（mg/mL）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：A=0.001 5 C+0.002 3，r=0.999 9，齐墩果酸在0.04～0.24 mg/mL范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验 取鸡肉参粉末0.5 g 5份，精密称定，按“2.2”项下方法制备，按“2.3”项下方法操作，测得吸光度的RSD=1.86%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取鸡肉参粉末0.5 g 5份，精密称定，按“2.2”项下方法制备，按“2.3”项下方法操作，每隔0.5 h测定1次，共测6次，测得RSD为3.53%。结果说明显色反应在3 h内基本稳定。

2.8 重复性试验 取鸡肉参粉末0.5 g 5份，精密称定，按“2.2”项下方法制备，各准确移取1.0 mL，按“2.3”项下方法操作，计算含量，得供试品的平均质量分数的RSD为1.62%。

2.9 回收率试验 取鸡肉参粉末0.25 g 6份，精密称定，加入齐墩果酸对照品0.5 mg，按“2.2”项下方法制备，按“2.3”项下方法操作，在480 nm波长处测定吸收值，并计算回收率，所得平均回收率为99.37%，RSD=1.075%。结果见表3。

表3 回收率测定结果

2.10 样品的含量测定 取鸡肉参粉末0.5 g 5份，精密称定，按“2.2”项下方法制备，按“2.3”项下方法操作，在480 nm波长处测定吸收值，代入标准曲线方程，计算含量。结果总三萜类成分平均含量为1.41%，RSD=1.62%（n=5）。

3 讨论

本实验采用香草醛-冰醋酸、高氯酸比色法测定鸡肉参中总三萜类含量，测定过程中影响因素较多，受反应时间、反应温度、各种试剂用量等因素影响较为显著。通过实验探索了显色剂使用量及反应后的放置时间，结果表明以0.4 mL新配制的5%香草醛-冰醋酸，1.6 mL高氯酸的显色剂配比为宜。显色剂过多或过少会导致反应不完全，在测定过程中不稳定，或不在适宜的范围内，误差比较大。反应温度为70℃，反应时间以15 min为宜，反应时间过长空白颜色加深，过短则反应不完全，加大误差。在操作过程中，恒温水浴结束后应立即放入冰水中，保证反应及时终止。反应后的放置时间在3 h内基本稳定。得到的标准曲线具有良好的线性关系。该实验方法操作简便、快速，灵敏度高，测定结果稳定、准确、重现性好，可作为鸡肉参中总三萜成分含量测定的有效方法，为鸡肉参的质量控制和进一步开发利用提供了科学依据。

（志谢：本课题研究过程中，大理学院生药教研室的全体老师给予了悉心指导，综合实验室的杨永寿老师给予大力支持和帮助，在此一并致谢。）

〔1〕杨月娥，段宝忠.白族药鸡肉参的生药学研究〔J〕.时珍国医国药，2009，20（1）：181-182.

〔2〕中国科学院植物研究所.中国高等植物：（第10卷）〔M〕.青岛：青岛出版社，2004：433.

〔3〕江苏新医学院.中药大辞典：（上册）〔M〕.上海：上海科学技术出版社，1977：12050.

〔4〕吉腾飞，冯孝章.角篙属植物化学成分和药理活性〔J〕.国外医药·植物药分册，2003，18（4）：154-157.

〔5〕周俐斐，芦柏震，侯桂兰.中药三萜类化合物的提取分离及测定方法研究进展〔J〕.海峡药学，2007，19（3）：62-64.

〔6〕薛璟，贾晓斌，谭晓斌，等.雷公藤制剂中雷公藤红素及雷公藤总三萜的测定〔J〕.中华中医药杂志，2010，25（7）：1105-1108.

〔7〕侯敏娜，刘剑.灵芝三萜的提取分离及总三萜的含量测定〔J〕.现代中药研究与实践，2010，24（5）：70-71.

〔8〕季春，张融，胡晨，等.比色法测定南蛇藤中总三萜类成分的含量〔J〕.时珍国医国药，2009，20（4）：909-910.

Determination of Triterpenoid in Incarvillea Mairei by Ultraviolet Spectrophotometry

ZHANG Shimei,YANG Yan,CHEN Ping,MA Lijun,DENG Yongming,YANG Yue'e*
（School of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To establish a method for measurement of total triterpene in Jirousheng (Incarvillea mairei)by Ultraviolet spectrophotometry(UV).Methods:Using oleanolic acid as object,and 5%vanillin-glacial acetic acid solution and perchloric acid as color-developing agent,total triterpenes was measured by spectrophotometry at 480 nm wavelength.Results:The oleanolic acid content showed a good linear relationship with absorbance(r=0.999 9)in the range of 0.04-0.24 mg/mL,and the regression equation was A=0.001 5 C+0.002 3.The average recovery was 99.37%and RSD was 1.075%(n=6),Incarvillea mairei contained 1.41%of total triterpene according to the calculation of oleanolic acid content.Conclusion:The method was simple,rapid,high sensitivity,reproducible and reliable for the quality control of Incarvillea mairei.

Incarvillea mairei;total triterpene;ultraviolet spectrophotometry;quality control

R284.2［文献标志码］A［文章编号］1672-2345（2011）12-0021-03

大理学院大学生科研基金资助项目（DXSKYY201019）

2011-06-01

2011-07-21

张世梅，2008级药学专业本科生.

*通信作者：杨月娥，高级实验师.

（责任编辑 毛本勇）