HPLC法测定仙璐贝滴剂中马鞭草苷含量

北京市朝阳区药品检验所（100101）许佳 岳福艺

中国药品生物制品检定所（100050）孙磊

仙璐贝滴剂系天然植物复方制剂，主治急慢性鼻窦炎等病，现行标准尚无专属性成分的HPLC测定项。建立其主药马鞭草中有效成分含测方法对质控有重要意义。中国药典05版一部采用薄层扫描法测定熊果酸控制马鞭草质量[1]，专属性和重复性稍差；2010版改为UV法测定熊果酸和齐墩果酸[2]，待测成分也不专属；国内也有文献[3][4]采用HPLC法测定马鞭草中马鞭草苷，但由于本品成分复杂，方法不能直接沿用。本试验采用梯度洗脱法，首次建立了该制剂中专属性成分马鞭草苷的HPLC测定法，为其质控制提供了参考。

1 仪器与试药

W a t e r s 2 6 9 5 高效液相色谱仪（2996PDA检测器，Epower2工作站），马鞭草苷对照品（Sigma-Aldrich公司，含量≥99.0%），马鞭草对照药材（中国药品生物制品检定所，121002-200202），乙腈（色谱纯，JT Baker），磷酸、无水乙醇（分析纯，北京化工厂），实验用水为Milli-Q系统制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为a g i l e n t T CC18(4.6×2 5 0 m m，5 μ m)，检测波长240nm，柱温25℃。以乙腈为流动相A，0.3%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱：0→40min，A 7→10%，B 93→90%，流速1.0ml·min-1。理论板数以马鞭草苷峰计为25000，马鞭草苷与相邻色谱峰分离度大于1.5。

2.2 对照品储备液 精密称取马鞭草苷对照品7.13mg于100ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.3 供试品、对照药材和阴性溶液 量取供试品经0.45μm滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液。取马鞭草粉末0.5g，精密加入60%乙醇25ml，振荡2小时，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液即为对照药材溶液。不加马鞭草，其余照处方及制备工艺处理后，0.45μm滤膜过滤，续滤液即为阴性溶液。对照品、对照药材、阴性及供试品溶液色谱图见附图1。

附图 HPLC色谱图

2.4 线性及范围 精密量取对照品储备液1、2、3、5ml分别于10ml量瓶，加60%乙醇至刻度，摇匀。分别以上溶液和对照品储备液各10μl进样，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=1.3897×106X- 2728.6，相关系数r=0.9 9 9 9 8，表明马鞭草苷在0.0713～0.713μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取供试品，经0.45μm滤膜过滤后，取续滤液连续进样6次，每次10μl，马鞭草苷峰面积RSD为0.86%。

2.6 重复性试验 取供试品，经0.45μm滤膜过滤后，取续滤液即得。按此法制备供试品溶液6份，进样10μl，测定，马鞭草苷的平均含量为12.77μg·ml-1，RSD为0.52%。

2.7 稳定性试验 取供试品，经0.45μm滤膜过滤后，取续滤液在24小时内分别进样10μl，马鞭草苷峰面积RSD为0.95%。

2.8 回收率测定 精密量取供试品5ml于具塞锥形瓶中，再精密加入14.26μg·ml-1的对照品溶液5ml，摇匀，经0.45μm滤膜过滤后，取续滤液即得。按此法制备溶液6份，进样10μl，测定，结果见附表。

2.9 供试品测定 按上法测定3 批供试品，马鞭草苷含量分别为12.77、11.04和11.03μg·ml-1。

3 讨论

本试验使用二极管阵列检测器，对马鞭草苷对照品溶液进行扫描，确认其最大吸收波长为240nm。由于供试品成分复杂，照国内文献[3][4]的等度洗脱条件均无法有效分离。经试验，优化了正文的梯度条件，达到了较好效果。制剂采用冷浸提取，且浓度较低，故考虑直接进样。初试结果表明，灵敏度和分离度达到定量要求，因此未采取进一步的浓缩和净化。本法减少了检测成分的损失并简化了前处理操作，提高了重复性。本试验还对色谱柱的耐用性进行了考察，使用AKZO NOBEL KR100-5C18kromasil柱（250mm×4.6mm，5μm），分离度良好，表明优化的梯度条件有较好的重复性。

附表 马鞭草苷加样回收率