HPLC法测定复方醋酸泼尼松氯霉素散中两组分的含量

天津市静海县药品检验所（301600）陈延晶 郑兆银 王玉忠 董明

复方醋酸泼尼松氯霉素散系由醋酸泼尼松、氯霉素、己烯雌酚组成的复方制剂，具有抗炎抗过敏的作用，主要用于宫颈炎症治疗。原质量标准中[1]无含量测定方法，经查阅有关文献资料[2～5]，笔者建立了HPLC法同时测定复方醋酸泼尼松氯霉素散中醋酸泼尼松和氯霉素的含量，方法简便、快速、结果准确。

1 仪器与试药

岛津LC2010AHT高效液相色谱仪，UV-2401PC紫外分光光度计，AG-135电子天平；氯霉素对照品（130555-200602，中国药品生物制品检定所）、醋酸泼尼松对照品（100012-200105，中国药品生物制品检定所）、复方醋酸泼尼松氯霉素散（天津某医院，批号为20100908、20100909、20100910）。甲醇为色谱纯。

2 试验方法与结果

2.1 色谱条件 迪马ODSC18柱（4.6mm× 2 5 0 m m，5 μ m）色谱柱，以甲醇-水（60:40）为流动相，流速1.0 m l·m i n-1，检测波长238nm，柱温3 0 ℃，进样量为2 0 μ l。理论板数按氯霉素峰计算不低于2000，分离度符合要求。

2.2 溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备 避光操作。精密称取氯霉素对照品约100mg，置50ml量瓶中，加流动相适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液(1)备用；精密称取醋酸泼尼松对照品约10 mg，置200ml量瓶中，加流动相适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为储备液(2)备用；分别精密量取储备液(1)5ml、储备液(2)2ml置同一10ml量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 避光操作。精密称取复方醋酸泼尼松氯霉素散适量（约相当于氯霉素25mg），置25ml量瓶中，加流动相适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

附图 气相色谱图

2.2.3 阴性样品溶液制备 避光操作。精密称取与供试品等量的不含醋酸泼尼松与氯霉素的阴性样品，置25ml量瓶中，加流动相适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀。

2.3 专属性试验 按照“2.1”项下色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各20μl注入液相色谱仪，色谱图（见附图）结果可见阴性样品无干扰。2.4 线性关系的考察 分别精密量取储备液(1)（精密称取氯霉素对照品99.90 mg，醋酸泼尼松对照品10.55mg）1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml与储备液(2)0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0 ml置同一10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为氯霉素：A=11.6×106C +14.9×104（r=0.9999 n=6)；醋酸泼尼松A=4.3×104C-6.4×103（r=0.9999 n=6)。结果表明，醋酸泼尼松在2.5～15μg/ml范围内与吸收峰面积呈良好线性关系，氯霉素在0.2～1.4mg/ml范围内与吸收峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验 分别取“2.2.1”项下的对照品溶液及“2.2.2”项下的供试品溶液，精取20μl注入液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件，分别连续进样5次，计算氯霉素RSD=0.1%、醋酸泼尼松RSD=0.4%，供试品中氯霉素RSD=0.3%、醋酸泼尼松RSD=1.5%。

附表1 氯霉素回收率试验结果

附表2 醋酸泼尼松回收率试验结果

附表3 样品测定结果（%）

2.6 重复性试验 精密称取同一批号为20100909的样品5份，按“2.2.2”项下的方法制备，精取20μl注入液相色谱仪，按“2.1”项下的色谱条件分析，计算氯霉素 RSD= 1.2% 、醋酸泼尼RSD=1.4%。

2.7 稳定性试验 精取“2.2.1”项下的对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件分析，分别于0、2、4、6、8小时进样，测定对照品中氯霉素与醋酸泼尼松的峰面积，氯霉素RSD=0.1%、醋酸泼尼松RSD=0.4 %，说明其在8小时内稳定。

2.8 回收率试验 精密称定氯霉素对照品约200mg，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液(3)。精密称定不含氯霉素与醋酸泼尼松的阴性样品适量（与供试品等量）置25ml量瓶中，用流动相适量溶解；分别精密量取储备液(3)10.0ml、12.5ml、15.0ml与储备液(2)（醋酸泼尼松对照品10.55mg）4.0ml、5.0ml、6.0ml分别加入上述25ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别精密量取储备液(3)10.0ml、12.5ml、15.0ml与贮备液(2)（醋酸泼尼松对照品1 0.5 5 m g）4.0ml、5.0ml、6.0 m l 分别加入25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别取供试品溶液与对照品溶液按“2.1”项下的色谱条件分析，计算回收率。氯霉素为99.5%，RSD=1.0%（n=9）；醋酸泼尼松为1 0 0.9%，RSD=0.2%（n=9）。见附表1、附表2。

2.9 样品测定 取复方醋酸泼尼松氯霉素散（天津某医院，批号为20100908、20100909、20100910），按“2.2.2”制备，“2.1”下色谱条件分析，见附表3。

3 讨论

3.1 检测波长的确定 氯霉素在272nm有最大吸收，醋酸泼尼松在238nm有最大吸收；处方中两组分含量相差较大（每1000g样品中含醋酸泼尼松100mg、氯霉素10g），为了提高检测灵敏度，选择醋酸泼尼松的最大吸收波长作为检测波长。

3.2 溶解方法的选择 以甲醇、甲醇-水（60：40）两种溶剂超声、温热溶解样品进行测定，区别无几，但采用葡萄糖为辅料，用甲醇溶解时葡萄糖几乎不溶解，故采用甲醇-水（60：40）温热溶解。

3.3 取样量的确定 比较了约相当于氯霉素50mg、30mg、25mg时在上述色谱条件下的分析结果，表明约相当于氯霉素25mg时，峰形良好，分离效果好。

3.4 本研究采用HPLC法同时测定复方醋酸泼尼松散中醋酸泼尼松、氯霉素的含量，操作简便、结果准确可靠、重复性好，可用于本制剂的含量测定。