RP－HPLC法测定木香大安颗粒中橙皮苷的含量

韩 飞，熊 魏，罗哓健

(1.江西中医学院，江西南昌330004;2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌330006)

木香大安丸出自《痘疹世医心法》卷十二，全方由木香、连翘、黄连、陈皮、山楂等十一味中药组成，具有消食导滞、祛热健脾、缓消平补、不温不燥等功效，用于治疗小儿食滞，头温腹热，嗳气恶食，烦不安眠等病症临床效果显著.经剂改成颗粒剂后，具有剂量准确、稳定性强、更适合小儿服用等优点.由于原方无质量标准，故本文采用反相高效液相色谱法测定木香大安颗粒中橙皮苷的含量，结果表明该方法简便、准确、分离度好、重现性高，可用于制剂的质量控制.

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent－1200高效液相色谱仪:Agilent－1200泵，Agilent－1200－VWD检测器，Agilent－1200化学工作站;BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司，感量0.001 mg)，Labomed UVS－2800 紫外可见分光光度计(美国奥然科技有限公司)，超声仪(KQ5200DA型昆山市超声仪器有限公司).

1.2 试药 橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110721－200211)，乙腈、甲醇为色谱纯(天津市永大化学试剂厂)，冰醋酸、无水乙醇为分析纯(天津市博迪化工有限公司)，水为超纯水，木香大安颗粒自制，药材均购自南昌市黄庆仁大药房，经江西中医学院生药学教研室褚小兰教授鉴定合格.

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS－2 C18(250 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特公司);流动相:乙腈 －6.0%醋酸溶液(79∶21);流速:1.0 mL·min－1;检测波长:283 nm;柱温:30℃;进样量:20 μL，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于5 000.

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品约9 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀.精密吸取1 mL置5 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得(每 1 mL 含橙皮苷 0.182 3 mg).

2.2.2 供试品溶液的制备 取同一批成品颗粒(批号:20100911)适量，研细，精密称取1 g粉末，置100 mL量瓶中，精密加入甲醇定容，密塞，精密称定重量，超声处理(200 W，40 kHz)3次，每次20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，滤过，取续滤液，即得.

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按供试品的处方比例和制备工艺，制成缺橙皮苷的阴性对照颗粒.取本品1 g，按2.2.2项下方法制成阴性对照溶液，即得.

2.3 系统适应性试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别进样20 μL，记录色谱图，见图1.结果在上述色谱条件下，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于4 000，与相邻峰分离度大于2，主峰保留时间9.86 min.阴性对照品色谱图中，在与对照品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现.表明制剂中其他成分对橙皮苷的测定无干扰，结果见图1.

图1 三种不同溶液的HPLC图

2.4 线性关系考察 精密量取橙皮苷对照品溶液(0.182 3 mg·mL－1)0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 mL，分别置 10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以橙皮苷对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为:Y=2 016.2X － 24.147，相关系数:r=0.999 9， 结果表明，橙皮苷对照品在0.036 3～2.321 9 μg范围内线性关系良好.

2.5 精密度试验 精密吸取橙皮苷对照品溶液(0.182 3 mg·mL－1)及供试品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，连续进样6次，依法测定，记录峰面积，得相对标准偏差(RSD)分别为0.78%，1.25%，结果表明仪器精密度良好.

2.6 重复性试验 按2.2.2项下方法制备成供试品溶液，对同一批样品(批号20100911)6份进行测定，橙皮苷平均含量3.056 8 mg·g－1，RSD为0.514%(n=6) ，结果表明方法重现性良好.

2.7 稳定性试验 取成品颗粒适量，研细，精密称取粉末1 g，按2.2.2项下制备成供试品溶液，精密吸取同一供试品溶液各 20 μL，分别于制备后 0、2、4、8、12、24 h，依法测定，峰面积的RSD为0.673%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好.

2.8 回收率试验 称取同一批号的样品(批号20100911，含量为3.056 8 mg·g－1)0.5 g，共9 份，分成3 组，每组3 份，精密称定后，第1组每份加入样品含量80%的橙皮苷对照品，第2组每份加入样品含量100%的橙皮苷对照品，第3组每份加入样品含量120%的橙皮苷对照品，按2.2.2项下制备成样品溶液，依法测定，结果见表1.

2.9 样品测定 取三批(20100906、20100925、20101018)样品，按2.2.2项下方法制备成供试品溶液，进行测定，根据峰面积计算橙皮苷的总平均含量为3.070 6 mg·g－1，结果见表2.

表1 回收率实验测定结果

表2 3批样品中橙皮苷含量测定结果

3 结果与讨论

3.1 检测波长的选择 参考《中国药典》［1］2010年版(一部)确定样品检测波长为283 nm，在此波长下的基线平稳，检测灵敏度高.

3.2 流动相的选择 查阅相关文献［2～5］，本文还考察了以下流动相:①甲醇－水(35∶65);②甲醇－1%磷酸水溶液(40∶60);③乙腈－3%醋酸水溶液(25∶75)等，效果均不如本文所采用的流动相，在该流动相条件下，橙皮苷与其他组分峰能达到较好分离，保留时间理想，理论塔板数高.

3.3 提取方法的选择 本实验考察了索式提取、超声提取、回流提取三种方法，结果表明索式提取所得橙皮苷含量最高，但提取时间较长，操作较繁琐，综合考虑，选择超声提取，操作简便，提取时间较短，且橙皮苷含量较高.

3.4 提取溶剂的选择 本实验考察了无水乙醇、50%乙醇、50%甲醇、甲醇、纯水等提取溶剂，结果表明采用甲醇提取所得橙皮苷含量最高，故选择甲醇作为提取溶剂.

本法简单准确，重现性好，分离度高，专属性强，阴性对照无干扰，可有效控制该成品的质量.

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:758.

［2］邓桂明，欧阳荣，周新蓓，等.高效液相色谱法测定枳实中橙皮苷的含量［J］.医药导报，2004，14(9):170－173.

［3］陈锡峰，赵春景，钱妍.高效液相色谱法测定舒通颗粒中橙皮苷的含量［J］.中国药业，2005，5(12):110－113.

［4］苏彦斌，张凤荣，苏彦文.高效液相色谱法测定止咳宁嗽胶囊中橙皮苷的含量［J］.中国医院药学杂志，2008，3(23):90－93.

［5］郭天义，杨双杰，张现军，等.高效液相色谱法测定健胃消食片中橙皮苷的含量［J］.中国药业，2004，3(20):211－214.