注射用脂溶性维生素(Ⅱ)中维生素A测定标准研究

翟美华，朱 琳

(江苏省南通药品检验所，江苏南通226006)

注射用脂溶性维生素(Ⅱ)为维生素类药，为肠外营养组成部分，用以满足人体对维生素的生理需要，在对药品质量监控的抽样检验中发现，目前临床使用的产品存在相同名称不同规格不同标准的现象并不鲜见，同时在对维生素A的含量测定时也遇到了一些问题，现围绕标准中维生素A的含量测定与同行进行探讨.

1 质量标准

因检验工作需要获取了两份有关注射用脂溶性维生素(Ⅱ)的质量标准，两者之间存在较大差异(见表1).

表1 两质量标准比较

2 实验方法与结果

2.1 仪器、试剂与样品 Agilent1100色谱系统;色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB － C8(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，Diamonsil C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);维生素 A 棕榈酸酯:SIGMA公司提供;甲醇为色谱纯，乙醇为分析纯;注射用脂溶性维生素(Ⅱ):市场抽样A公司(样品1)及B公司(样品2、3).

2.2 实验方法

2.2.1 色谱条件 按表1的两个色谱条件测定.

2.2.2 对照溶液(参考物质溶液)的制备 取维生素A棕榈酯约20 mg，置100 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得.

2.2.3 供试品溶液的制备 取注射用脂溶性维生素(Ⅱ)内容物适量(约相当于维生素A棕榈酯2 mg)，置10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得.

2.2.4 样品测定及结果 取样品溶液按2.2.1色谱条件分别测定，以维生素A棕榈酸酯(标准一规定:每克维生素A棕榈酸酯相当于0.545 7 g维生素A)为参考测得两种色谱条件下的结果，见表2.

改变色谱条件中色谱柱与流动相的配对情况，得到不同形状的色谱图，见表3及图1.

表2 样品测定结果比较(%)

表3 不同色谱柱与流动相的色谱图对比表

图1 不同色谱柱与流动相的色谱图

3 讨论

3.1 对照品的使用 维生素A棕榈酯对照品是注射用脂溶性维生素(Ⅱ)质量控制中不可或缺的标准物质(参考物质)，药品管理法规定国务院药品监督管理部门的药品检验机构负责标定国家药品标准品、对照品，国务院药品监督管理部门指定的单位即为中国药品生物制品检定所，但中国药品生物制品检定所所能提供对照品目录中没有维生素A棕榈酯.在药品监督抽验和评价性抽验检验过程中，按国家有关规定必须采用国家对照品，对于无国家对照品的检测项目，检验单位一般不检验或不对该项目做结论，如此现象会造成对药品质量监控的数据缺失而导致监管的失控，因此建议在制定药品质量标准时应考虑到对照品的因素.

3.2 质量标准方面

3.2.1 药品名称相同的不同或相同规格或剂型的制剂，因生产单位的不同而执行不同的质量检验标准，此类现象在我国现阶段是一个不可回避的现实，药品质量标准是保证药品检验结果正确的前提，是保证检验报告书正确、科学、严谨的关键，对于药品检验机构而言只有严格执行药品质量标准，而对标准的正确性、科学性、严谨性只能进行实验性的探讨.制定药品质量标准的目的是控制其质量，标准的制定必须遵循一个指导原则，即质量标准分析方法的验证，《中国药典》附录收载了药品质量标准分析方法指导原则，可供含量测定参考的验证内容有:准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性.就耐用性而言是指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法可用于常规检验提供依据，本次实验涉及的是并非是对质量标准进行的验证试验，而是对测定方法的探讨，因其变动的因素不仅有流动相的组成还有色谱柱类型的改变.

3.2.2 本次实验两个质量标准针对的是两个规格的样品，但它们检测的主药成分是相同的(标准二中的维生素A最终也是以维生素A棕榈酸酯作为检测的参考依据).标准一处方中的维生素A按《中国药典》的要求应为维生素A醋酸酯，对于维生素A醋酸酯与维生素A棕榈酸酯在高效液相色谱中的分配行为差异未作进一步考察，但从同一份样品两种方法的检测结果看，标准一采用的色谱条件优于标准二采用的色谱条件，因从色谱图上看多一个色谱峰就说明有一个物质的存在，不考虑量的因素这也是一个质的区别.对色谱法的专属性不仅需说明诸成分的色谱位置，且要求各组分之间的分离度符合要求.

3.2.3 按《中国药典》的标准规定维生素A系由维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液.维生素A醋酸酯在植物油中的溶解度较棕榈酸酯小，天然维生素A主要是全反式维生素A，尚有多种其他异构体，维生素A还因其含有多个不饱和键而导致其性质不稳定.2010年版《中国药典》对维生素A测定法进行了修订，增加了高效液相色谱法，采用的是正相色谱法，并规定维生素A醋酸酯主峰与其顺式异构体的分离度应大于3.0.本文所用标准因样品原因采用的是反相色谱法，从实验结果看，改变固定相及流动相的极性对测定结果有较大影响，辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(C8柱)的分离效果明显高于十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(C18柱)的分离效果.

3.2.4 从实验的结果简单分析，影响维生素A含量测定的因素较多，样品的稳定性是必然的考虑因素，高效液相色谱系统的固定相与流动相的优化选择直接影响到实验结果的准确性，从本次实验结果看，维生素A(维生素A醋酸酯)与维生素A棕榈酸酯在相同色谱条件下色谱行为直观上的表现基本一致，但两种方法测定结果存在一定差异，需要对维生素A(维生素A醋酸酯)与维生素A棕榈酸酯在测定中的关系作进一步探讨.

3.2.5 试行的药品标准超过试行期的使用也较常见，本次实验涉及的标准由生产单位提供，均为试行标准，试行期均为2年，试行开始日期分别为2005年12月15日和2006年4月28日，均已超过了标准颁布的试行期限而未有新的替代标准.

3.3 小结 对本次实验探讨的问题:一是制定的质量标准的科学性;二是试行标准的时效性;三是药品检验中标准物质(对照品)应用的可行性;四是同类药品标准的规范性;五是药品质量的可控性.