四季感冒胶囊质量标准的研究

肖 遐，何丽华

（湖南师范大学医学院药学系，湖南 长沙 410013）

四季感冒胶囊由桔梗、陈皮、荆芥、连翘等九味中药组成。具有清热解表，用于四季风寒感冒，特别适用于体弱者、妊娠妇女因感冒引起的发热、头痛，鼻流清涕、咳嗽口干，咽喉疼痛、恶心厌食等症状。为了更好的控制本品的质量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）测定陈皮中橙皮苷的含量。经反复实验，确定的检测方法分离度高，重现性好，阴性无干扰，方法可行。

1 实验材料

1.1 仪器与试剂

Agilent 1100高效液相色谱仪；TL9900数据处理软件。日本SHIMADZU CIV-240IPC紫外分光光度计；BP211D电子分析天平 （西德Sartorious）；精密度试纸。试剂：甲醇均为色谱试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。

1.2 试药

四季感冒胶囊自制。橙皮苷为中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号721- 200810。

2 鉴别实验

2.1 连翘

取本品的内容物4g,加醋酸乙酯20mL,超声处理30 min,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取除连翘外的其余处方量药材，按制备工艺制成阴性样品，同上法制成缺连翘的阴性溶液。再取连翘对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。吸取上述三种溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10 min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺连翘的阴性溶液无干扰。

2.2 荆芥

另取除荆芥外的其余处方量药材，按制备工艺制成阴性样品，同上法制成缺荆芥的阴性溶液。再取荆芥对照药材0.8g，加乙醚20 mL，置水浴上加热回流15 min，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯1mL使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述对照药材溶液、阴性溶液及鉴别（3）项下的供试品溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷-醋酸乙酯（17：3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺荆芥的阴性溶液无干扰。

2.3 陈皮

取本品的内容物4g,置索氏提取器中,加石油醚(60～90℃)20mL，加热回流 2 h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇20mL，再加热回流至提取液无色，提取液置水浴上蒸至约5mL，作为供试品溶液[1]；另取除陈皮外的其余处方药材，按制备工艺制成阴性样品，同上法缺陈皮的阴性溶液；再取橙皮苷标准品溶液；取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，依次用醋酸乙酯-甲醇-水（100:17:13）及甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水（20:10:1:1）上层液作二次展开，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与橙皮苷标准品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。缺陈皮的阴性溶液无干扰。

3 含量测定

方中陈皮主含橙皮苷，中检所已提供用于含量测定用的对照品。据文献报道，橙皮苷的含量测定方法可采用薄层扫描法及高效液相色谱法等[2]，参照《中国药典》2008年版一部陈皮中橙皮苷的含量测定方法[3]，采用HPLC法测定本品中橙皮苷的含量，并进行方法学研究。经试验结果表明，缺陈皮的阴性溶液无干扰，且样品分离效果好。测定十批成品，其平均含量为1.12mg/粒，考虑大生产中的损耗等问题，并参照十批成品实测平均含量，按70%折算，暂定本品限度为每粒中含橙皮苷不得少于0.8mg。经方法学考察结果表明，本测定方法基本可行，其方法学考察及结果如下。

3.1 色谱条件及系统适用性实验

色谱柱选择：采用 C18（Polaris 150×4.6mm，5μ）色谱柱，流动相选择：甲醇-醋酸-水（35:4:61）为流动相，供试品色谱中橙皮苷能与其他组分峰达到完全基线分离，它相邻色谱峰分离度大于1.5，测得峰面积最大。测定波长的选择：分别取橙皮苷对照品液和流动相，在紫外分光光度计上，于200～500 nm波长范围内扫描，结果橙皮苷在283nm±1 nm波长处有最大吸收。故选择283nm为测定波长。柱温：35。C。流速：1.0mL/min。进样量：5μL。理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。同时取缺陈皮的阴性溶液进样测定，试验结果表明，阴性溶液色谱图中在与橙皮苷对照品色谱峰相应位置上无干扰峰。

3.2 供试品溶液的制备

参照中国药典2008年版一部陈皮含量测定项下供试品溶液的制备方法，制定本品的供试品溶液的制备方法如下：

取本品装量差异项下内容物，精密称定，研细，取约0.8g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）80 mL，加热回流 2-3 h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇70 mL，再加热回流至提取液无色，提取液置水浴上蒸至约40 mL，放冷，滤过，滤液置50 mL量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗涤液滤入同一量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3.3 阴性溶液的制备

取除陈皮外的其余处方量药材，按制备工艺方法制备缺陈皮的阴性样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺陈皮的阴性溶液。

3.4 对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品5.39mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（0.0539mg/mL）。

3.5 测定法

分别精密吸取对照品溶液、阴性溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.6 线性关系考察

精密吸取浓度为0.0539mg/mL的橙皮苷对照品溶液 1、3、5、7、9μL 进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：A= 38223991.6C-12337.7，r=0.9999。结果表明橙皮苷在0.0539～0.4851μg范围内具有良好的线性关系。

表1 线性关系考察结果表

3.7 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液（ 20080602）5μL，重复进样5次，测定其峰面积积分值，峰面积平均为 95572006，RSD=0.7%(n=5)结果表明：仪器精密良好。

表2 精密度试验结果表

3.8 稳定性试验 分别精密吸取同一供试品溶液（ 20080602）5μl，于 0、2、4、8、12 小时进样，测定其峰面积积分值，结果表明，避光保存的供试品溶液，橙皮苷峰面积平均为 10214753，RSD=0.871%(n=5),表明供试品溶液应避光保存,在此条件下 12 h内基本稳定。

表3 稳定性试验结果表

3.9 重复性试验

取同一批号样品（ 20080602）按上述条件，测定5次，结果橙皮苷平均含量为1.233mg/粒,RSD=1.34%(n=5),结果表明本法重现性好。

表4 重复性试验结果表

3.10 回收率试验

精密量取已知含量为 1.233mg/粒（ 20080602批，3.597mg/g）的样品0.4g，分别精密加入橙皮苷对照品溶液（0.1512mg/mL）10.0mL，即 1.512mg，按上述含量测定项下的方法测定含量，结果橙皮苷平均加样回收率为98.04%，RSD=0.8%（n=5）。表明本方法加样回收率好。（样品进样量约为0.26μg，均在线性范围内）

表5 回收率测定结果表

3.11 十样品测定与结果

按拟定的含量测定方法测定十批样品中橙皮苷的含量，结果上述十批样品的平均含量1.12 mg/粒，考虑到大生产中的损耗等问题，暂定本品每粒含陈皮按橙皮苷不得少于0.8 mg。

按拟定的含量测定方法测定十批样品中橙皮苷的含量，结果见表6。

表6 十批样品含量测定结果表

3 讨论

色谱柱选择：采用C18（Polaris 150×4.6mm，5μ）色谱柱，流动相选择：甲醇-醋酸-水（35:4:61）为流动相，供试品色谱中橙皮苷能与其他组分峰达到完全基线分离，它相邻色谱峰分离度大于1.5，测得峰面积最大。测定波长的选择：分别取橙皮苷对照品液和流动相，在紫外分光光度计上，于200～500 nm波长范围内扫描，结果橙皮苷在283nm±1 nm波长处有最大吸收。故选择283nm为测定波长。同时取缺陈皮的阴性溶液进样测定，试验结果表明，阴性溶液色谱图中在与橙皮苷对照品色谱峰相应位置上无干扰峰。

[1]王宝琴,主编.中成药质量标准与标准物质研究 [M].北京：中国医药科技出版社,1994.

[2]王喜军,编著.高效液相色谱在中药研究中的应用[M].黑龙江：黑龙江科学技术出版社,1994.

[3]卫生部药典委员会.中国药典 .一部[M].北京：北京化学工业出版社,2008.附录VIB.