肝癥消胶囊中人参皂苷的含量测定

李淑贤，梁生旺

（1.广东医学院，广东 东莞523808；2.广东药学院 中药学院，广东 广州510006）

肝癥消胶囊是由人参、黄芪、醋鳖甲、土鳖虫等中药组成，本方具有益气活血、护肝解毒、软坚消癥的作用，用于防治慢性肝炎向肝纤维化发展，以及肝纤维化、肝硬化的临床治疗。人参为方中君药，近年来，有关人参文献报道多采用HPLC法测定其中有效成分的含量［1－5］，为了控制本品的质量，我们选择高效液相色谱法（HPLC）测定人参中主要化学成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的含量，以建立合理的含量测定指标和限度标准。

1 材料与试剂

Shimadzu CLASS－VP型高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD－10Atvp紫外检测器（日本岛津）；ODS C18柱（大连依利特公司）；KQ3200DE型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；对照品：人参皂苷Rg1（批号110703－200425）、人参皂苷 Re（批号：110704－200420）、人参皂苷 Rb1（批号：110704－200420）。对照品均购自中国药品生物制品检定所；甲醇（天津四友色谱纯）；乙腈（迪马色谱纯）；屈臣氏蒸馏水。肝癥消胶囊（自制，批号为080806、080810、080815）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（5μm，250mm×4.6mm）；流动相为：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；流速：1.0mL·min－1；柱温：25℃；检测波长为203nm。

表1 梯度洗脱程序

2.2 对照品溶液制备

取对照品人参皂苷Rg1，人参皂苷Re和人参皂苷Rb1置五氧化二磷干燥器中，减压干燥48h，取出，精密称取适量，用甲醇溶解制成每1mL含人参皂苷Rg10.142mg，人参皂苷Re 0.147mg，人参皂苷Rb10.140mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取三批样品适量，倾出内容物，研细，取约5.0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣用30mL蒸馏水使溶解，转移至分液漏斗中，加乙醚提取2次，每次15mL，弃去乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇提取5次（20mL，20mL，15mL，15mL，15mL），合并正丁醇液，用1%NaOH 洗涤2次（30mL，20mL），弃去碱液，正丁醇液再用正丁醇饱和水洗涤2次，每次20mL，收集正丁醇液，置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性溶液制备

按处方比例依法配制除人参以外的阴性样品，按“2.3”项制备供试品溶液方法制备人参阴性溶液。取以上样品进行测定，结果显示阴性对照色谱中，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1峰附近无其他峰影响。结果见图1。

图1 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的HPLC色谱

2.5 线性关系的考察

分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液、人参皂苷Re对照品溶液和人参皂苷 Rb1对照品溶液2μL、4μL、8μL、16μL、20μL，按上述的HPLC条件分析，以峰面积A对进样量X（μg）进行线性回归，得回归方程分别为：人参皂苷Rg1线性方程为：Y＝24 687.6＋336 161.59X，Y＝0.999 2，线性范围为：0.284～2.840μg／mL；人参皂苷 Re方程为：Y＝42 006.3＋326 214.661 2X，γ＝0.999 5，线性范围为：0.294～2.940μg／mL；人参皂苷 Rb1线性方程为：Y＝234 008X－12 141，γ＝0.999 8，线性范围为：0.280～2.800μg／mL。

2.6 精密度试验

分别精密吸取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1对照品溶液，于测定条件下进样10μL，分别重复进样5次。以3种组分峰面积分别计算，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb1的RSD分别为：1.30%、0.82%和1.03%，结果表明仪器精密度良好。

2.7 重现性试验

精密称取肝癥消胶囊内容物（批号080806）共5份，按“2.3”项制备供试品溶液，取供试品溶液20μL，按“2.1”项色谱条件测定，按外标法以峰面积计算样品含量。结果样品中测得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的平均含量分别为0.186mg／粒、0.093mg／粒和0.179mg／粒，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的RSD分别为2.64%、1.63%和1.47%。测定结果表明，本方法重现性符合要求。

2.8 稳定性试验

精密称取肝癥消胶囊内容物（批号080806），分别按“2.3”项制备供试品溶液，分别在0h、0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h进样，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的RSD分别为1.43%、2.71%和1.19%。

2.9 回收率试验

精密称取已知含量的肝癥消胶囊样品6份（批号080806），分别精密加入人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1对照品适量，按“2.3”项下方法制备供试品溶液并在上述色谱条件下测定，计算回收率，结果见表2、表3。

表2 人参皂苷Rg1和人参皂苷Re加样回收率试验

表3 人参皂苷Rb1加样回收率试验

2.10 样品测定

取三批肝癥消胶囊内容物，分别按“2.3”项下方法进行样品处理及测定，结果见表4、表5。

表4 样品中人参皂苷Rg1＋人参皂苷Re的含量测定结果

表5 样品中人参皂苷Rb1的含量测定结果

3 讨论

肝纤维化是慢性肝病的一种组织病理学诊断，是肝硬化的重要病理基础，是各种慢性肝病向肝硬化发展的必经途径。方中人参、黄芪等中药具有益气补血、活血散淤作用，能起到软坚消癥的功效。人参系方中君药，主要含皂苷类活性成分，因此采用高效液相色谱法进行测定，参照中国药典2005版，选定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1为定量指标。本品人参皂苷Rg1和Re总体转移率为50.92%，人参皂苷Rg1转移率为52.94%；故规定本品每粒含人参以人参皂苷Rg1（C42H72O14）和人参皂苷Re（C48H82O18）的总量计不得少于0.26mg，人参皂苷 Rb1（C54H92O23）的量计不得少于0.18mg。通过三批验证实验，测得本品每粒含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re两者之和平均含量为0.27mg，人参皂苷Rb1平均含量为0.20mg，可用于肝癥消胶囊的质量控制。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社，2005.

［2］林晓辉，张雪原.HPLC法测定心灵丸中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量［J］.中国药师，2009，12（1）：61－63.

［3］杜佳新，顾玉红，李萌.HPLC测定益心舒胶囊中人参皂苷Rg1，Re，Rb1的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（11）：88－90.

［4］苑雅萍，李云涛，郭佳超.HPLC测定参芪颗粒中人参皂苷Rg1，Re，Rb1的 含 量 ［J］.中 国 实 验 方 剂 学 杂 志，2010，16（16）：74－75.

［5］李宜玲，金光洙.HPLC测定龟参口服液中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1的含量［J］.中药材，2010，33（5）：881－883.