RP－HPLC测定当归养血丸中芍药苷含量

张得钧

（青海大学 医学院，青海 西宁810001）

当归养血丸是由当归、白芍、地黄、炙黄芪、阿胶、牡丹皮等中药组成的制剂，具有养血调经的功效［1］，常用于治疗气血两虚、月经不调。白芍具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗等功效，其主要有效成分为芍药苷。目前，仅有测定当归养血丸中阿魏酸的文献报道，而未见测定芍药苷的方法［2］，本文建立了当归养血丸中芍药苷的反相高效液相色谱含量测定方法，该方法不但能更好地控制当归养血丸的质量，而且操作简单，重复性、回收率和精密度均较好。

1 材料与仪器

1.1 材料

芍药苷对照品购于中国药品生物制品检定所，批号为0736－200116，纯度≥98%。当归养血丸购于各大药店，详见表1。

1.2 仪器

高效液相色谱仪（Agilent Technologies 1200），超纯水器（1trL－10A）；KQ－500E型超声仪。

表1 当归养血丸样品来源及批次

2 方法

2.1 色谱条件

Hypersil ODS色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇－水（32：68），检测波长为230nm，流速1mL／min，柱温30℃，进样量10μL，色谱见图1。

2.2 供试品溶液的制备

分别取不同厂家生产的当归养血丸，捣碎后研细（过3号筛）。精密称定1g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，超声处理30min（500W，40kHz），放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

图1 芍药苷含量测定HPLC

2.3 空白试验

按处方制备缺白芍的阴性样品，按照上述方法制备供试液并分析，结果见图1，表明缺白芍样品在芍药苷对照品保留时间处无色谱峰，其他药味无干扰，分析方法专属性良好。

2.4 芍药苷线性关系考察

精密吸取对照品贮备溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL置25mL量瓶中，分别用甲醇稀释至刻度，在上述色谱条件下进样10μL，记录色谱，见图1；以峰面积为纵坐标（Y）与含量为横坐标（X）得回归方程为：Y＝138.63X－69.82，r＝0.999 7，结果表明芍药苷在150～750ng／mL范围内有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

按“2.2”项下方法制备同一批样品溶液，连续进样7次，结果RSD为0.635%（n＝7），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

按“2.2”项下方法制备同一批样品溶液，分别在0、2、4、6、8、12、18、24h进样，测得峰面积，计算得峰面积的 RSD为1.0%。表明供试品溶液在24h内含量基本稳定。

2.7 重复性试验

按“2.2”项下方法制备同一批样品溶液7份，分别依本法处理进行测定，结果芍药苷平均含量为4.321mg·g－1，RSD为1.4%（n＝7），结果表明以本法测定重复性好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已测知含量的样品约2.0g，共7份，分别准确加入一定量的芍药苷对照品溶液，依上述方法进行含量测定并计算回收率，结果见表2。方法平均回收率为98.7%，RSD为1.7%（n＝7），符合中药制剂分析要求。

表2 芍药苷加样回收率

2.9 样品测定

分别取不同厂家的当归养血丸按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样分析，以外标法计算芍药苷含量，结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 不同提取方法的比较

根据芍药苷的理化性质，在制备供试品溶液的过程中，分别对不同的提取溶剂、不同的提取方法、不同的提取时间分别进行了考察，最终确定选用超声处理的方法提取制备供试品溶液，选用50%甲醇溶液为制备供试品溶液的提取溶剂，确定30min作为所有样品的超声处理时间。最终确定的方法简单易行、分析快速，精密度高，重现性好，且空白无干扰，可较好控制本品的质量。

3.2 不同厂家当归养血丸质量比较

从5个不同厂家当归养血丸芍药苷含量的测定结果可以看出，产品中芍药苷含量均高于2.5mg·g－1，但不同厂家的芍药苷含量仍存在一定的差异，这可能与中药制剂的药材来源、生产工艺等因素有关，从而导致其特征性化学成分含量差异较大［2－3］；芍药苷含量是当归养血丸的重要指标，在不同厂家的当归养血丸产品中芍药苷含量存在显著差异，为有效控制产品质量，建议设定该产品含芍药苷的标准量，以便有效控制该产品的质量。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：化学工业出版社，2010.

［2］夏明，董晓烨.当归养血丸中阿魏酸的含量测定［J］.医药导报，2010，29（1）：103－104.

［3］王晓燕，朱宝珠，李顺吉，等.RP－HPLC法测定逍遥丸（浓缩丸）中芍药苷的含量［J］.中医研究，2008，21（5）：14－16.