卵巢癌组织中胃泌素释放肽及其受体的表达*

樊冬梅，史惠蓉，陈志敏，刘惠娜，张瑞涛

1)郑州大学第一附属医院妇产科 郑州450052 2)河南科技大学第一附属医院妇科 洛阳471003

(2010-10-12收稿 责任编辑 赵秋民)

作为妇科三大恶性肿瘤之一，卵巢癌的病死率高居妇科恶性肿瘤之首［1］。因为卵巢解剖位置隐匿，早期病变常缺乏临床症状，患者就诊时往往已属晚期，且5 a生存率不足20%［2-3］。近年来，国内外研究［4-8］发现胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide，GRP)及其受体(GRPR)在许多恶性肿瘤的发生中起重要作用。作者应用免疫组化方法检测卵巢癌组织中GRP和GRPR的表达情况，并分析二者与卵巢癌患者的临床病理特征的关系，探讨GRP和GRPR在卵巢癌发生发展中的作用及意义。

1 材料与方法

1.1 材料来源 选择2001年1月至2009年1月就诊于郑州大学第一附属医院的病历资料完整的卵巢癌患者［58例，年龄39～60(51.3±8.7)岁;有家族史11例;根据2000年FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期41例;高分化20例，中-低分化38例;浆液性癌29例，黏液性癌16例，子宫内膜样癌8例，其他类型5例;有腹水45例;有淋巴结转移30例;术前均未接受过放化疗及免疫治疗］、良性卵巢上皮性肿瘤［49例，其中浆液性29例，黏液性20例;年龄31～66(48.9±6.5)岁］和同期就诊于该院的因子宫脱垂行子宫切除术要求切除一侧或双侧正常卵巢［37例，年龄40～70(55.1±9.3)岁］的卵巢组织存档蜡块。均经病理确诊，行5μm厚连续切片，室温存放待用。

1.2 不同卵巢组织中GRP和GRPR蛋白的检测抗GRP蛋白多克隆抗体(美国R＆D公司，产品编号MAB35841)、抗GRPR蛋白多克隆抗体(英国Abcam公司，产品编号ab39963)、链霉卵白素-过氧化物酶试剂盒和DAB底物试剂盒购自上海越研生物公司。采用免疫组化SP法检测GRP和GRPR蛋白的表达，实验严格按照试剂盒说明书进行。以胞质内出现黄色颗粒为阳性，均采用已知的胃癌阳性石蜡切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。结果判断标准［9］:光镜下选取20个高倍视野，每个视野计数100个细胞。①根据阳性细胞的比例计分:未见阳性细胞计0分，阳性细胞＜1/3计1分，1/3～2/3计2分，＞2/3计3分。②根据阳性细胞染色强度计分:细胞无着色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。2项积分之积＞1分为阳性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 12.0进行分析，应用χ2检验比较不同卵巢组织中GRP和GRPR蛋白阳性表达率的差异及其与临床病理特征的关系，计算列联系数分析卵巢癌组织中GRP和GRPR表达的关联性，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同卵巢组织中GRP和GRPR蛋白的表达见图1和表1。

2.2 GRP和GRPR蛋白的表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系 见表2。

图1 不同卵巢组织中GRP(A)和GRPR(B)蛋白的表达(SP，×400)1:正常卵巢组织;2:良性卵巢上皮性肿瘤组织;3:卵巢癌组织。

表2 GRP和GRPR蛋白的表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系

2.3 卵巢癌组织中GRP和GRPR蛋白表达的关联性分析 见表3。

表3 卵巢癌组织中GRP和GRPR蛋白表达的关联性 例

3 讨论

正常情况下，GRP是消化道内的一种P细胞产生的分泌性细胞因子，在局部以旁分泌或自分泌的方式调节胃肠激素的分泌和胆囊的收缩，在一些神经系统疾病中还具有传递神经冲动的作用［10］。Qiao等［6］发现，在上游基因PI3K信号通路的作用下，GRP能够显著增强神经母细胞瘤细胞的增殖，使其进入活跃的细胞周期，提示GRP参与细胞的癌变。作者发现卵巢癌组织中GRP和GRPR呈高表达，提示二者可能参与了卵巢癌的发生。恶性肿瘤的发生早期与细胞异常活跃的增殖分裂密切相关，因此，参与恶性肿瘤早期变化的分泌性细胞因子有可能被释放到内环境或血液中，成为肿瘤早期诊断的高度特异性指标，从这一角度来看，GRP亦有可能成为卵巢癌早期诊断的一个有潜力的指标。

该研究还发现，GRP和GRPR均与卵巢癌的分化程度有关，分化程度越低，二者的表达就越高，由此可推测，细胞的分化程度越偏离正常，其分泌GRP的活性也越高，并且GRPR的表达也越高，过高的GRP和高表达的GRPR结合后，又发挥更强的促分裂作用，导致低分化的卵巢癌病情进展加速。

除了促细胞有丝分裂外，Taglia等［11］还发现GRP与GRPR结合后可通过粘着斑激酶(FAK)作用于细胞间黏附因子-1，引起结肠癌细胞的黏附性增加，从而引起肿瘤的侵袭转移。该组资料显示，GRPR还与卵巢癌的FIGO分期和腹水形成有关，说明GRPR不仅参与了卵巢癌变，还可能进一步参与了卵巢癌的侵袭转移。但该研究发现GRP与提示卵巢癌转移的临床指标之间无明显关联，且GRP和GRPR在卵巢癌组织中的表达无关联性。作者认为这可能是由于恶性肿瘤的发生和发展是多个基因共同作用的结果，在进展期卵巢癌中可能还存在另外一些调控GRP表达和分泌的基因，或者卵巢癌发生中的另外一些基因也参与了上调GRPR表达的过程。

作者的研究结果提示GRP和GRPR不仅参与了卵巢癌的发生，同时GRPR与肿瘤分化、腹水等临床病理特征结合，极有可能成为一个判断卵巢癌预后的有潜力的靶标。在下一步的研究中进行卵巢癌患者的组织和血清中GRP的检测，并比对其一致性，将有助于探讨GRP作为卵巢癌的早期诊断指标的价值。

［1］王翠翠，张晓霞，王丽娜，等.卵巢癌患者血清人激肽释放酶10的检测及临床意义［J］.吉林大学学报:医学版，2010，36(3):540

［2］王英芳.上皮性卵巢癌组织中P53和Survivin蛋白的表达［J］.郑州大学学报:医学版，2007，42(5):935

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［6］ Qiao J，Kang J，Ishola TA，et al.Gastrin-releasing peptide receptor silencing suppresses the tumorigenesis and metastatic potential of neuroblastoma［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2008，105(35):12891

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［11］Taglia L，Matusiak D，Matkowskyj KA，et al.Gastrin-releasing peptide mediates its morphogenic properties in human colon cancer by upregulating intracellular adhesion protein-1(ICAM-1)via focal adhesion kinase［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2007，292(1):G182