120例骨髓增生异常综合征的细胞形态学及免疫表型检测分析

王 洁，赵成艳，王 敏，李晓兰

(1.大连市口腔医院检验科，辽宁大连 116021;2.大连医科大学附属第二医院检验科，辽宁大连 116027)

120例骨髓增生异常综合征的细胞形态学及免疫表型检测分析

王 洁1，赵成艳2，王 敏2，李晓兰2

(1.大连市口腔医院检验科，辽宁大连 116021;2.大连医科大学附属第二医院检验科，辽宁大连 116027)

［目的］评价血液及骨髓细胞形态学及干/祖细胞和骨髓细胞表面抗原的检测在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及预后判断中的价值。［方法］对120例MDS患者和对照组20例(缺铁性贫血13例，血小板减少紫癜7例)患者的血液常规测定采用Sysmex-xe-2100血常规分析仪，血液及骨髓细胞涂片采用瑞-姬氏染色法，免疫表型测定采用“Becton Dickinson FACSCalib”流式细胞仪进行分析。［结果］MDS患者外周血以两系或者三系减少多见;骨髓增生程度以活跃和明显活跃为主;病态造血以红系和粒系为主，各占95.0%、61.7%;免疫学表型:干/祖细胞抗原(CD34、HLA-DR)及髓系早期抗原(CD33、CD13、CD117)表达明显增高，并随着病情的恶化逐渐增高，MDSRA组、RCMD组及RAEB组与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05);MDS-RAEB-Ⅱ组与RA组CD34的表达比较差异有显著性意义(P＜0.05);髓系晚期抗原(CD15)在MDS-RAEB-Ⅱ型中降低明显，与对照组比较差异有显著性意义(P＜0.05)。［结论］MDS患者血液骨髓细胞形态学及免疫表型的联合检测，有利于MDS的早期诊断、治疗及预后判断。

骨髓增生异常综合征;血细胞;骨髓涂片;免疫表型

骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes，MDS)是一组起源于骨髓造血干/祖细胞的恶性克隆性疾病，主要特征为一系列病态造血、无效造血及有高风险性发展为急性白血病。因其临床表现不典型，血液改变复杂，缺乏特异性等特点，确诊比较困难。目前，MDS的诊断主要依靠外周血骨髓形态学、细胞遗传学及免疫分型。作者将大连医科大学附属第二医院2006～2010年120例诊断为MDS的患者的形态学和免疫学异常改变进行回顾分析。

1 资料与方法

1.1 临床资料

120例MDS患者，男71例，女49例，年龄为18～82岁，中位年龄57.5岁。并将之前的FAB分型转为相应的WHO分型。由于，MDS-u及5q-分型的MDS患者例数极少，所以，不包括在本次分析之中。对照组20例，男13例，女7例，年龄为17～80岁，中位年龄55.5岁(其中缺铁性贫血13例，血小板减少紫癜7例)。

1.2 方 法

形态学检查指标包括:外周血常规检查:WBC、RBC、Hb及PLT等，并进行涂片分类，血常规检测采用“Sysmex-xe-2100血常规仪”:骨髓穿刺细胞学检查，取材满意，采用瑞氏-姬姆萨染色法染色;免疫学检查指标包括:骨髓细胞免疫表型的测定:造血干细胞和髓系相关标志(CD34、HLA-DR、CD33、CD13、CD14、CD15 和 CD117)，采用“Becton Dickinson FACSCalib”流氏细胞仪分析相关细胞表面抗原类型。

1.3 统计学方法

采用SPSS15.0软件对各型MDS骨髓造血干/祖细胞及髓系相关表面抗原比例进行统计学分析，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血象特点

120例MDS患者中，一系和两系减低患者比例低于三系同时减低患者的比例;RA、RAS、RCMD、RCMD-RS、RAEB-Ⅰ、RAEB-Ⅱ各亚型三系减低分别占 47.3%、50.0%、53.3%、40.0%、50.0%、51.2%。见表 1。

表1 120例MDS患者外周血特点Tab 1 Peripheral blood cell characteristics in 120 MDS patients n(%)

2.2 骨髓象特点

骨髓增生程度整体状况为:以明显活跃占45.0%、活跃占30.0%为主。MDS患者除RA、RAS只有红系病态造血外，其余各型均有两系以上病态造血，分别为粒系占61.7%，红系占95.0%，巨系占28.3%，以红系和粒系病态造血为主，巨系病态造血相对较少。见表2。

2.3 MDS患者骨髓中造血干/祖细胞及髓系抗原表达情况

MDS患者髓系成熟抗原表达异常，CD15作为成熟髓系抗原较对照组有不同程度的减低，在MDS-RAEB-Ⅱ亚型中尤为明显(P＜0.05)。MDS患者髓系早期抗原表达异常，患者的CD13、CD33、CD117的抗原异常表达明显高于对照组(P＜0.05)，并且随着疾病的发展明显恶化，其抗原表达逐渐增高。MDS患者骨髓造血干/祖细胞表达异常。本组MDS患者CD34、HLA-DR的抗原表达，随着MDS的进展即RA→RCMD→RAEB逐渐增高，与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05)。见表3。

表2 120例MDS患者骨髓象特点Tab 2 Bone marrow characteristics in 120 MDS patients n(%)

表3 骨髓造血干/祖细胞及髓系相关表面抗原表达Tab 3 Surface antigen rate of hematopoietic Dry/progenitor and myeloid cells (%)

3 讨 论

MDS在临床与实验室检查中往往缺乏特异性的指标。其临床表现多样，病情发展缓慢复杂，需要较长的时间观察动态变化，给诊断带来了一定的难度。所以，初始诊断用的外周血和骨髓标本最好取自于未采用任何特殊治疗之前。细胞形态学、细胞组织化学和免疫表型特点，用于确定累计的细胞系列和成熟程度［1］。原始细胞技术是分型和确定疾病进程的重要指标，原始细胞的定义采用MDS形态学工作组的标准［2］。外周血和骨髓中原始细胞数以光学显微镜下所见为标准。按照此标准，经过对外周血常规及涂片的检查、骨髓形态学及免疫表型的联合检测，提高其诊断率。

3.1 血象检查

从表1可以看出，MDS患者血象表现为一系、二系或三系减低，其程度依不同的分型而各不相同。作者在实际工作中发现，大多数患者的血红蛋白降低，表现为大细胞性贫血。如果血细胞分析仪提示有幼稚或原始细胞、有核红细胞及巨大血小板等需要做血涂片加以证实，血涂片可以弥补血细胞分析仪在形态学上的不足。血涂片的复检非常重要。如果血涂片中发现原始细胞，以及幼稚粒细胞、幼稚红细胞并伴有病态造血，则对MDS的诊断有很大的帮助。但是，血常规对MDS的诊断远远不够，还需更进一步做骨髓细胞形态学检查。

3.2 骨髓细胞形态学检查

可以了解骨髓中各系细胞的数量和质量的变化，从而反映骨髓造血是否正常。MDS骨髓象的特点基本为无效造血和病态造血。WHO标准将RA、RARS、RCMD、RCMD -RS以及 RAEB细化，便于临床治疗策略的个体化制定，以及预后判断。目前，此方案已经得到了血液学界的广泛认可［3］。而无论是FAB还是WHO分型，关于MDS分型的主要依据都是骨髓细胞形态学检查，即原始粒细胞的多少以及各系的病态造血情况。所以，骨髓细胞形态学的检查尤为重要。本研究分析了120例MDS的骨髓细胞病态造血情况，发现有些RA的病态造血不是很明显，单纯从形态学检查很难鉴定。RCMD及RAEB各系有不同程度的病态造血，对MDS的诊断有很大的帮助，但必须排除良性病态造血，如造血原料缺乏、溶血性疾病和自身免疫性疾病等继发性病态造血。从表2可以看出，红系和粒系病态造血对MDS的诊断十分重要。骨髓病态造血是诊断MDS的关键形态学特征。但是，有些MDS患者病态造血不明显，如RA患者，单纯以形态学难以鉴定。同时，病态造血并非MDS所特有，故骨髓中只有一系病态造血时，诊断MDS尤其需要慎重。建议定期随诊，动态观察血象及骨髓象，并可进行免疫学分型和细胞遗传学检查以明确诊断。

3.3 免疫分型的重要性

虽然细胞形态学一直是诊断MDS的金标准，但在实际工作中，由于病态造血类型繁多，缺乏公认的量化标准，以及工作人员的水平等原因易被忽略。另外，不是所有的MDS患者都存在着特征性的骨髓细胞形态学异常，更要排除某些良性疾病继发病态造血。而有文献报道，异常核型的染色体检出率也仅仅为40% ～70%［4］。大量的研究结果显示，免疫分型在MDS的诊断和预后判断中发挥了重要作用。其中，流式细胞术免疫分型对MDS的诊断和预后具有重要的价值［5，6］，特别是可以定量和定性分析CD34祖细胞或成熟粒细胞，以及单核细胞。MDS是一组恶性克隆性干/祖细胞疾病。某些免疫表型的变化能够对克隆性的髓系恶性肿瘤进行鉴别诊断。同时单一的表型异常并没有特异性，必须结合不同的抗体组合来进行观察。在临床高度怀疑但形态学和遗传学不能诊断时，免疫表型将成为MDS(特别是RA)的重要指标。当骨髓 CD34细胞≥1.5%时，免疫表型对MDS的诊断更具意义［7］。

3.4 髓系原始干/祖细胞表型对于MDS的研究价值

骨髓细胞形态学确定的原始细胞比例通常和流式细胞仪检测的CD34细胞的比例有很好的相关性［8］。从表3也可以看出，MDS-RA组CD34细胞与对照组比较差异有显著性意义，MDS-RAEB-Ⅱ组CD34细胞与MDS-RA组比较差异有显著性意义，即RA/RAS→RCMD/RCMD-RS→RAEB-Ⅰ→RAEB-Ⅱ，患者骨髓细胞CD34表达明显高于正常对照组，并且随着病情的恶化逐渐增高，CD15较晚期出现髓系抗原逐渐减少。HLA-DR、CD34及其他髓系抗原的检测，不仅有助于MDS诊断，而且对预后有重要意义;本组120例MDS患者有23例转化为急性白血病。其中，REAB-Ⅰ型和REAB-Ⅱ型转化为白血病为19例，其他4例。所以，本组实验结果表明，HLA-DR、CD34等早期抗原表达越高，越容易转化为白血病。

本研究对120例MDS患者骨髓与免疫表型的回顾分析，发现其联合检测有助于提高MDS的早期诊断率，并对MDS的诊断、治疗及预后评估有重要临床价值。

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Analysis of cell morphology and immunophenotype detection in 120 patients with myelodysplastic syndrome

WANG Jie，ZHAO Cheng-yan，WANG Min，LI Xiao- lan
(1.Department of Laboratory，Dalian Stomatological Hospital，Dalian116021，China;2.Department of Laboratory，the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University，Dalian116027，China)

Abstract:［Objective］To evaluate morphology of the blood and bone marrow cells and surface antigen detection of stem/progenitor and bone marrow cells in the diagnosis and prognosis of patients with myelodysplastic syndrome(MDS).［Methods］The study included 120 MDS cases and 20 cases as control group，which included 13 iron - deficiency anemia cases and 7 thrombocytopenic purpura cases.Blood routine was determined by"Sysmex - xe - 2100"blood analyzer.Blood and bone marrow smears were dyed by"Wright- Giemsa"dyeing method.Immunophenotypes were analyzed by flow cytometric using BD FACSCalib.［Results］MDS patients＇peripheral blood showed two - line or three - line reduce.Bone marrows＇myeloproliferative degree was active and obvious active.Pathological hematopoietic was seen with erythroid and myeloid lines，respectively account for 61.7%and 95.0% .Stem/progenitor cells＇expression of antigens(CD34，HLA - DR)and myeloid early antigens(CD33，CD13，CD117)were significantly higher，and gradually heightened with the aggravation of the illness.MDS-RA，RCMD and RAEB type all had significant difference from control group(P＜0.05).The expression of CD34 in MDS-RAEB -Ⅱtype had presented difference with MDS-RA(P＜0.05).Myeloid late antigen(CD15)decreased significantly in MDS -RAEB -Ⅱtype(P＜0.05).［Conclusion］Blood and bone marrow cell morphology combined with immunophenotype detection in MDS patients is helpful for early diagnosis，treatment and prognosis judgment of MDS.

Key words:myelodysplastic syndromes;blood cell;bone marrow smears;immunophenotyping

R553.1

A

1671-7295(2011)05-0495-04

2011-06-03;

2011-08-12

王 洁(1971-)，女，山东烟台人，副主任技师。E-mail:Melen Wang5@gmail.com

赵成艳，主任技师。E-mail:zcy196412@163.com