HPLC法测定痛泄胶囊中升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷、芍药苷含量

陈静，李正杰，张彦芬，杨天仁

(1.青岛市海慈医疗集团，山东 青岛 266033;2.河北以岭医药研究院，河北 石家庄 050035;3.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

痛泄胶囊为我公司自主研发的中药六类新药，由白术、白芍、防风、陈皮、木香等中药组方而成。具有补脾柔肝，祛湿止泻之功效。在临床上用于腹泻、腹痛等症。为了能有效地控制本产品的质量，采用HPLC法测定制剂中升麻素苷，5－O－甲基维斯阿米醇苷，芍药苷的含量［1］，现报道如下。

1 仪器、材料与试剂

1.1 仪器

Waters 2695 Separations Module，Waters 2998 Photodiode Array Detector;AT201型METTLER－TOLEDO电子天平;KQ－250B型超声波清洗器。

1.2 材料

升麻素苷(批号111522－200406)、5－O－甲基维斯阿米醇苷(批号111523－200405)、芍药苷(批号110736－200526)均由中国药品生物制品检定所提供;痛泄胶囊由石家庄以岭药业股份有限公司提供。

1.3 试剂 乙腈(色谱纯);水为重蒸水;中性氧化铝(分析纯);其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色 谱 柱:WatersSymmetry(5μm，250mm ×4.6mm);流动相:乙腈－0.1%磷酸(梯度洗脱见表1);流速:1.0ml/min;检测波长:230nm;柱温:30℃;进样量:10μL。

表1 梯度洗脱顺序

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液

精密称取升麻素苷对照品11.97mg、5－O－甲基维斯阿米醇苷对照品 11.88mg、芍药苷对照品12.75mg置于50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成对照品贮备液，用时精密吸取贮备液5mL至25ml量瓶，用甲醇稀释至刻度作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液

取痛泄胶囊内容物，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称重，超声处理30min，取出，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，加于已装填好的中性氧化铝柱上(3g，100～200目，内径约1.5cm)，水30ml洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液

取缺防风及芍药痛泄胶囊试样，按“2.2.2”项下方法制备，得阴性对照溶液。结果，升麻素苷，5－O－甲基维斯阿米醇苷，芍药苷各峰对应的保留时间处无干扰杂质峰。结果见图1。

图1 痛泄胶囊含量测定色谱图

2.3 线性关系考察

吸取对照品溶液 1、3、5、7、10、15μL 注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，分别以升麻素苷量(ng)，5－O－甲基维斯阿米醇苷量(ng)，芍药苷量(ng)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程:Y=1 829.3X+6 977.5(r=0.999 9);Y=2 007.9X －6 716.9(r=0.999 9)，Y=1 412.8X+1 252.7(r=0.999 9)。结果表明，升麻素苷在47.88～718.2ng范围内，线性关系良好。5－O－甲基维斯阿米醇苷在47.52～712.8ng内，线性关系良好。芍药苷在51～765ng范围内，线性关系良好。

2.4 稳定性实验

取同一供试品溶液，分别于配制后 0、2、4、8、12、24h进样，测定升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷、芍药苷含量，RSD值分别为1.03%、0.95%、0.83%。表明样品溶液在24h内稳定。

2.5 精密度实验

精密吸取供试品溶液连续进样6次，测定升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷、芍药苷峰面积的RSD分别为0.87%、0.59%、1.02%，精密度良好。

2.6 重复性实验

取同一批样品9份，分为高(0.48g)、中(0.40g)、低(0.32g)3个剂量进行制备，测定。测得升麻素苷的含量为0.507 2mg/g(RSD=0.98%)，5－O－甲基维斯阿米醇苷的含量为0.455 8mg/g(RSD=0.67%)，芍药苷的含量为2.894 8mg/g(RSD=0.85%。

2.7 回收率实验

采用加样回收实验，取同一批样品9份，分为3组，分别精密加入一定量的对照品，按供试品制备项下操作，测定，计算回收率。升麻素苷的平均回收率为99.88%(n=9)，RSD为1.08%;5－O－甲基维斯阿米醇苷的平均回收率为99.68%(n=9)，RSD为0.82%;芍药苷的平均回收率为100.82%(n=9)，RSD为0.91%，结果见表2。

表2 回收率试验结果(n=9)

2.8 样品测定

取3批痛泄胶囊，按上述方法制备供试品溶液，测定，结果见表3。

表3 样品测定结果(n=9)

3 讨论

3.1 本实验通过对甲醇－水、乙腈－水、乙腈－磷酸溶液等多种不同比例的流动相进行比较实验，发现采用文中流动相进行梯度洗脱，升麻素苷、5－O－甲基维斯阿米醇苷、芍药苷均能达到基线分离，有利于控制该制剂的质量。

3.2 为了选择合适的检测波长，分别对各对照品进行光谱扫描，结果发现，芍药苷在231nm附近有最大吸收，5－O－甲基维斯阿米醇苷在213、231、295nm处亦有最大吸收，而升麻素苷在214、246、299nm处有最大吸收，在214～246nm之间吸收呈曲线下降趋势，综合考虑，最终选择中国药典中白芍项下芍药苷检测波长230nm为检测波长。

［1］ 王晟，张丽艳，吴涛.HPLC法测定胃宝颗粒中芍药苷的含量［J］.中医药学报，2010，38(2):113 －114.