清目胶囊质量标准研究

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清目胶囊主要成分为菊花、秦皮等多种中药。该药为复方制剂，具有散风清热、平肝明目等作用[1]。

1 仪器与试药

美国戴安(DIONEX)P860高效液相色谱仪，Kromasil5-C18(250 mm×4.6 mm)色谱柱；旋转蒸发装置(RE502型，上海亚荣生化仪器厂)；绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110753-200212)；乙腈为色谱纯；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 菊花的薄层色谱法(TLC)鉴别 取清目胶囊内容物约2.0 g，加甲醇50 mL，置具塞试管中，超声处理40 min，静置1 h，滤过，进行减压旋转蒸发，挥去乙醇味，残渣加8 mL沸水，静置，放冷，用10 mL乙醚洗涤两次，转移至10 mL容量瓶中，加入双蒸水定容至刻度，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照TLC(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各0.5～1 μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸-水(2∶30∶2∶2∶4)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点(图1)。

图1 菊花药材的TLC图谱

2.1.2 秦皮甲素、秦皮乙素的TLC鉴别[2]取清目胶囊内容物约2.0 g，加甲醇50 mL，置具塞试管中，超声处理40 min，静置1 h，滤过，进行减压旋转蒸发，挥去乙醇味，残渣加8 mL沸水，静置，放冷，用10 mL乙醚洗涤两次，转移至10 mL容量瓶中，加入双蒸水定容至刻度，作为供试品溶液。另取秦皮甲素对照品，秦皮乙素对照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照TLC(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF 254薄层板上。以三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。喷以三氯化铁-铁氰化钾试液(1∶1)的混合溶液，斑点变为深蓝色(图2)。

2.2 绿原酸的含量测定[3-4]

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Kromasi15-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈∶0.01 mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH=4.5)=8∶92，流速为0.8 mL/min，检测波长为327 nm，进样量为20 μL。此条件下绿原酸峰的理论塔板数不低于5 000，绿原酸与其他组分的分离度大于1.5。色谱图(图3～4)。

图3 绿原酸对照品的HPLC图谱

图4 清目胶囊中样品中绿原酸的HPLC图谱

2.2.2 供试品溶液的制备 取清目胶囊内容物约2.5 g精密称定，加甲醇50 mL，超声提取40 min，过滤，取滤液浓缩至干，加沸水20 mL溶解，用乙醚洗涤2次，25 mL/次，取水层，加双蒸水定容至25 mL量瓶。以0.45 μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

2.2.3 对照品溶液制备 精密称取绿原酸标准品12.5 mg，置25 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，制成0.500 mg/mL绿原酸对照品溶液。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取绿原酸对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容，分别得到浓度为0.050、0.100、0.150、0.200、0.250、0.300 mg/mL的标准品溶液，用HPLC法测定。以峰面积积分值(Y)对绿原酸检测浓度(X)进行线性回归，得回归方程为Y=1 205.8X-0.152 9(r=0.999 3)，结果表明，绿原酸检测浓度在0.050～0.300 mg/mL的范围内与峰面积分值呈良好线性关系。

2.2.5 精密度试验 精密吸取绿原酸对照品溶液20 μL，连续进样5次，按上述色谱条件测定。结果，RSD%=0.399%(n=5)，表明仪器精密度良好。

2.2.6 重现性试验 取同一批号的清目胶囊适量，按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果，RSD%=1.01%(n=5)，表明方法重现性良好。

2.2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的清目胶囊内容物适量，置于100 mL具塞锥形瓶中，分别精密加入低、中、高不同浓度的绿原酸对照品溶液，按“2.2.2”中所用方法制得供试品溶液，按上述色谱条件分别测定峰面积。结果，平均回收率为103%，RSD%=1.02(n=5)。

2.2.8 样品含量测定 精密称取已知含量的清目胶囊内容物适量，按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算含量。结果3批清目胶囊 (批号：060301、060906、061207)中绿原酸的含量分别为0.642 5、0.605 7、0.663 4 mg/粒。

3 讨论

本文采用TLC法对方中绿原酸、秦皮甲素和秦皮乙素进行定性鉴别，方法简便，专属性强。

绿原酸是一种对光敏感的物质，见光容易分解。因此，在处理和检测过程中，应将其置于棕色量瓶中，尽量减少其暴露在光照下的时间。通过比较各种流动相比例，本试验采用乙腈∶0.01 mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH=4.5)=8∶92效果更好。综上所述，本文所建标准可以用于清目胶囊的质量控制。

[1]王春霞.菊花的药理和临床应用研究[J].广东医学，2005，26(12)：1740-1741.

[2]魏秀丽，杨春华，梁敬钰.中药秦皮的化学成分[J].中国天然药物，2005，3(4)：228-230.

[3]苏祝成，叶立扬，冯亚菲.杭白菊浸提液的不同萃取分离物对O2自由基清除作用研究[J].食品科学，1995，16(2)：7-9.

[4]顾瑶华，秦民坚.我国药用菊花的化学及药理学研究新进展[J].中国野生植物资源，2004，23(6)：7-9.