水提与醇提对竹子中愈创木酚含量的影响

陈秋香 ，蒋晓煌 ，李 红

（1.长沙市中医院，湖南 长沙 410100；2.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

鲜竹沥(Succus bambusae)又名竹油，为禾木科植物淡竹的茎用火烤灼而流出的液体，具有清热化痰、镇惊利窍作用，可用于治疗中风痰迷、肺热痰壅等症[1-2]。竹沥始载于《神农本草经集注》，《本草衍义》曰：“竹沥行痰，通达上下百骸毛窍诸处，如痰在巅顶可降，痰在胸膈可开，痰在四肢可散，痰在脏腑可利，痰在皮里膜外可行。又如癫痫狂乱，风热发痉者可定；痰厥失音，人事昏迷者可省，为痰家之圣剂也。”熊艳等[3]以竹子中主要有效成分愈创木酚为评价指标，用乙醇提取法制备竹沥，并用正交法进行工艺优选[4]。因乙醇价格昂贵，易燃易爆，而竹子中有效成分——酚类可溶于水，因此，本文对水提与醇提进行比较，以便找到经济、安全的提取溶剂。

1 试验材料

1.1 仪器

LC-10ATP型高效液相色谱仪（包括LC-IOATv串联双柱塞，SPD-10Avp UV-VIS检测器、C-R7A／C-R8A数据处理机，CTO-10ACvp柱温箱，岛津）；KDM型调温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）；Adventurer TMAR1140电子分析天平 （感量0.1mg，奥豪斯国际贸易有限公司）；UV－2465型紫外可见分光光度仪（日本岛津）；FW100型高速万能粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。

1.2 试剂

愈创木酚对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：111510-200911）；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为高纯水。

1.3 药品

淡竹：经浙江林学院竹类研究所应叶青研究员鉴定为禾本科刚竹属植物phyllostachys nigra(Lodd)Muro var henonis(Mitf)Stapf ex.的新鲜杆茎，产于湖南省浏阳市。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[5]

流动相为 0.5%磷酸的水溶液-乙腈（78∶22），固定相为 VP-ODS C18柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速1.0 mL/min；柱温20℃；检测波长：220 nm。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取愈创木酚对照品28.6 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再精密吸取1.0 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得22.88μg/mL的对照品溶液。

2.3 样品的提取

2.3.1 水提 （1）选取粗细、长短相近的竹子，除去枝叶，两端去节，用刀将竹子劈成长约2 cm、粗0.2 cm大小的细段。取100 g，置蒸馏瓶中，加10倍量蒸馏水浸泡40 min后，放电热套中加热回流提取1 h，滤过，再加10倍量蒸馏水，加热回流提取 0.5 h，滤过，合并两次滤液，放冷，抽滤，滤液定容至1 500 mL，得水提样品1，备用。将第1次加水量改为7倍、第2次加水量改为5倍，同法提取、滤过、定容至1 000 mL，得竹子水提样品2；（2）将竹子细段粉碎成粗粉，取100 g，同上加7倍、5倍水提2次、滤过、定容至1 000 mL，得竹子水提样品3，备用。

2.3.2 醇提 同上取竹子细段100 g，置蒸馏瓶中，加10倍量70%乙醇浸泡40 min后，放电热套中加热回流提取1 h，滤过，再加10倍量70%乙醇，加热回流提取0.5 h，滤过，合并2次滤液，放冷，抽滤，滤液定容至至1 500 mL，得醇提样品1，备用；将第1次加醇量改为7倍、第2次加醇量改为5倍，同法提取、滤过、定容至1 000 mL，得醇提样品2，备用。

2.4 供试品溶液的制备

分别精密吸取上述水提液与醇提液各1/10，置水浴上浓缩至约50 mL，用稀盐酸调节pH 1～2，用乙醚萃取 3 次（20、10、10 mL），合并乙醚萃取液，自然挥干，残渣用甲醇少量多次溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度定容，摇匀，作为供试品溶液。

2.5 线性关系的考察

精密吸取愈创木酚对照品溶液 2、4、6、8、10 μL依次进样，测定峰面积，以进样量为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，回归方程为：

Y=2 788 994.755X-7 060.8，r=0.999 7

结果表明，愈创木酚在0.046～0.229μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度实验

精密吸取愈创木酚对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪中，重复进样6次，测定愈创木酚的吸收峰面积，计算RSD为1.06%，表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性实验

精密吸取水提样品溶液 10 μL， 于 0、2、4、8、16 h进样，测定愈创木酚的吸收峰面积，计算RSD为1.15%，表明样品溶液在16 h内稳定。

2.8 重复性实验

对同一批竹子粗粉的水提液，按供试品液制备方法平行制备6份，精密吸取10μL，依法测定愈创木酚的吸收峰面积，计算RSD为2.14%。

2.9 加样回收率实验

取竹子粗粉 6份，按“2.3.1水提（2）”中水提样品3方法加水提取2次，抽滤，合并滤液，各取1/2，约500 mL，每份加入0.268 mg/mL的愈创木酚对照品1.0 mL，加水定容至1 000 mL，精密吸取100 mL置水浴上浓缩至约50 mL，按“2.4”供试品溶液制备法制备供试液。再依法同上测定愈创木酚的吸收峰面积，外标法计算含量，并计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果 （n=6）

2.1 0 样品的含量测定

取对照品溶液与供试品溶液，过0.45μm微孔滤膜，分别吸取10μL注入高效液相色谱仪中测定其峰面积，外标法计算含量。结果见表2、图1～3。

实验结果表明，水提法略低于醇提法，但两者比较无显著性差异，将竹子粉碎后再水提，提取效率最高。

表2 水提与醇提愈创木酚含量测定结果 （n=3）

图1 愈创木酚对照品HPLC图

图2 水提液HPLC图

图3 醇提液HPLC图

3 讨论

实验结果表明，水提取与醇提取愈创木酚含量相差不大，可以用水提法代替醇提法，以节约成本，增加安全性；从溶媒用量来看，两次加水10倍与第1次加水7倍、第2次加水5倍的含量也无显著差异，为减少资源浪费和降低成本，宜采用将竹子粉碎后加水7倍、5倍提取。

含量测定方法基本参照文献方法[5-7]，稍作改进，除去了5%碳酸氢钠溶液洗涤这一步，使愈创木酚损失更少，回收率更高。

中药竹沥是我国传统用药，具有确切的疗效，丰富的资源。近年来对竹沥的研究多集中在化学成分[8]、制备工艺[9]、含量测定[10]及质量标准[11]，但对其品种、有效成分、药理作用等方面研究相对较少。熊艳等报道，醇提法制备淡竹沥的愈创木酚含量(4.19μg/g)远远高于传统的干馏法(0.193μg/g)[4]，这可能是高温干馏将愈创木酚破坏所致。

[1]雷载权，张廷模.中华临床中药学[M].北京：人民卫生出版社，1998：1 338.

[2]宋立人，洪 恂，丁绪亮，等.现代中药学大辞典[M].北京：人民卫生出版社，2001：839.

[3]熊 艳，吴学文，蒋孟良.淡竹沥四种不同制备工艺的比较研究[J].中成药，2006，28（12）：1 825-1 826.

[4]熊 艳，吴学文，蒋孟良，等.正交试验优选淡竹沥的制备工艺[J].中国医院药学杂志，2008，28（15）：1 253-1 255.

[5]熊 艳，吴学文，蒋孟良.HPLC测定鲜竹沥口服液中愈创木酚的含量[J].中国中药杂志，2007，32(8)：747-748.

[6]李 红，蒋孟良.HPLC法测定不同种类竹子的竹沥中愈创木酚的含量[J].湖南中医药大学学报，2010,30(5)：38-40.

[7]李 红,蒋晓煌,蒋孟良,等.采收对竹子中愈创木酚含量影响的研究[J]. 中国药事，2010，24（5）：441-443.

[8]许小平，李忠琴，欧敏锐，等.竹沥成分分析及祛痰镇咳作用的实验研究[J].中国新医药，2003，2（12）：3-6.

[9]熊 艳，吴学文，蒋孟良.两种工艺制备竹沥中游离氨基酸比较[J].时珍国医国药，2007，18（3）：631-632.

[10]李 红，蒋孟良，刘党生，等.紫外法测定竹沥中总酚含量[J].中国现代中药，2008，10（8）：16-17，61.

[11]周孟辉，李 红，蒋晓煌，等.不同采收期水竹所制竹沥的HPLC指纹图谱研究[J].湖南中医药大学学报，2009，29（3）：33-36.