吡格列酮对老年冠心病合并糖尿病患者内皮祖细胞数量及脂联素水平的影响

陈平英 ，余以勇 ，曹 政 ⋆，吴瑞霞 ，陈 彬 ，华先平 ，杨 勇

（1．湖北医药学院附属太和医院 心内科，湖北十堰 442000；2．竹溪县人民医院 心内科，湖北竹溪 442300）

吡格列酮对老年冠心病合并糖尿病患者内皮祖细胞数量及脂联素水平的影响

陈平英1，余以勇2，曹 政1⋆，吴瑞霞1，陈 彬1，华先平1，杨 勇1

（1．湖北医药学院附属太和医院 心内科，湖北十堰 442000；2．竹溪县人民医院 心内科，湖北竹溪 442300）

目的：观察吡格列酮对老年冠心病合并糖尿病患者外周血中内皮祖细胞（EPCs)数量及血脂联素水平的影响。方法：本研究共入选65例老年（年龄≥60岁）冠心病合并糖尿病患者，随机分为吡格列酮组和安慰剂对照组，用药12周后利用流式细胞术双色分析法检测2组患者外周血中EPCs的百分比，其中EPCs以CD34+／KDR+双标记阳性确定，对比2组患者在服药前后EPCs数量及血脂联素水平的变化。结果：2组患者用药前EPCs数量基本相近，观察 12 周后吡格列酮组患者 EPCs数量显著增加（0.027±0.017vs0.046±0.03，P＜0.05），对照组患者12周后EPCs数量虽较前有所增加，但无统计学差异。12周后2组患者脂联素水平均有所增加，但吡格列酮组患者治疗前后血脂联素水平显著升高（4.5±1.7mg/Lvs7.0±2.3mg/L，P＜0.05）。结论：吡格列酮能够促进老年冠心病合并糖尿病患者EPCs的动员过程，还可提升患者血脂联素水平，可能具有抗动脉硬化功效。

内皮祖细胞；吡格列酮；老年；冠状动脉疾病；糖尿病

Author’saddressDepartmentofCardiology，TaiheHospital，HubeiUniversityofMedicine，HubeiShiyan 442000，China

近期临床研究证实：吡格列酮能够降低2型糖尿病患者心血管事件的发生率[1]，但其具体机制目前尚不清楚。内皮祖细胞 （endothelial progenitor cell，EPCs)在动脉粥样硬化性疾病的内皮功能修复过程中发挥了重要的作用[2]，而且冠心病患者外周血EPCs的数量与其心血管不良事件的发生风险呈负相关[3]，EPCs数量可以作为预测冠心病患者发生心脏不良事件风险性的重要指标，研究发现：吡格列酮具有促进2型糖尿病患者EPCs动员的作用[4]，但对于合并有糖尿病的冠心病患者是否具有类似的作用目前尚不清楚，本研究旨在观察吡格列酮对老年冠心病合并糖尿病患者EPCs数量及血脂联素水平的影响，并探讨吡格列酮改善合并糖尿病冠心病患者临床预后的可能机制。

1 资料与方法

1.1 主要试剂

FTIC标记的CD34抗体购自美国BD Pharmingen公司。 藻红蛋白（phycoerythrin，PE)标记的VEGFR-2+／KDR单克隆抗体，流式检测专用红细胞裂解液试剂盒（包含红细胞裂解液、洗液及固定液)以及脂联素检测ELISA试剂盒均购自美国R&D公司。

1.2 研究对象及方案

2010年6月～2011年5月在我科住院的、合并2型糖尿病的不稳定型心绞痛患者，入选标准包括：①经临床确诊的2型糖尿病患者且糖化血红蛋白（HbA1c)水平在6.5%～9.0%；②经冠脉造影证实为冠心病，临床表现符合不稳定心绞痛诊断标准且在入院期间接受冠脉介入治疗者；③年龄60～75岁；④无心功能不全表现；⑤未合并严重肝、肾疾患者。

排除标准为：①已接受过噻唑烷二酮类药物治疗者；②存在应用吡格列酮禁忌证者，如：药物过敏、心功能不全、肝肾功能异常者。

将入选患者随机分为吡格列酮组和安慰剂对照组，对照组患者不能选用噻唑烷二酮类药物，可由主治医师根据病情选择磺脲类、双胍类、α-糖苷酶抑制剂等口服药物以及皮下注射胰岛素控制血糖，吡格列酮组患者应用吡格列酮（30mg/d）治疗，如血糖控制不佳可考虑加用磺脲类、双胍类、α-糖苷酶抑制剂等口服药物以及皮下注射胰岛素控制血糖，所有入选患者均要求在入院后血糖控制于目标水平 （即空腹血糖：3.9～7.2mmol/L，随机血糖≤10.0mmol/L），并于入组前及研究12周时检测EPCs数量和血脂联素的水平。

1.3 冠脉介入治疗

患者术前常规服用阿司匹林、氯吡格雷药物，之前未服用上述药物者，按指南要求术前给予负荷量（300mg顿服），冠脉介入治疗术中应用肝素（100IU/kg）抗凝治疗，冠脉支架均选用国产雷帕霉素洗脱支架（Partner支架，乐普公司），术后正规服用双联抗血小板药物至少1年。

1.4 EPCs数量和血脂联素水平的检测

所有患者在接受冠脉介入治疗术后即刻及12周后抽取外周静脉血以检测EPCs数量和血脂联素的水平。EPCs数量检测：采集外周静脉血标本各取100μl，分别加入2个15ml的离心管中。取一管作阴性对照 （未加PE标记和APC标记的抗体)，另一管中加入10μl FTIC标记的CD34抗体及10μl PE标记的VEGFR-2+/KDR单克隆抗体，震荡混匀，室温避光孵育15min。将流式检测专用红细胞裂解液用去离子水稀释10倍后加入2ml裂解红细胞，震荡混匀，室温暗处放置10 min，接着以300g离心力离心5min后弃上清。将流式检测专用洗液用去离子水稀释10倍后加入2ml稀释的检测专用洗液并震荡混匀，再次以300g的离心力离心5min后弃上清，加入400μl稀释后洗液及50μl固定液，最后利用Beckman流式细胞仪（美国Beckman公司)检测分析CD34+/KDR+双标记阳性细胞的百分比。以EPCs占外周血有核细胞的百分比代表外周血EPCs数量。血脂联素的检测采用ELISA法测定。

1.5 统计学方法

应用SPSS13.0统计学软件。计量资料比较采用t检验和单因素方差分析，2组间治疗后差别的比较应用协方差分析，计数资料比较采用卡方检验。

2 结果

2.1 患者的临床基本特征

吡格列酮组男性患者20例，对照组男性患者23例。表1示，2组患者的基础血糖水平及使用胰岛素治疗患者的比例基本相近，在冠心病危险因素（如吸烟、高血压、血脂异常等）方面，2组间均无显著性差异。

表1 2组患者的临床及冠脉病变特征

表3 EPCs数量和血脂联素的变化情况

表2 冠脉病变特征及介入治疗情况

2.2 2组患者冠脉病变特征及介入治疗情况

2组患者在冠脉病变数量、分布位置以及复杂病变比例方面基本相近，吡格列酮组患者共植入56枚支架，对照组共植入62枚支架。表2示，在PCI术中所用支架的平均长度及支架直径方面，2组患者间无显著性差异。

2.3 EPCs数量和血脂联素的变化情况

表3示，2组患者在治疗前EPCs的数量基本相近，12周后吡格列酮组患者EPCs数量较治疗前显著增加（0.046±0.030vs0.027±0.017，P＜0.05），对照组患者研究前后EPCs数量无显著性差异。12周后吡格列酮组患者EPCs数量较对照组显著增加（0.046±0.030vs0.033±0.019，P＜0.05）。 2 组患者在用药12周后血脂联素的水平均有所增加，但吡格列酮组患者治疗后血脂联素水平较治疗前显著升高（7.0±2.3mg/Lvs4.5±1.7mg/L，P＜0.05）。

3 讨论

内皮祖细胞（EPCs）是一类能增殖并分化成血管内皮细胞的前体细胞，研究已证实：EPCs在血管内皮损伤后自身修复过程中发挥了极其重要的作用[5]。目前公认的EPCs表面标记物有3种：CD133、CD34 和 VEGFR-2 （KDR)，3 种标记物均阳性的EPCs主要存在于骨髓中，位于外周血中的EPCs表达CD133减少，但继续表达CD34，并开始表达KDR[6]。因此，本实验以表达CD34和KDR双阳性的细胞作为循环EPCs，结果发现：经吡格列酮治疗12周后，入选患者CD34+/KDR+细胞的数量显著增高，说明吡格列酮能够提高合并糖尿病冠心病患者外周循环中EPCs的数量。

循环EPCs数量可以作为预测血管功能和心血管病危险程度的指标，其数量减少提示血管内皮修复能力降低，心血管疾病发生风险的增高[3]。在有关糖尿病患者的研究中发现：与非糖尿病健康者相比，糖尿病患者外周循环中EPC数量明显减少，且与糖尿病严重程度呈反相关，目前认为：糖尿病患者EPC数量减少导致内皮修复功能失调是促进动脉粥样硬化性疾病进展的重要因素之一[7]。结合本研究的结果提示：吡格列酮能够促进糖尿病患者EPC的动员，因此在改善机体血管内皮修复能力、抑制冠状动脉粥样硬化性疾病进展方面能够发挥有益的作用。

本研究还发现：吡格列酮能够提升老年冠心病合并糖尿病患者血脂联素的水平。体外研究也发现：吡格列酮能够通过直接激活转录区上游的启动子增加脂联素mRNA的转录水平，进而促进脂肪组织分泌脂联素[8]。脂联素是一种由脂肪组织合成分泌的具有胰岛素增敏作用的调节激素，该激素能够通过减轻内皮细胞炎性损伤、减少泡沫细胞形成以及抑制血管平滑肌细胞的增殖、迁移等多种途径发挥抗动脉粥样硬化的作用[9]，近来研究还发现：脂联素还具有抑制EPC凋亡[10]、改善EPC内皮修复能力的作用[11]，结合本研究的结果提示：吡格列酮有可能通过上调机体血脂联素的分泌水平，进一步促进机体EPC的动员、增殖过程。由于本研究入选的患者例数较少，这一结论尚有待于更大样本量的研究来证实。

[1]Dormandy JA，CharbonnelB，Eckland DJ，etal.Secondary prevention of macrovascular events in patients with type 2 diabetes in the PRO active study（PROspective pioglit azone clinical trial in macro vascular events)：a randomised controlled trial[J].Lancet，2005，366：1279-1289.

[2]GeftD，SchwartzenbergS，George J，etal.Circulating endothelial progenitor cells in cardiovascular disorders[J].Expert Rev Cardiovasc Ther，2008，6：1115-1121.

[3]Caroline SL，Lothar R，Stephan F，et al.Reduced number of circulating endothelial progenitor cells predicts future cardiovascular events：proof of concept for the clinical importance of endogenous vascular repair[J].Circulation，2005，111；2981-2987.

[4]Pistrosch F，Herbrig K，Oelschlaegel U，et al.PPARγ-agonist increases number and migratory activity of cultured endothelial progenitor cells[J].Atherosclerosis，2005，183：163-167.

[5]Zamptaki A.Vascular repair by endothelial progenitor cells[J].Cardiovascular Research，2008，78：413-421.

[6]Fadini GP，Baesso I，Albiero M，et al.Technical notes on endothelial progenitor cells：ways to escape from the knowledge plateau[J].Atherosclerosis，2008，197：496－503.

[7]Fadini CP，Agostini C，Avogaro A，et al.Endothelial progenitor cells and vascular biology in diabetes mellitus：current knowledge and future perspectives[J].Current Diabetes Reviews，2005，1：41-58.

[8]Barry S，Camille R.Adiponectin translation is increased by the PPAR-γ agonists pioglitazone and-3 fatty acids[J].Am J Physiol Endocrinol Metab，2009，296：E480-489.

[9]Kobashi C，Urakaze M，Kishida M，et al.Adiponectin inhibits endothelial synthesis of interleukein-8[J].Circ Res，2005，97：1245-1252.

[10]Lavoie V，Kernaleguen AE，Charron G，et al.Functional effects of adiponectin on endothelial progenitor cells[J].Obesity，2011，19：722-728.

[11]Huang PH，Chen JS，Tsai HY，et al.Globular adiponectin improveshigh glucose-suppressed endothelialprogenitor cell function through endothelial nitric oxide synthase dependent mechanisms[J].Diabetes，2010，59：2949-2959.

Effect of pioglitazone on adiponectin and endothelial progenitor cells in elderly patients with coronaryartery disease and diabetes mellitus

CHEN Ping-ying，YU Yi-yong，CAO Zheng，et al//Journal of China-Japan Friendship Hospital，2011 Dec，25（6）：345－347

Objective：To evaluate whether pioglitazone have the effect on endothelial progenitor cell （EPCs)mobilizing and the plasma level of adiponectin in elderly patients with coronary artery disease and diabetes mellitus.Methods：Sixty-five elderly patients with coronary artery disease and diabetes mellitus after successful percutaneous coronary intervention were randomized into pioglitazone group （n=32)or placebo group （n=33).Peripheral blood samples were drawn at baseline and 12 weeks later to assess the number of EPCs and measure the plasma level of adiponectin.Circulating EPCs were defined by the surface markers CD34+/KDR+and analyzed by flow cytometry.Results：CD34+/KDR+cells were similar at baseline between the two groups.The number of EPCs were no significant change in the placebo group.In contrast，a significant increase of the number ofEPCswasseen in the pioglitazone group （0.027 ±0.017vs0.046 ±0.03，P ＜0.05）.Theplasmalevelsof adiponectin，similar in the 2 groups at baseline，were significantly more increased by pioglitazone than by placebo at 12-week follow up（P＜0.05）.Conclusion：Pioglitazone have the effect on EPCs mobilizing and a potent anti-atherosclerosis function in elderly patients with coronary artery disease and diabetes mellitus.

endothelial progenitor cells；pioglitazone；elderly；coronary artery disease；diabetes mellitus

R54

A

1001-0025（2011）06-0345-03

10.3969/j.issn.1001-0025.2011.06.007

1*本文通讯作者。

陈平英（1980－），女，住院医师。

2011－08－16

2011－10－18