黎映静,刘星海
(深圳市龙岗区横岗人民医院,广东深圳 518115)
肾小管的间质纤维化为肾脏慢性疾病的发展终归,也是终末期肾功能出现衰竭的原因,其纤维化的病变程度严重的影响了肾功能的情况,所以寻求改善和干预其纤维化的方法有着重要的临床意义[1]。近年来转化生长因子在纤维化的病变中作用已被肯定,被称为纤维化的发展的重要决定因子[2],而绿茶中的儿茶素没食子酸酯(EGCG)抗氧化的作用最为有效,是重要的非酶抗氧化剂。本文通过动物实验的方法分析了EGCG对大鼠的神纤维化的保护作用和机制,现报道如下。
1.1 对象和材料选取30只雄性SD大鼠为研究对象,随机分为3组,假手术组、梗阻组、ECGC组各10只,3组大鼠术前体重差异无统计学差异,均证实为健康大鼠。TGF-β免疫化试剂盒购自上海丰翔生物科技有限公司,EGCG试剂为本实验室自行提供。
1.2 模型制作梗阻组及EGCG组行单侧的输尿管结扎术,乙醚对大鼠麻醉之后,75%的乙醇消毒,腹正中偏左切口,切开皮肤及腹腔,对肾脏及输尿管游离,组织钳托起左侧输尿管的中段,以止血钳夹住后,4-0丝线自两端行结扎,结扎部位在肾盂的近端及远端。两结扎点中点行剪断,之后缝合皮肤。假手术组采用相同入路分离输尿管,但不行结扎。假手术组及梗阻组在术前1 d生理盐水灌胃,EGCG组给予EGCG灌胃,剂量均为20 mg/(kg◦d),连续 3 d。EGCG组术后第7 d同剂量EGCG注射液静脉注射。
1.3 检测方法术前,术后2 d、4 d、6 d、8 d测量大鼠体重、血肌酐值、24 h尿蛋白量、尿糖定性。术后8 d处死大鼠后左肾组织HE染色分析肾组织纤维化情况,免疫组化法测定随即10高倍镜的视野内免疫组化(+)的计数,半定量分析以(+)细胞数在视野中的平均百分比计算[3]。
1.4 统计学方法数据均用SPSS 17.0统计分析软件包进行处理。计量数据以x-±s表示,采用t检验,计数数据采用 χ2检验。且P<0.05为对比差异有统计学意义。
2.1 体重改变3组大鼠术前及术后8 d内体重变化情况见表1,组内比较,术前及术后8 d各组间体重变化均用统计学差异(P<0.05),组间比较,3组大鼠术前体重无明显差异(P>0.05),术后8 d,假手术组体重>ECGC组>梗阻组,但差异无统计学差异。
表1 3组大鼠术前及术后8 d内体重变化情况(x-±s,g)
2.2 TGF-β 比较3 组大鼠肾间质 TGF-β(+)细胞计数比较见表2,由此可见3组大鼠中EGCG组TGF-β表达明显低于梗阻组,而EGCG组低于假手术组,差异均用统计学差异(P<0.05)。
2.3 病理学差异术后第8天HE染色显示可见假手术组的结构维持正常,其肾间质未见明显改变,肾小管的上皮细胞整齐排列,保持完整的细胞结构,小管间的间隙紧密,其小管的间质未见炎性细胞的浸润,基底膜显示光滑连续;梗阻组的间质存在大量的炎性细胞的浸润,纤维组织明显增生,肾小管部分萎缩,管腔出现闭塞或者扩张及坏死,小管的基底膜出现不同程度的断裂及增厚,且小管壁明显变薄,小管的上皮细胞的结构严重破坏;EGCG组的间质有少量炎性细胞的浸润,纤维组织轻微增生,其肾小管的扩张较轻,肾小球萎缩轻,且肾小囊有所扩张,保留了部分正常小管及小球结构。
表2 3组大鼠肾间质TGF-β(+)细胞计数比较(x-±s,%)
慢性的肾病的在进展中的病理变化主要表现在肾小球的硬化、肾小管的萎缩以及肾间质的纤维化,其中肾功能损害的程度和肾脏的纤维化的病变程度有着重要的关系[4]。在慢性肾病所引发的肾小管的上皮细胞凋亡及肾间质的炎性细胞浸润、纤维细胞聚集的过程中,均有着较多的促纤维化因子参与,细胞外的基质生成逐步增多、而降解度则明显减少,从而产生了肾间质的纤维化,肾功能也就出现了严重的受损。TGF-β各器官的组织纤维化过程之中发挥着重要作用,目前大多数的学者认为其是纤维化的形成和发展启动枢纽[5],为关键性的细胞因子,特别是肾间质的纤维化的程之中TGF-β起着重要的作用,其可以促进肾小球的系膜细胞出现大量增殖,系膜的基质出现沉积,并诱导了肾小管的上皮细胞-间质细胞出现转分,从而在参与到肾间质的纤维化的进程之中。
茶多酚是从为茶叶内提取的天然的多酚类的复合物,主要的生理活性包括抗肿瘤、抗氧化、清除自由基、调节心血管的作用,有着较强的抗菌、抗病毒、抗辐射的作用。茶多酚内的主要成分是儿茶素类,其中EGCG是含量最高的有效成分,也是最强的抗氧化作用成分,在体内外均能够有效的清除一氧化氮、自由基等,以此提高了大鼠体内的超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽类过氧化物酶的活性,从而降低了脂质过氧化及脂褐质的含量,并通过和金属离子的络合发挥了其较强的抗氧化的活性。有动物实验表明[6],EGCG能够通过对肾损害的大鼠体内的氧自由基的清除作用来起到对脂质的过氧化作用的抑制,同时也起到了促纤溶、抗凝的作用,改善了肾局部的血流动力,从而使尿素氮降低,延缓了肾脏的病理进行性的损害。
综上所述,本文通过动物实验的方法分析了EGCG对大鼠的神纤维化的保护作用和机制可以看出,EGCG在大鼠动物试验中可见EGCG对大鼠肾脏纤维化形成抑制作用明显,能够有效的降低TGF-β的表达。
[1]徐志泉,易著文,何小解.没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠肾衰的治疗研究进展[J].现代医药卫生,2006,22(16):247l.
[2]Forino M,Toregrossa R,CeolM,et al.TGF-betal induces epithelia-mesenchymal transition,but not myofibr oblast transdifftrntiation of human kidney tubularep ithelial cells in primary culture[J].Int J Exp Pathol,2006,87(3):197.
[3]何小解,易著文,卢向阳,等.儿茶素对肾病综合征大鼠疗效研究[J].肾脏病与透析肾移植杂志,2002,11(4):342.
[4]冯江超,邵志成,龚雨顺,等,没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠肾间质纤维化的影响及机制探讨[J].川北医学院学报,2009,24(6):523.
[5]廖 明,李 彦,舒 伟,等.鸡尾酒疗法对大鼠肝星状细胞的增殖及Ⅰ型胶原、TI MP-1mRNA表达的影响[J].世界华人消化杂志,2010,18(9):932.
[6]Inagaki Y,Higashi K,Kushida M,et al.Hepatocyte growth factor suppresses profibrogenicsignal transduction via nuclearexport of Smad3with galectin-7[J].Gastroenterology,2008,134:1180.