双波长系数倍率分光光度法测定痤疮洗剂中2组分的含量

马亮英，谢晶，林伊梅，马莉（.新疆医科大学第二附属医院药剂科，乌鲁木齐市83008；.新疆医科大学药学院，乌鲁木齐市 830054）

痤疮（Acne）是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症，主要发生于面、胸、背等处，形成黑头、丘疹、脓包、结节等损害[1]。轻者影响容颜而烦恼[2]，严重者甚至会产生自杀倾向[3]，影响患者的身心健康。痤疮洗剂是新疆医科大学第二附属医院自制制剂，主要成分为甲硝唑、己烯雌酚，用于痤疮及脂溢性皮炎的治疗。为控制该制剂质量，笔者采用系数倍率分光光度法测定痤疮洗剂中2组分含量，结果表明建立的测定方法简便，可用于该制剂的质量控制，同时为该制剂申请新疆维吾尔自治区医院制剂批准文号提供了质量标准的实验室基础资料。

1 仪器与试药

UV-2550PC型紫外分光光度仪（日本岛津公司）；BS200S电子天平（德国Sartorius公司）。

甲硝唑（原料药及对照品，武汉武药制药有限公司，批号：0611254，纯度：≥98%）；己烯雌酚（原料药及对照品，广州市汉普医药有限公司，批号：20100301，纯度：≥98%）；痤疮洗剂（新疆医科大学第二附属医院，批号：20100602、20100618、20100630，含甲硝唑（C6H9N3O3）为4.50%～5.50%、己烯雌酚（C18H20O2）为0.045%～0.055%，g·mL－1）；水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 吸收光谱的绘制

精密称定干燥至恒重的甲硝唑500 mg、己烯雌酚50 mg，分别置于50 mL容量瓶中，加75%乙醇至刻度，即得浓度为10 mg·mL－1的甲硝唑醇溶液和1 mg·mL－1的己烯雌酚醇溶液。分别精密吸取甲硝唑醇溶液和己烯雌酚醇溶液各0.1 mL，分别置于100 mL容量瓶中，加水稀释成含甲硝唑10 μg·mL－1的水溶液、己烯雌酚1 μg·mL－1的水溶液。以水为空白，在220～400 nm范围内自动扫描，得甲硝唑和己烯雌酚的吸收光谱；另取辅料制备成溶液后扫描。光谱详见图1。

图1 紫外吸收光谱Fig 1 UV absorption spectra

由图1可见，甲硝唑在319 nm波长处有最大吸收，而己烯雌酚此处无吸收，因此可在319 nm波长处直接测定甲硝唑的含量。己烯雌酚在239 nm波长处有最大吸收，而甲硝唑在此处也有吸收，此波长处2组分吸收光谱相互干扰。根据光谱行为，选取319 nm为甲硝唑的测定波长，选取239 nm为己烯雌酚的测定波长，并将319 nm定为转换波长。辅料对二者无干扰。

2.2 系数倍率分光光度法的计算公式

式中，A为吸光度，c为浓度，K为倍率系数，E为百分吸收系数，“甲”表示甲硝唑，“己”表示己烯雌酚，“混”表示二者混合溶液（即样品溶液）。

2.3 稳定性试验

取“2.1”项下甲硝唑水溶液和己烯雌酚水溶液分别于0、0.5、1、2、4、12 h考察其光谱行为和测定波长处的吸光度，结果表明，在12 h内2组分吸收光谱及测定波长的吸光度未见显著变化，RSD为0.28%，因此可选择水作为测定溶剂。

2.4 K值的测定

称取甲硝唑2.501 7 g至50 mL容量瓶中，用75%乙醇定容至刻度（置于水浴中加热使其溶解），得浓度为5.003 4×104μg·mL－1溶液作为贮备液。从贮备液分别吸取 0.10、0.20、0.50、1.00、1.50 mL至100 mL容量瓶中，加水至刻度，得不同浓度溶液，每份溶液平行3份，以水为空白，在239、319 nm波长处测定吸光度。按A239nm/A319nm计算K值，结果为0.313 5，RSD为0.83%（n＝5）。

2.5 E值的测定

2.5.1E239nm己的测定。精密称取己烯雌酚0.025 1 g至50 mL容量瓶中，以75%乙醇定容至刻度，得浓度为5.02×102μg·mL－1溶液作为贮备液，从中分别吸取0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL，以水定容至50 mL容量瓶中；另从贮备液中精密吸取0.3 mL，以水定容至100 mL（n＝3）。以水为空白，于239 nm波长处测定吸光度，结果E239nm己为566.7，RSD＝0.66%（n＝5）。

2.5.2E319nm甲的测定。取“2.4”项下不同浓度溶液，各精密吸取5 mL至50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。以水为空白在319 nm波长处测定吸光度，结果，E319nm甲为534.7，RSD＝0.58%（n＝5）。

2.6 线性范围考察

2.6.1 己烯雌酚的线性范围考察。精密吸取“2.5.1”项下各溶液，以水为空白，在239 nm波长处测定吸光度，以己烯雌酚检测浓度（c，μg·mL－1）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为：A239nm己＝0.052 9c己－0.031 1（r＝0.999 8），结果表明己烯雌酚检测浓度的线性范围为1～20 μg·mL－1。

2.6.2 甲硝唑的线性范围考察。取“2.4”项下贮备液，从中分别吸取 0.10、0.20、0.50、1.00、1.50、2.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度。从上述瓶中各吸取5.00 mL，置于不同的25 mL容量瓶中，加水至刻度。以水为空白，在239、319 nm波长处测定吸光度，以甲硝唑检测浓度（c，μg·mL－1）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为：A239nm甲＝0.018 3c甲－0.037 2（r＝0.998 8），A319nm甲＝0.053 8c甲－0.013 0（r＝0.999 9），结果表明甲硝唑检测浓度的线性范围为5～75 μg·mL－1。

2.7 回收率试验

精密称取干燥至恒重的甲硝唑、己烯雌酚不同量，按处方比例制备，用水稀释后以水为空白，在239、319 nm波长处分别测定吸光度，按公式：c己＝（A239nm混－10KA319nm甲）/E239nm己及式（4）计算浓度，回收率结果见表1。

由表1得出甲硝唑的平均回收率为98.8%，RSD＝0.40%；己烯雌酚的平均回收率为99.0%，RSD＝0.64%。

表1 回收率试验结果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（sn＝6）

2.8 精密度试验

选取“2.6”项下甲硝唑及己烯雌酚的高、中、低浓度溶液，每个浓度做5份样品，分别连续测定3次。结果RSD分别为0.55%、0.85%（n＝5），表明精密度符合要求。

2.9 样品含量测定

取痤疮洗剂3批，分别精密吸取0.1 mL，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度；取稀释液5.00 mL，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，以水为空白，在319 nm波长处测定吸光度。另精密吸取0.1 mL，置于50 mL容量瓶，加水至刻度，以水为空白，于239 nm波长处测定吸光度。按标示量计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果Tab 2 Results of content determination of samples

3 讨论

笔者在试验中观察到甲硝唑在75%乙醇中溶解较慢，可用水浴加热使溶解，放冷至室温也不再析出，并在试验中得到证实。同时该制剂为混悬液，在制剂分装过程中会出现装量均匀性问题，需进一步进行处方优化，因此本文为今后处方优化的验证提供了实验室依据。

由于处方中甲硝唑浓度为50 mg·mL－1，己烯雌酚浓度为0.5 mg·mL－1，甲硝唑浓度是己烯雌酚浓度的100倍；2组分浓度在差距过大的情况下，若稀释相同倍数即可造成在239 nm波长处测定的A混（A混＝A239nm甲+A319nm己）超出测定范围而无法测定，因此需选择合适的稀释倍数，且稀释后浓度在线性范围内。经过一系列浓度筛选，最终确定为甲硝唑稀释5 000倍，己烯雌酚稀释500倍。在K值使用时，代入方程（3）时的K值需要乘以扩大倍数10。

系数倍率分光光度法原理简单、计算简便、结果准确，能不经分离直接测定本品中的2种主要组分的含量，因而具有操作方便、快速的优点，有利于控制本品的质量，易于基层单位开展日常检测工作。

[1] 王侠生，廖康煌，杨国亮.皮肤病学[M].上海：上海科学技术文献出版社，2005：725.

[2] 郭丽红.雄激素对痤疮影响及治疗的研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2009，11（1）：70.

[3] 兰晓玲，林新瑜，付兴琼，等.痤疮患者心理量化分析及护理[J].中国医疗前沿，2009，4（8）：100.