复方丹参片中非法添加的三七茎叶的检测

黄 捷，覃红萍

(广西壮族自治区食品药品检验所，广西 南宁 530021)

复方丹参片被收载于2005年版《中国药典(一部)》[1]，是心血管类疾病常用的中成药，处方为三七、丹参、冰片。其中三七是我国特产的传统珍贵药材，属五加科人参属多年生草本植物，入药部分为根及根茎。相对于多年生的三七根资源，三七茎叶资源易得、价格便宜。依据2005年版《中国药典(一部)》复方丹参片标准，不能有效区分所投药材是三七还是三七茎叶，这给不法生产企业提供了可乘之机。笔者用薄层色谱法判断是否掺入三七茎叶，用高效液相色谱法对薄层色谱法进行验证。三七茎叶主要含人参皂苷Rb1、Rb3和Rc，其中人参皂苷Rb3是三七茎叶中特有的人参皂苷成分[2]。因此，以人参皂苷Rb3为指标进行验证。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;Millipore超纯水器;Camag Reprostar 3型薄层数码成像系统;薄层硅胶G板(烟台工业研究所);乙腈(色谱纯)，水(超纯水)，其余试剂为分析纯;三七对照药材(批号为 120941－200304)，三七茎叶皂苷对照品(批号为0781－200201)，三七皂苷 R1对照品(批号为 0745－200109)，人参皂苷Rg1对照品(批号为110703－200726)，人参皂苷Rb1对照品(批号为110704－200420)，人参皂苷Rb3对照品(批号为111686－200501)均由中国药品生物制品检定所提供;复方丹参片(A厂，批号为C8A032;B厂，批号为070817;C厂，批号为8121177;D厂，批号为070501;E厂，批号为071003;F厂，批号为080322)。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱法

取本品5片，除去包衣，研碎，加乙醚10 mL，超声处理5 min，滤过，挥干溶剂，药渣加甲醇25 mL，加热回流15 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇25 mL振摇提取，取正丁醇提取液，用氨试液25 mL洗涤，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25 mL，正丁醇液浓缩至干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液;另取三七对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液;再取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rg1对照品、三七茎叶皂苷对照品，分别加甲醇制成每1 mL含三七皂苷 R11 mg、人参皂苷 Rb11 mg、人参皂苷 Rg11 mg、三七茎叶皂苷10 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述6种溶液各1～3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－醋酸－水(4∶1∶5)放置分层的上层溶液为展开剂展开，展距15 cm以上，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液(1→10)，110℃下加热至斑点显色清晰。由图1可以看出，样品5，7，8，10，11的色谱图中，在与三七茎叶皂苷对照品色谱相应位置上，不显完全一致的斑点(E，F);样品6，9色谱图中，在与三七茎叶皂苷对照品色谱相应位置上，显完全一致的斑点。说明样品5，7，8，10，11 不含三七茎叶皂苷，而样品 6，9 含三七茎叶皂苷。

图1 薄层色谱图

2.2 高效液相色谱法

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A，水为流动相B，按表1规定洗脱，检测波长为203 nm。

2.2.2 溶液制备

取人参皂苷Rb3对照品适量，精密称定，加甲醇制成1 g/L的溶液;取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Rg10.25 mg、人参皂苷Rb10.30 mg及三七皂苷R10.05 mg的混合对照品溶液。取本品20片，除去包衣，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率480 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.3 测定法

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定即可。

表1 洗脱条件

2.2.4 结果

从色谱图上可以看出，三七茎叶皂苷的高效液相色谱图中无与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1对照品相对应的色谱峰，三七茎叶药材的高效液相色谱图中未见与人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品相对应的色谱峰，在与人参皂苷Rb1对照品有保留时间相同的色谱峰，但峰高较三七药材低，与人参皂苷Rb3对照品保留时间相同的色谱峰。

图2 高效液相色谱图

薄层色谱法未检出三七茎叶皂苷的复方丹参片样品，在高效液相色谱图中均出现人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1，未出现与人参皂苷Rb3对照品保留时间相同的色谱峰。这与三七药材的高效液相色谱图一致。

薄层色谱法检出三七茎叶皂苷的复方丹参片样品，高效液相色谱图中未见人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品相对应的色谱峰，有与人参皂苷Rb1对照品有保留时间相同的色谱峰，但峰高较三七药材低，有与人参皂苷Rb3对照品保留时间相同的色谱峰，这与三七茎叶高效液相色谱图一致。

3 讨论

对于复方丹参片中掺入的三七茎叶的检查，主要以三七茎叶皂苷为对照，与三七茎叶皂苷显完全一致斑点的，即判检出三七茎叶皂苷，为不合格样品。本试验采用高效液相色谱法，以三七茎叶中的特有成分人参皂苷Rb3为对照，结果与薄层色谱法的一致，三七茎叶皂苷的检出率与重现性均较好，说明该方法用于检测掺入的三七茎叶方法可行。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:527.