苗族药材飞龙掌血药材指纹图谱研究＊

杨 亮 ，郭 晶 ，范宝成

(1.贵阳昊臻药物开发有限公司，贵州 贵阳 550025; 2.贵阳市宏信药业职业学校，贵州 贵阳 550025)

飞龙掌血为芸香科植物飞龙掌血 Toddalia asiatica(L.)Lam.的干燥根皮，味微苦、辛、温，具有祛风止痛、散瘀止血、消肿解毒的功效，用于治疗风湿痹痛、胃痛、跌打损伤、吐血、刀伤出血、痛经、闭经、牙龈出血、口舌生疮[1]。关于其指纹图谱的研究至今尚未见报道。本研究旨在通过对其指纹图谱研究，为飞龙掌血药材建立严格的质量控制方法，从而为其临床疗效提供保证。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪，包括UV－200Ⅱ型紫外可变波长检测器、P－200高压恒流泵(大连依利特科学仪器有限公司);Easy－3000色谱工作站(中国科学院，浙江大学);TU－1800SPC型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);AUW120D型电子天平(日本岛津株式会社)，101－2型电热鼓风恒温干燥箱(上海市崇明实验仪器厂);AS3120型超声清洗仪(天津津腾实验仪器厂)。乙腈(色谱纯，天津科密欧化学试剂公司);磷酸(分析纯，贵阳磷山化工集团);白屈菜红碱对照品(纯度为97.3%，中国药品生物制品检定所)。飞龙掌血药材分别采自贵州省的贵阳高坡乡、息烽县、织金县、兴义市、大方县及罗甸县，见表1。

表1 飞龙掌血药材的来源、采集时间

2 方法和结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱:迪马 C18柱(200 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －0.1% 磷酸水溶液(20 ∶80);流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL;测定波长:221 nm。

2.2 溶液制备

精密称取白屈菜红碱对照品0.010 43 g，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，得0.104 3 g/L的对照品母液;精密量取此溶液0.6 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理制成约为0.006 g/L的对照品溶液。取飞龙掌血药材粉末约2 g，精密称定，置具塞锥瓶中，加甲醇100 mL，精密称定，超声提取30 min，称重，用甲醇补足质量，滤过，得供试品溶液。

2.3 方法学考察

精密度试验:取飞龙掌血药材粉末(批号为HZZ20090001)，依法制备供试品溶液，连续进样6次。结果面积百分比不低于10%的共有峰相对峰面积的 RSD＜2%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

稳定性试验:取飞龙掌血药材粉末(批号为HZZ20090001)，依法制备供试品溶液，分别于 0，2，4，8，12，24 h 时进样测定。结果面积百分比不低于10% 的共有峰相对峰面积的 RSD＜2%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品粉末(批号为HZZ20090001)5份，依法制备供试品溶液，进样测定。结果面积百分比不低于10%的共有峰相对峰面积的 RSD＜2%(n=5)，表明方法重现性良好。

2.4 指纹图谱建立

2.4.1 共有指纹峰标定

取不同产地和批次的样品(11批)，依法制备供试品溶液，进样，绘制指纹图谱。采用国家药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统的操作规范软件(版本2004A)，标定其中5个色谱峰为共有指纹峰(图1)，其中4号峰为参照物质白屈菜红碱峰(图2)，其余共有峰与4(S)号峰相对保留时间与相对峰面积见表2及表3。

图1 飞龙掌血药材指纹图谱

2.4.2 相似度评价

根据共有指纹峰的标定结果，计算相似度。11批飞龙掌血药材与对照指纹图谱的相似度结果均大于0.90，表明各批次药材具有良好的一致性，本方法可用于综合评价药材的整体质量。

图2 白屈菜红碱对照品图谱

表2 飞龙掌血药材HPLC指纹图谱各共有峰的相对保留时间

表3 飞龙掌血药材HPLC指纹图谱各共有峰的相对峰面积

3 讨论

曾考察了95%乙醇和甲醇两种溶剂，甲醇的提取效果明显较好;并考察了甲醇超声和水浴回流两种提取方法，结果两者无明显差别;提取时间考察了超声15 min，30 min及60 min，前者效果较差，后两者无明显差别。因此选择超声提取30 min。

曾检测了315，274，221 nm波长下的药材指纹图谱。比较分析发现，检测波长为221 nm时，色谱峰较多，且各色谱峰能较好地分离，因此选221 nm作为检测波长。本试验比较了飞龙掌血药材根、茎及叶，发现飞龙掌血药材根、茎及叶的指纹图谱完全不一致，这可作为本药材药用部位确定的依据。

通过全面系统研究建立的飞龙掌血药材指纹图谱，具有稳定性、重现性好的特点。本研究有助于飞龙掌血药材的标准化种植和质量控制，并可在贵州省中药材、民族药材质量标准基础上对飞龙掌血药材的鉴别及质量控制起到一定的补充作用，有助于全面、科学地评价和控制飞龙掌血药材的质量。

[1]DB52/YC059－2003，贵州省中药材、民族药材质量标准(2003年版)[S].

[2]安彩贤，杨广德，叶建涛，等.RP－HPLC法同时测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量[J].中成药，2001，11(23):824.