北五味子配方颗粒提取工艺的正交设计试验优选

叶绿萍，李启军，刘小意

1.广西中医学院一附院药学部，广西南宁 530023；2.广西壮族自治区南宁市武鸣县人民医院药剂科，广西南宁 530100

中药配方颗粒又称免煎中药，单味中药浓缩颗粒是将单味中药饮片经过科学加工并提取中药材的有效成分后，制成的中药饮片新剂型[1]。五味子配方颗粒剂以五味子药材或饮片为原料，经水提取后加适量辅料，浓缩，喷雾干燥，干式制粒而制成的颗粒剂型，临床要求其要具有与原药材相同的功效[2]。本实验依据中药传统汤剂的煎煮方法，以提取率、五味子甲素（DSSD）、五味子乙素（γ-schisandrin，γ-SSD）含量为指标，采用正交试验法优选北五味子配方颗粒的最佳提取工艺。现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

美国Agilent 1100高效液相色谱仪，G1322A-Degasser（真空脱气机），G1311A 四元泵（QuatPump），G1313A 自动进样器（ALS），DAD 检测器，Agilent Chemstation（化学工作站）。AND GR202 电子分析天平（0.01 mg，日本），CREST 超声波清洗器 （美国），旋转蒸发仪RE-52A（上海亚荣生化仪器厂），KDM型连续可调控温电热套（山东鄄城）。

1.2 试药

五味子甲素 （中国药品生物制品检定所提供，批号：110764-200905）、五味子乙素（中国药品生物制品检定所提供，批号：110765-200905）。北五味子配方颗粒（自制，批号：20100401、20100501、20100502）。 HPLC 用甲醇（天津四友生物医学技术有限公司，色谱纯），娃哈哈纯净水（桂林娃哈哈饮用水有限公司），氯仿等化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（75∶25）；流速：1.0 ml/min；检测波长：254 nm；柱温：室温；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的五味子甲素及五味子乙素对照品适量，分别加甲醇配制成0.100 mg/ml及0.125 mg/ml的对照品。

2.2.2 供试品溶液的制备 取北五味子颗粒约2.0 g，精密称定，加氯仿10 ml，超声提取30 min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至10 ml量瓶中，作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，测定DSSD及γ-SSD的含量。结果在既定的HPLC测定方法下，北五味子配方颗粒中 DSSD 及 γ-SSD 含量分别在 0.265～1.590 μg和 0.638～3.188 μg范围内，进样量与峰面积的线性关系良好（r=1.0000和r=0.9999），平均回收率分别为101.12%和100.38%，RSD值分别为1.75%和1.10%。

2.4 正交因素水平的选定

北五味子的传统用法主要是与其他药材配成处方，加水煎成汤剂服用，而北五味子配方颗粒是北五味子饮片的替代品。为保留中药汤剂的特点，笔者在设计处理因素时，主要选择水作为提取溶媒，以用水量（倍数）、提取次数、提取时间作为处理因素，每个因素选择三个水平，进行L9（34）正交试验，以五味子DSSD、γ-SSD含量作为评价指标，同时参考提取率，筛选出五味子提取的最佳条件。考察因素水平见表1。

表1 考察因素水平情况

2.5 正交试验筛选五味子的提取工艺

依据L9（34）进行实验安排，按照既定要求提取并制备北五味子配方颗粒，计算综合评分时，由于颗粒中DSSD、γ-SSD含量较低，故在计算综合评分时，将该数据扩大500倍，以求合理性。综合评分=提取率+五味子甲素含量（%）×500+五味子乙素含量（%）×500。结果显示，影响北五味子配方颗粒提取率 （%）、DSSD、γ-SSD含量的主要因素依次为提取次数、提取时间、用水量，其中提取次数对实验结果有显著影响，最佳工艺条件为B3C3A2，即加水量为10倍，提取3次，每次2 h。 结果见表2、3。

表2 L9（34）正交试验筛选五味子的提取工艺结果

表3 方差分析结果

2.6 验证试验情况

称取北五味子50 g，共3份，按照最优条件B3C3A2提取，真空减压浓缩至80 ml，按“供试品溶液的制备”项下操作，测定峰面积，计算提取率、药液中五味子甲素及五味子乙素的含量。结果显示，验证结果与正交设计试验预测结果基本接近，测得DSSD平均含量为0.024%，γ-SSD平均含量为0.049%，平均提取率为36.12%。即该提取工艺具有提取率稳定性好、五味子甲素及五味子乙素得率高、操作简单且成本较低的特点，提示该提取工艺稳定、可行。见表4。

表4 验证试验结果（%）

3 讨论

北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill.]别名为五味子，为木兰科植物五味子属多年生落叶木质藤本植物的干燥成熟果实，因其果实甘、酸、辛、苦、咸五味俱全而得名[3]。北五味子主产于辽宁、黑龙江、吉林等地。有研究表明，其水提液具有延缓衰老的作用；而乙醇提取液则有安眠镇静作用；木酯素类具有保肝护肝作用，而且五味子制剂对动物的长期不良反应少[4]，临床多用于久咳虚喘、梦遗滑精、遗尿、尿频、久泻不止、自汗、盗汗、津伤口渴、短气脉虚、内热消渴、心悸失眠等[5]。

目前，为了使配方颗粒的功效及特性尽可能地与中药汤剂接近，国内大部分专家、学者都主张采用以水作为提取溶媒，所以在北五味子配方颗粒制备过程中，笔者也采纳了这一个主张。由于北五味子提取液中五味子甲素、五味子乙素含量较低，这可能与用水作为溶媒有关，不同批次的北五味子原料中五味子甲素、五味子乙素含量有一定的差异，所以生产过程中工艺参数的控制及原料的选取应给予足够的重视。值得注意的是，由于南五味子中不含五味子乙素，所以本配方颗粒原料只能选用北五味子。结果显示，其最佳工艺条件为加水量为10倍，提取3次，每次2 h。并测得DSSD平均含量为0.024%，γ-SSD平均含量为0.049%，平均提取率为36.12%。提示该提取工艺稳定、可行。

[1]诸明娜.免煎中药配方颗粒与传统中药饮片的比较[J].湖北中医杂志,2004,26(11):55.

[2]国家药品监督管理局.中药配方颗粒管理暂行规定[S].2001.

[3]聂江力,裴毅,祖元刚.北五味子果实超临界CO2萃取工艺的研究[J].植物研究,2005,25(2):213-215.

[4]杨放,袁军,付平.五味子的研究概况[J].华西药学杂志,2003,18(6):438-440.

[5]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:44-45.