HPLC法测定益母草颗粒（无蔗糖型）中盐酸水苏碱的含量

李政海 ，苏作林 ，廖展苇 ，阮碧芳

1.美国东方生物技术有限公司，广东深圳 518034；2.广西灵峰药业有限公司，广西贺州 542800

益母草颗粒是由益母草单味药材经提取精制而成，用于血瘀所致的月经不调、产后恶露不绝；经量少、淋漓不净、产后出血时间过长；产后子宫复旧不全见上述证候者[1]。益母草颗粒原收载于卫生部药品标准中药成方制剂第七册141页，现已收载入2010年版《中国药典》一部，为蔗糖型颗粒。有报道显示，无蔗糖型的益母草颗粒，扩大了肥胖症、高血压、高血脂、糖尿病等忌糖患者的应用范围，给临床用药更多的选择。其制剂中的盐酸水苏碱的含量可以采用HPLC-ELSD法[2-3]来测定，但该方法用到蒸发光散射检测器，需控制雾化器温度，漂移管温度以及气体（氮气）流速，因此操作复杂。笔者在总结以往经验的基础上，采用HPLC-UV法测定无蔗糖型的益母草颗粒中盐酸水苏碱的含量。结果表明，本文所用方法快速简便，分离度高，并具有良好的重复性，可用于益母草颗粒（无蔗糖型）的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

沃特斯2695-2487高效液相色谱仪；SPD-10A-VP紫外可见检测器；AB265-S 电子天平（Mettler Toledo）；SG8200HBT超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）。

1.2 试药

盐酸水苏碱（购于中国药品生物制品检定所，批号：110712-200508）；益母草颗粒（无蔗糖型）（广西灵峰药业有限公司提供，批号：061001、071201、071202、071203）；乙腈、自制双蒸水、甲醇、氨水均为分析纯或色谱纯。

2 方法与结果

2.1 实验前处理

2.1.1 色谱条件 色谱柱为Ultimate Column XB-NH2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；氨基键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水（90∶10）；流速为 1.0 ml/min；柱温为 25℃；检测波长为 192 nm[4-5]；进样量为10 μl。理论板数按盐酸水苏碱峰计算不低于2000。

2.1.2 树脂预处理方法 将新鲜树脂浸泡在蒸馏水中1～2 d，使它充分膨胀后装在层析柱中，先用树脂体积20倍量的2 mol/L盐酸，以每分钟每平方厘米1毫升的流速进行交换，使其变为氢型，然后用水洗至流出液呈中性。接着再用树脂体积10倍量的1 mol/L氢氧化钠进行交换，使其恢复钠型，用蒸馏水洗至流出液不含钠离子，再重复一次盐酸和氢氧化钠的处理。最后用树脂体积10倍量的1 mol/L的盐酸进行交换，使它变为氢型，蒸馏水洗至中性即可。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸水苏碱对照品适量，精密称定，用流动相溶解并制成1 ml含盐酸水苏碱1 mg的溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备 取益母草颗粒（无蔗糖型）适量，研细，取约0.5 g，精密称定，加热水15 ml使溶解，用稀盐酸调pH至1～3，加于已处理好的强酸性阳离子交换树脂柱（内径1.5 cm，高10 cm）上，用水洗脱至流出液无色，弃去水液。再用甲醇-氨水（7∶3）150 ml洗脱（流速为 1 ml/min），收集甲醇-氨水洗脱液，蒸干。残渣加流动相溶解并转移至10 ml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方比例称取除益母草外的糊精、阿司帕坦，混匀，并制成不含益母草的阴性制剂样品，再取制备好的阴性制剂样品，同“2.2.2”项下供试品溶液方法制备，得阴性样品溶液。

2.3 流动相的确定及专属性试验

参照文献[6-8]，选用乙腈-水为流动相，经试验，选用乙腈-水（90∶10）时，样品峰形对称，理论板数按水苏碱峰计算不低于2000。分别吸取以上三种溶液（对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液）各10 μl，一次进样，色谱仪绘制色谱图，见图1。结果表明采用此方法盐酸水苏碱之外的其他组分对测定无干扰。

2.4 线性关系考察

取盐酸水苏碱对照品，精密称定96.4 mg，置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液50 m（浓度 1.928 mg/ml）， 用移液管分别精密量取 0.5、2.0、4.06.0、8.0 ml，分别置于10 ml容量瓶中，加流动相乙腈-水（90∶10）至 10 ml，摇匀，精密吸取上述 5 种溶液各 10 μl，注入液相色谱仪，测定。以色谱主峰面积A对盐酸水苏碱进样量浓度 C（μg）进行回归分析，得回归方程 A=152158C 33647，r=0.9993。表明益母草颗粒中的盐酸水苏碱进样量在 0.964～15.424 μg 范围内，线性关系良好。l、+

2.5 精密度试验

用移液管量取1.1568 mg/ml盐酸水苏碱对照品溶液，重复进样6次。结果盐酸水苏碱峰面积平均值为1712576，RSD为1.48%，表明仪器的精密度符合要求。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，分别在棕色容量瓶室温放置0、2、4、6、8 h时，按上述方法分别测定峰面积，结果盐酸水苏碱峰面积平均值为1118851，RSD为0.73%，表明供试品溶液在8h内稳定性好。

2.7 重复性试验

取批号061001样品，同上述供试品溶液的制备方法制备6份溶液，同法进样、测定，计算含量，统计RSD，结果盐酸水苏碱平均含量为13.46 mg/g，RSD为1.69%，提示此测定方法的重复性较好。

2.8 加样回收率试验

图1 HPLC色谱图

取批号061001样品0.25 g，精密称定，精密加入盐酸水苏碱对照品的水溶液3.0 ml，精密加入热水15 ml，按供试品制备方法制备供试品溶液6份，依法测定，计算回收率。结果显示盐酸水苏碱平均回收率为97.7%（RSD=1.23%，n=6），表明此方法回收率较好。见表1。

表1 益母草颗粒（无蔗糖型）中盐酸水苏碱回收率的测定结果（n=6）

2.9 样品测定

按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按本文色谱条件，测定3批样品中盐酸水苏碱，同法计算含量。见表2。

表2 益母草颗粒（无蔗糖型）中盐酸水苏碱的测定结果（n=3）

3 讨论

提取方法曾参照2005年版《中国药典》一部第204页益母草药材含量测定方法，选用乙醇为溶剂进行加热回流提取1.5 h。具体方法如下：取本品，研细，取约0.5 g，精密称定。置于具塞锥形瓶中，加入乙醇50 ml，加热回流1.5 h，冷却，滤过，残渣用乙醇50 ml分次洗涤，滤过，合并滤液，蒸干。残渣用90%乙腈适量溶解，置10 ml量瓶中，定容至刻度，摇匀，过微孔滤膜（0.45 μm），即得。依法检测其盐酸水苏碱含量。结果显示该方法提取不完全，故未采用。

研究中曾拟修订本品总生物碱的含量测定方法[1]，但试验结果发现难以解决活性炭对生物碱的吸附问题，故未将总生物碱测定列入本品的质量控制指标。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:289-290.

[2]冯旭,杜成智,梁臣艳.HPLC-ELSD测定益母颗粒中盐酸水苏碱的含量[J].中成药,2008,30(5):37-38.

[3]聂金媛,何燕.HPLC-ELSD法测定产妇安胶囊中盐酸水苏碱的含量[J].海峡药学,2010,22(3):56-57.

[4]唐德智.益母草及其制剂中盐酸水苏碱含量测定研究[J].中国民族民间医药,2010,19(17):56-58.

[5]闫冰.HPLC测定益母草流浸膏中盐酸水苏碱的含量[C].中华中医药学会中药炮制分会2009年学术研讨会论文集,2009:330-332.

[6]任江剑,徐建中,王志安.HPLC法测定鲜益母草中盐酸水苏碱含量[J].中药新药与临床药理,2006,17(3):216-218.

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[8]严优芍,李卫民.HPLC法测定益母草分散片中盐酸水苏碱的含量[J].广东药学院学报,2006,22(6):604-606.