高效液相色谱法测定通脉颗粒中阿魏酸含量

李军山，白新涛，张 博

(神威药业有限公司，河北 石家庄 051430)

通脉颗粒是治疗心脑血管疾病的口服制剂，由丹参、川芎、葛根3味药材组方，具有活血通脉作用，用于治疗缺血性心脑血管疾病、动脉硬化、脑血栓、脑缺血、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心绞痛等[1]。1991年《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)》中收录的通脉颗粒质量标准暂无含量测定项。在2010年版《中国药典(一部)》[2]中，川芎药材增加了阿魏酸含量作为川芎的质量控制点，阿魏酸(ferulic acid)化学名为4－羟基－3－甲氧基苯丙烯酸，是来自于多种植物的一种酚酸，在细胞壁中与多糖和蛋白质结合成为细胞壁的骨架，在某些方面具有确切的药理活性，且毒性很低[3]。为更有效地控制此制剂质量，笔者采用高效液相色谱法检测产品中阿魏酸含量。现报道如下。

1 仪器与试药

Dionex Ultimate 3000型高效液相色谱系统(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自动进样器，Ultimate 3000二极管阵列检测器，变色龙色谱工作站)。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110773－200611);通脉颗粒(本公司自制，规格为10 g/袋，批号分别为 10011583，10011882，10012282，10020483，10020882，10021081，10021181，10031383，10031583，10032482);甲醇(ACI Labscan，色谱纯)，冰醋酸(天津市化学试剂一厂，分析纯)，纯化水(本公司制备)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱:Dionex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇 －1%醋酸溶液(30∶70);流速:1.0 mL/min;检测波长:321 nm;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

取本品细粉约2 g，精密称定，加入70%甲醇溶液50 mL，水浴回流30 min，放冷，提取液转移至蒸发皿，用30 mL甲醇分多次洗涤容器，洗涤液与提取液合并蒸干，残渣用70%甲醇溶液多次溶解并转移定容至10 mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取阿魏酸对照品适量，用70%甲醇溶液制成每1 mL含2 μg的溶液，作为对照品溶液。取处方中缺川芎的其他药味，按制法制成阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

空白干扰试验:分别精密量取阴性对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液10 μL进样，记录高效液相色谱图，见图1。结果在阿魏酸对照品峰处未见其他干扰峰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取阿魏酸对照品0.01014 g，置100 mL容量瓶中，加入70%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取该贮备液 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0 mL，分别置100 mL容量瓶中，用70%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，分别进样10 μL。以对照品质量浓度(μg/mL)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.9904 X －0.0357，r=1.0000(n=6)。结果表明，阿魏酸质量浓度在 0.507 ～15.210 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取质量浓度为2.028 μg/mL的阿魏酸对照品溶液 10μL，连续进样 6 次。结果峰面积分别为 1.9415，1.9413，1.9413，1.9414，1.9417，1.9411，RSD 为 0.01%(n=6)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温保存，于 2，4，6，8，10，24 h时测定1次。结果峰面积的 RSD=0.5%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重现性试验:取同一批样品(批号为10011583)，依法制备供试品溶液并测定含量。结果的 RSD为0.8%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:称取样品细粉约1.0 g(含量0.184 mg/袋)，精密称定，平行做6份，分别精密加入质量浓度为10.14 μg/mL的阿魏酸对照品溶液 1.6，1.6，2.0，2.0，2.4，2.4 mL，再精密加入 70%甲醇溶液50 mL，依法操作，测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 阿魏酸加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取本品10批，依法测定。结果批号为10011583，10011882，10012282，10020483，10020882，10021081，10021181，10031383，10031583，10032482 的样品中，阿魏酸的含量分别为 0.184，0.182，0.189，0.190，0.190，0.192，0.189，0.193，0.191，0.190 mg/袋(n=2)。

3 讨论

通过用乙醇、甲醇、50%乙醇、50%甲醇、70%乙醇、70%甲醇溶液分别回流30 min、1 h、2 h几种前处理方法比较，结果70%甲醇溶液回流提取30 min最充分，故选择加70%甲醇溶液水浴回流30 min的样品处理方法。通过DAD检测器对阿魏酸进行色谱检测，确定最大测定波长为321 nm。

[1]WS3－B－0824－91，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第四册)[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:38.

[3]胡益勇，徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展[J].中成药，2006，28(2):253.