非诺贝特酯防治大鼠非酒精性脂肪肝实验研究

杨元十，岑国栋

(1.四川省资中县人民医院，四川 内江 641200; 2.成都地奥制药集团药物研究所，四川 成都 610041)

非诺贝特属于第2代贝特酸类衍生物，可以降低血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇，升高高密度脂蛋白胆固醇，对酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝均有一定的治疗作用[1－2]。但该类调脂药物可能加重肝脏负担，故笔者对非诺贝特的化学结构进行了修饰，旨在增效和减毒，并研制出一种新的化合物。本试验中进行了该新化合物防治大鼠脂肪肝的初步药效学研究，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料

LD2－5型医用离心机(北京医用离心机厂);SHA－C恒温振荡器(常州国化电器有限公司);TMS－1024i型全自动生化分析仪(日本国东京医疗公司);BP221型电子天平(Sartoriou公司)。SD大鼠，雌雄各半，体重230～250 g，由北京维通利华试验动物技术有限公司提供，试验场地为成都地奥制药集团有限公司新药部药理试验室。

非诺贝特酯原料药(成都地奥制药集团有限公司，批号为081223，纯度大于98%)，根据前期的体外筛选试验，大鼠剂量设置为13.5mg/kg。阳性对照药为多烯磷脂酰胆碱胶囊(商品名易善复，规格为228 mg/粒、24粒/盒，赛诺菲安万特〈北京〉制药有限公司，批号为D8139)，试验时先用适量吐温研磨，再用0.5%的羧甲基纤维素钠(CMC)按设计浓度配制溶液。胆固醇(分析纯，批号为20071229)，吐温－80(化学纯，批号为20050402)，均为成都科龙化工试剂厂产品;胆酸钠(上海Solarbio公司，批号为20060826);丙硫氧嘧啶片(上海复星朝晖药业有限公司，批号为071105，规格为50mg/片、100片/瓶;1，2丙二醇(分析纯，天津市大茂化学试剂厂，批号为20051128);羧甲基纤维素钠(上海三浦化工有限公司，批号为20010911)。

1.2 试验方法

取SD大鼠64只，雌雄各半，体重230～250 g，随机分为4组，每组16只。将各组大鼠适应性饲养3 d后，每天上午按10 mL/kg灌胃给药1次，空白对照组(A组)给予95%羧甲基纤维素钠混悬液，模型对照组(B组)给予生理盐水，非诺贝特酯组(C组)给予13.5 mg/kg非诺贝特酯溶液，阳性对照组(D组)给予125 mg/kg易善复溶液(均相当于1倍成人临床剂量。);除A组外，每天下午其余3组大鼠均按每100 g体重1 mL体积灌胃给予高脂乳液(20%猪油、8%胆固醇、1.2%胆酸钠和0.6%丙硫氧嘧啶)。于第4周末次给药后禁食16 h(不禁水)，眼眶取血，离心并分离血清，动态测定给药4周后的血清生化指标。于第8周末次给药后禁食16 h(不禁水)，称取大鼠体重;股动脉取血，离心并分离血清，－30℃低温保存，测定血清生化指标;另摘取肝脏并称重，观察大体外观后，在每只大鼠相同部位切下2 g肝组织，置预冷的生理盐水中制成10%肝匀浆，4℃静置48 h后，以10000 r/min速度，离心20 min，取上清液，用全自动生化仪测定肝组织内甘油三酯的含量;另取肝左叶1块，置10%中性福尔马林溶液中，作肝组织病理学检查(固定后，石蜡包埋，切片作HE染色)。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 常规观察

试验期间，A组动物活动、饮食正常，皮毛光亮、整洁，体重持续增长;其余各组动物在灌胃给予高脂乳液2周后逐渐出现不同程度的精神萎靡、活动减少、体重缓慢增加、无力、蜷缩、饮食减少、皮毛凌乱、萎黄等现象。

2.2 体重及肝脏器系数测定

结果见表1。可见，灌胃给予高脂乳液一定周期后，B组大鼠体重增加缓慢，与A组比较有显著性差异(P＜0.01)，C组和D组大鼠体重增加缓慢但差异无统计学意义;B组大鼠的肝脏器系数较A组明显升高(P＜0.01)，C组和D组脂肪肝模型大鼠肝脏器系数均有降低，但无统计学意义。

2.3 血清转氨酶动态测定

血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)动态测定结果见表2。可见，在给予高脂乳液4周和8周后，B组大鼠血清中ALT的水平明显较A组明显升高(P＜0.01);与B组相比，C组和D组脂肪肝模型大鼠的ALT水平均明显降低(P＜0.05)，表明非诺贝特酯具有一定的降转氨酶作用。

表1 非诺贝特酯对脂肪肝大鼠体重及肝脏器系数的影响()

表1 非诺贝特酯对脂肪肝大鼠体重及肝脏器系数的影响()

注:与 B 组比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01(下表同)。

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表2 各组大鼠血清转氨酶和组织内甘油三酯测定结果()

表2 各组大鼠血清转氨酶和组织内甘油三酯测定结果()

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2.4 肝脏肉眼大体外观变化

A组大鼠肝脏肉眼观呈鲜红色，边缘锐利，表面光滑;B组大鼠肝脏肉眼观体积增大，边缘变钝，颜色呈奶黄色，切面油腻状，有明显脂肪颗粒，提示病变基础是肝细胞脂肪积聚;C组和D组大鼠肝脏肉眼观有部分呈鲜红色。

2.5 肝组织内甘油三酯的含量测定

脂肪肝主要是甘油三酯大量堆积于肝脏所致的一种病理改变，因此测定肝组织中甘油三酯的含量尤为重要。结果见表2。可见B组大鼠肝细胞内甘油三酯含量明显升高，与A组比较，差异有高度显著性(P＜0.01);C组和D组大鼠肝组织内甘油三酯含量均显著降低(P＜0.05)，表明非诺贝特酯具有减轻大鼠肝脂肪变性的作用。

2.6 肝组织病理学分析

结果见表3至表5。可见，与A组比较，B组大鼠出现了明显的肝细胞脂肪变性(P＜0.01)，表明造模成功;与B组比较，C组和D组大鼠肝细胞脂肪变性程度均显著降低(P＜0.05)，表明非诺贝特酯具有一定的减轻大鼠肝脂肪变性的作用。

表3 肝组织病理损伤判断标准(HE染色，100×)

表4 各组大鼠肝脏病理分级统计结果(动物只数)

表5 各组大鼠肝脏病理学改变(平均记分值)

3 讨论

脂肪肝系指肝内脂肪含量超过肝湿重的5%，或肝活检1/3以上肝细胞有脂肪变性且弥漫分布于全肝。其对应的临床概念是脂肪性肝病，系指病变主体在肝小叶，以弥漫性肝细胞脂肪变(多为大泡性脂肪变)为病理特征的临床综合征。目前，根据相关专业委员会的疾病诊断标准及有关共识，可以明确的是:脂肪性肝病在临床上根据患者有无过量饮酒史，分为酒精性脂肪性肝病(酒精性脂肪肝)和非酒精性脂肪性肝病;酒精性肝病临床诊断通常分为轻症酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化;非酒精性脂肪性肝病一般在病理上分为单纯性脂肪肝以及由其演变的脂肪性肝炎和肝硬化3种类型。

本研究旨在通过高脂乳液灌胃大鼠，造成大鼠非酒精性单纯性脂肪肝模型，考察非诺贝特酯药对大鼠非酒精性单纯性脂肪肝的防治作用。结果表明，与空白对照组比较，模型对照组大鼠肝脏器系数、ALT活性、肝组织内甘油三酯含量均显著升高，同时肝病理也显示出现了一定的脂肪变性，说明造模成功;与模型对照组比较，非诺贝特酯组大鼠ALT活性及肝组织甘油三酯含量显著降低，且肝脂肪变性程度也显著减轻。

ALT主要存在于肝细胞浆内，在肝内的活性比血清高100倍，是最敏感的肝功能指标之一。AST在心肌中含量最高，肝脏其次，主要分布于肝细胞的线粒体中，在发生肝损伤时漏出量较ALT低。对于急性肝炎、慢性肝炎和轻型肝炎，虽有肝细胞损伤，但线粒体仍保持完整，释放入血的只有存在于肝细胞浆内的ALT，故ALT升高明显;对于重型肝炎和慢性肝炎的中型和重型，肝细胞的线粒体也遭到了严重破坏，AST从线粒体和胞浆内释出，故AST也明显升高。但本试验中，脂肪肝模型大鼠血清中AST未明显升高，原因可能为与通过高脂乳液造成的非酒精性脂肪肝模型有关，该模型病变程度较轻，肝细胞的线粒体未遭到严重破坏。

综上所述，非诺贝特酯(试制品)具有一定的抗非酒精性单纯性大鼠脂肪肝的作用。但因样品量较少，仅做了一个剂量的试验，下一步应加强对量效关系及其使用机制的研究。

[1]贾晨光，宋建亭.脂肪肝及其药物治疗[J].中国医药，2007，2(6):382－384.

[2]钟 岚，范建高，王国良.非酒精性脂肪性肝炎动物模型的建立[J].中华实用医学，2000，2(1):3－6.