氢溴酸高乌甲素分散片的溶出度考察

胡雪莲，余涛，邢茂，雷健，陈琳，张恩娟

(第三军医大学新桥医院药剂科，重庆 400037)

氢溴酸高乌甲素是从高乌头中提取总碱，经化学分离获得的二萜类单体—刺乌头碱的氢溴酸盐［1］，为国内首创的非依赖性镇痛药，是卫生部《癌症患者三阶梯镇痛疗法指导原则》中规定的中度镇痛药。临床广泛用于癌症镇痛、术后镇痛等［2-8］。目前已批准使用的剂型仅有注射剂、片剂和贴片，注射剂起效快，但携带及使用不方便，普通片剂和贴片起效慢，不能达到迅速镇痛的要求。因此，笔者研制携带、使用方便，又能迅速起效的氢溴酸高乌甲素分散片，采用高效液相色谱(HPLC)法对其溶出行为进行研究。因本品规格较小(5 mg)，故采用小杯法进行研究。

1 仪器与试药

Waters 600高效液相色谱仪(美国Waters公司)、Waters 2487紫外检测器;ZRS-8智能药物溶出仪(天津大学无线电厂制造);氢溴酸高乌甲素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100289-200902)，氢溴酸高乌甲素分散片(自制，规格:每片 5 mg，批号:090601，090602，090603)，氢溴酸高乌甲素片(福州海王福药制药有限公司，规格:每片 5 mg，批号:0812280)，甲醇(色谱纯，Scharlau Chemie S.A.)，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5 μm);流动相:0.05 mol·L-1磷酸二氢钠-甲醇(28∶72);柱温:25℃;检测波长:252 nm;流速:1.0mL·min-1;进样体积:20 μL。

2.2 检测波长的选择 精密称取氢溴酸高乌甲素对照品适量，用流动相制成每毫升约含20 μg的溶液，以流动相为空白于200～400 nm波长扫描。结果对照品在221，252，309 nm处有吸收峰。考虑到221 nm靠近末端吸收，309 nm波长处峰值较低，因此选择波长252 nm为检测波长。

2.3 色谱条件的选择及系统适用性 参考氢溴酸高乌甲素含量和有关物质研究［9-10］的色谱条件进行实验，选 用18柱 (250mm ×4.6mm，5 μm)，以0.05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液-甲醇(28∶72)为流动相，结果主峰峰形对称，理论板数＞1 500，主峰与邻近峰的分离度＞1.5。故选择此色谱条件。

2.4 溶出转速的选择 采用小杯法，以100mL水为溶剂，考察转速分别为100，50 r·min-1时的溶出情况，结果50 r·min-1，10 min时溶出即＞80%，说明氢溴酸高乌甲素分散片溶出较快，故选择50 r·min-1较合适。

2.5 溶出介质的选择 照溶出度测定法(《中华人民共和国药典》2010年版二部附录X C第三法)，转速为50 r·min-1，分别选择水、0.1 mol·L-1盐酸、磷酸盐缓冲液(pH6.8)3种溶出介质进行考察，结果在3种溶出介质中的溶出行为相似，无明显差别。因此选择水为氢溴酸高乌甲素分散片的溶出介质。

2.6 滤膜吸附的考察 分别采用滤膜(孔径0.45 μm)过滤和离心(3 000 r·min-1)两种方式处理溶出液，结果两种方式处理的峰面积十分相近，说明采用滤膜(孔径0.45 μm)过滤不会对主药产生吸附，而滤膜过滤较离心法简单易行，因此采用滤膜过滤法处理样品。

2.7 溶出度方法验证

2.7.1 系统适用性考察 称取氢溴酸高乌甲素分散片细粉适量，用水配制成每毫升约含氢溴酸高乌甲素50 μg的溶液，取 20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果主峰峰形对称，理论板数＞1 500;与邻近峰分离度＞1.5，已完全分离。

另取氢溴酸高乌甲素对照品溶液，连续进样5次，每次20 μL，记录色谱图，计算各峰面积的RSD，考察本色谱系统的重复性。结果连续进样5次的峰面积RSD 为0.65%(＜1.0%)，说明本色谱系统重复性很好。

2.7.2 专属性考察 分别称取氢溴酸高乌甲素对照品、氢溴酸高乌甲素分散片细粉、空白辅料适量，用水配制成每毫升约含氢溴酸高乌甲素50 μg的溶液，取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。结果空白辅料约在3.1 min出现较小的辅料峰，但与主峰相距甚远，对溶出度测定无干扰。说明所选择的溶出度测定方法专属性较好。

图1 氢溴酸高乌甲素HPLC图A.空白对照;B.氢溴酸高乌甲素对照品;C.氢溴酸高乌甲素分散片;1.氢溴酸高乌甲素Fig.1 HPLC chromatogram of lappaconitine hydrobromideA.blank control;B.the reference of lappaconitine hydrobromide;C.lappaconitine hydrobromide dispersible tablets;1.lappaconitine hydrobromide

2.7.3 溶出液稳定性考察 取专属性项下的样品溶液，分别于室温下放置 0，2，4，6，12，24 h 后，取 20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果各时间点的峰面积RSD 为1.35%(＜2.0%)，说明本品溶出液的稳定性较好，至少在24 h内稳定。

2.7.4 线性关系考察 精密称取氢溴酸高乌甲素对照品12.2 mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备溶液。分别精密量取贮备溶液0.2，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5mL 置 10mL 量瓶中，用水稀释至刻度，配制成浓度分别为9.76，24.40，39.04，48.80，58.56，73.20 μg·mL-1的溶液。分别取上述溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，主峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=19 583X－14 259(r=0.999 7)。氢溴酸高乌甲素在9.76 ～73.20 μg·mL-1浓度范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.7.5 溶出度回收实验 按氢溴酸高乌甲素分散片溶出度测定浓度的50%，80%，100%进行回收实验。分别精密称取氢溴酸高乌甲素对照品约6.25，10.00，12.50 mg各3份，置250mL量瓶中，再分别加入空白辅料约0.14 g，加水溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取氢溴酸高乌甲素对照品约10 mg，置25mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取该溶液1mL，置10mL量瓶中，用水稀释至刻度，作为对照品溶液。按“2.3”项下的色谱条件，分别取供试品溶液及对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算回收率。结果3个浓度的回收率均在97% ～103%之间(表1)，平均回收率为100.30%，RSD为1.34%，说明该方法的准确度较高。

表1 氢溴酸高乌甲素溶出度回收实验结果Tab.1 Recovery of the dissolution of lappaconitine hydrobromide n=9

2.8 溶出均一性考察及与市售片比较 测定3批氢溴酸高乌甲素分散片中试样品溶出曲线，考察溶出均一性。采用小杯法，以 100mL水为溶剂，转速50 r·min-1。取样时间点设为10，20，30，45，60 min，分别计算累积溶出度。同法测定市售氢溴酸高乌甲素普通片的溶出曲线，与分散片进行比较。累积溶出曲线见图2。

3 讨论

氢溴酸高乌甲素片剂因规格较小(5 mg)，质量标准［11］(卫生部标准二部第5册)采用的溶出度测定方法为:“取本品数片(相当于氢溴酸高乌甲素50 mg)，照溶出度测定法(《中华人民共和国药典》1995年版二部附录ⅩC第2法)，加水800mL为溶剂，转速为100 r·min-1，经 45 min 时，吸取溶液 20mL，滤过，精密量取滤液10mL置于25mL量瓶中，照含量测定项下自……测定每片的溶出量。限度为标示量的80%”。按照此方法，一个溶出杯要放10片样品，实际上测得的是10片样品的平均值，不能真实反映出每片的溶出情况。分析原因，可能因为此标准制订较早，当时尚未普遍使用小杯法，故对规格较小的氢溴酸高乌甲素片剂采取了以上方法。

因此，采用小杯法进行氢溴酸高乌甲素分散片溶出方法研究，结果3批氢溴酸高乌甲素分散片溶出度均一性好，10 min内累积溶出度＞80%，而普通片40 min时溶出度才达到80%，说明分散片的释药速度较普通片快，提示氢溴酸高乌甲素分散片的吸收可能比普通片快，因此有望达到迅速镇痛的目的。

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［11］中华人民共和国卫生部药品标准(二部)第5册［S］.1996:53.