尼可胺对H22肝癌荷瘤小鼠的放射增敏作用*

王桂亮 刘晓秋 沈 秀 韩 英

尼可胺是以烟酰胺为母体化合物合成的烟酰氨基酸类化合物，体外实验已显示尼可胺较其母体化合物烟酰胺放射增敏效果更好，且毒性更低[1]，有望成为新的肿瘤放疗的放射增敏剂。本研究通过检测尼可胺对小鼠肿瘤生长时间的延迟及抑制作用，以进一步探讨尼可胺的体内放射增敏作用。

1 材料与方法

1.1 材料 普通级昆明种小鼠60只，雌雄各半，体质量18~22 g，6~8周龄，小鼠H22肝癌瘤株，分别由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心和生物室提供。尼可胺由本所药物室合成，白色粉状晶体，纯度>99%，熔点182~191℃，相对分子质量133.11[2]。用生理盐水和少量NaOH溶解后配成pH 7.0的100 g/L原液，超滤除菌后取一部分分别用生理盐水稀释为50 g/L和25 g/L备用。烟酰胺（中国医学科学院放射医学研究所）、甘氨双唑钠（生产批号：200811162，山东绿叶制药有限公司）分别用生理盐水溶解后配成pH 7.0的100 g/L和57.45 g/L溶液，超滤除菌后备用。150 mm镀铬游标卡尺（北京量具刀具厂），照射设备为加拿大GammaⅡ40，以137Cs为照射源，照射剂量率0.78 Gy/min。

1.2 实验方法 无菌条件下抽取接种6~8 d的一代H22肝癌小鼠腹水，用生理盐水稀释细胞悬液。用血细胞计数板计数肿瘤细胞，浆细胞浓度调整为1×107/mL，接种于小鼠右后脚掌皮下，每只接种0.2 mL。1周后,小鼠右后掌部肿瘤长成黄豆粒大小，将小鼠按照肿瘤大小和性别随机分为7组，每组8只，雌雄各半，分笼饲养。（1）空白对照组腹腔注射生理盐水0.25 mL/只，不进行照射。（2）单纯照射组腹腔注射生理盐水0.25 mL/只，进行照射。（3）阳性对照甘氨双唑钠组（573.45 mg/kg），腹腔注射57.45 g/L甘氨双唑钠生理盐水溶液0.25 mL/只，进行照射；烟酰胺组（1 000 mg/kg），腹腔注射100 g/L烟酰胺生理盐水溶液0.25 mL/只，进行照射。（4）尼可胺高（1 000 mg/kg）、中（500 mg/kg）、低（250 mg/kg）剂量组分别腹腔注射100、50及25 g/L烟酰胺生理盐水溶液0.25 mL/只。照射方法：给药后30 min于清醒状态下每次4只小鼠进行照射，照射时将小鼠固定，将接种肿瘤的后脚掌暴露于照射野中，非照射部位用铅块遮挡。照射剂量为5 Gy[3]。

1.3 观察指标 照 射后观察实验小鼠的进食、活动、体质量增长情况；每隔1 d测量肿瘤的长、宽、高，计算小鼠肿瘤体积，绘制各组肿瘤生长曲线；照射28 d后处死小鼠，剥取瘤称质量。计算抑瘤率、肿瘤生长延缓时间、增敏系数（EF）。抑瘤率=（1-给药组平均瘤质量/空白对照组平均瘤质量）×100%：肿瘤体积生长至放射治疗前3倍所需时间为3倍倍增时间（TGT3）：不同实验组与空白对照组的TGT3之差为肿瘤生长延迟时间（TGD）。增敏系数（EF）=给药照射组TGD/单纯照射组TGD，EF>1表示有放射增敏效应[4]。

1.4 统计学处理 采 用SPSS 15.0软件进行统计分析。计量数据以±s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，进一步组间比较用SNK-q检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 尼可胺对H22肝癌小鼠肿瘤的增敏作用 各实验组荷瘤小鼠的肿瘤生长均随照射天数呈增长趋势，见图1；尼可胺高、中、低剂量组均能延缓肿瘤生长，高剂量组的增敏效果高于其母体化合物烟酰胺组和甘氨双唑钠组，尼可胺低剂量组增敏效果低于烟酰胺组和甘氨双唑钠组，差异均有统计学意义（P<0.05），中剂量组较甘氨双唑钠组差异无统计学意义（P>0.05），而与烟酰胺组差异有统计学意义（P<0.05），见表1、2。

2.2 尼可胺对H22肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用结果比较 各实验组给药照射后，均未见明显异常的生理反应。尼可胺高、中、低各剂量组均能抑制肿瘤生长，且抑制肿瘤作用随给药剂量的增加呈增强趋势。高剂量组的抑瘤率高于其母体化合物烟酰胺组和甘氨双唑钠组，低剂量组抑瘤率低于烟酰胺组和甘氨双唑钠组，差异有统计学意义（均P<0.05或P<0.01）,见表3、4。

表1 各组肿瘤生长的延迟时间和增敏系数（n=8，±s）

表1 各组肿瘤生长的延迟时间和增敏系数（n=8，±s）

*P＜0.05，**P＜0.01

空白组单纯照射组（1）甘氨双唑钠组（2）烟酰胺组（3）尼可胺低剂量组（4）尼可胺中剂量组（5）尼可胺高剂量组（6）F 7.5±0.75 15.4±0.73 23.8±0.44 21.8±0.19 18.4±0.48 22.9±0.36 26.5±0.25--7.9±0.02 16.3±0.31 14.3±0.54 10.9±0.27 15.4±0.39 19.0±0.50 110.83*--1.83 1.61 1.22 1.73 2.13-组别 TGT3（d） TGD（d） EF

表2 各组肿瘤生长的延迟时间和增殖系数组间两两比较q值 （n=8）

表3 各实验组肿瘤质量及抑瘤率 （n=8±s）

表3 各实验组肿瘤质量及抑瘤率 （n=8±s）

*P＜0.05,**P＜0.01

空白组单纯照射组（1）甘氨双唑钠组（2）烟酰胺组（3）尼可胺低剂量组（4）尼可胺中剂量组（5）尼可胺高剂量组（6）F 1.04±0.21 0.74±0.11 0.45±0.09 0.49±0.14 0.60±0.14 0.51±0.12 0.37±0.15--0.30±0.11 0.59±0.12 0.55±0.07 0.46±0.07 0.53±0.09 0.67±0.06 2.14*-29.1 57.3 53.2 42.6 50.9 64.5-瘤质量（g）组别 抑瘤质量（g） 抑瘤率（%）

表4 各实验组肿瘤质量及抑瘤率组间两两比较q值 （n=8）

3 讨论

尼可胺是以烟酰胺为母体化合物合成的烟酰氨基酸类化合物，烟酰胺是一种低毒的放射增敏剂[5]。烟酰胺作用机制是通过增加血流灌注，增加乏氧肿瘤细胞的氧合作用和乏氧肿瘤组织氧分压而引起肿瘤放疗增敏作用[6]。国外将其作为头颈部癌和膀胱癌放疗增敏剂进行了Ⅲ期临床试验，结果发现其有很高的肿瘤局部控制率[7]。较为理想的放射增敏剂除了要求有较高的放射增敏系数和抑瘤率外，其治疗剂量下的不良反应越低越好[8]。本研究结果显示，尼可胺不同剂量给药照射后，对肿瘤的生长均有一定的放射增敏作用，使小鼠肿瘤的生长明显放缓，肿瘤质量明显低于单纯照射组，且较高剂量的尼可胺对H22肝癌小鼠的抑制作用较强。尼可胺中、低剂量组都有一定的放射增敏性和抑瘤性，且低剂量组与其母体化合物烟酰胺组和目前已用于临床的甘氨双唑钠组差异均有统计学意义，而尼可胺高剂量组（1 000 mg/kg）的增敏系数和抑瘤率均高于烟酰胺组和甘氨双唑钠组，且差异有统计学意义。另外，本研究结果显示，放射加药组小鼠在观察期间未见生活习性的改变，提示尼可胺可作为一种新的肿瘤放射增敏剂。

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