不同灭菌方法对人参健脾丸含量的影响

刘霄峰，付晓丽，李青翠

（1.山西省儿童医院，山西 太原 030013； 2.山西省药品检验所，山西 太原 030001）

人参健脾丸具有健脾益气、和胃止泻之功效，用于脾胃虚弱所致的饮食不化、脘闷嘈杂、恶心呕吐、腹痛便溏、不思饮食、体弱倦怠。方中木香行气止痛为佐药，木香中挥发油为有效成分，挥发油中含有木香烃内酯、异土木香内酯等成分［1］。王永兵等［2］对木香药材的不同提取物以及木香中的两个单体化合物木香烃内酯和去氢木香内酯进行了消化药理学研究，结果表明木香烃内酯可作为木香质量控制的有效成分。本文采用高效液相色谱法对不同灭菌方法制备的人参健脾丸中木香烃内酯进行含量测定，为比较不同灭菌方法的优劣提供依据。

1 实验材料

1.1 实验仪器

日本岛津公司10AD组合高效液相色谱仪；METTLER TOLEDO AL204电子天平；TCQ-250超声仪。

1.2 药品与试剂

木香烃内酯购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯试剂，购自SIGMA；水为超纯水。人参健脾丸药物组成：人参 25 g，白术（麸炒）150 g，茯苓50 g，山药 100 g，陈皮 50 g，木香 12.5 g，砂仁 25 g，炙黄芪 100 g，当归 50 g，酸枣仁（炒）50 g，远志（制）25 g。上述药物粉碎成细粉，过筛，混匀，每100 g粉末加蜜 110 g～120 g 制成大蜜丸，即得［3］。四种灭菌六法如下：T1：药材直接粉碎，不灭菌，加蜜成丸；T2：药材直接粉碎，经60Co辐照灭菌，加蜜成丸；T3：药材直接粉碎，经流通蒸汽灭菌，加蜜成丸；T4：部分药材流通蒸汽灭菌，部分药材60Co辐照灭菌，加蜜成丸。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

检测波长：225 nm；色谱柱：C18（kromasil，4.6 nm×250 nm，5 μm，柱号：7030398）；流速：1.0 mL/min；流动相：甲醇∶水（70∶30）；进样量：20 μL；柱温：30 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取木香烃内酯对照品适量，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，剪碎，取约5.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，放置过夜；超声处理（功率250 W，频率 50 kHz）60 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密称取木香烃内酯对照品约10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。测定结果表明对照品峰面积A与其进样量X（μg）呈良好的线性关系，线性范围为 0.048 μg～0.24 μg，回归方程为：A=1 875 712.5 X+841.4，r=0.999 9。

2.3.2 精密度试验 取4种不同灭菌方法制备的供试品溶液，分别连续进样6次，以木香烃内酯峰面积计算精密度，其RSD分别为：0.2%，0.8%，0.9%，0.1%。结果表明，精密度良好。

2.3.3 重复性试验 精密称取4种不同灭菌方法的样品，按“供试品溶液的制备”项下进行处理并测定，以木香烃内酯峰面积计算RSD值，分别为：0.2%，1.1%，0.3%，0.3%。结果表明，重复性良好。

2.3.4 溶液的稳定性 精密称取4种不同灭菌方法的样品，按“供试品溶液的制备”项下进行处理并在不同时间测定，以木香烃内酯峰面积计算RSD值，分别为：1.0%，0.7%，1.4%，0.6%。结果表明，样品在24 h内稳定。

2.3.5 最小检测限试验 取木香烃内酯对照品适量，用甲醇稀释为 0.082 μg/mL，进样 20 μL，依法测定。木香烃内酯的最小检测限为1.64 ng（S/N=3）。

2.3.6 定量检测限试验 取木香烃内酯对照品适量，用甲醇稀释为 0.272 μg/mL，进样 20 μL，依法测定。木香烃内酯的定量检测限为5.44 ng（S/N=10）。

2.3.7 对照品和样品的色谱行为 按上述色谱条件，对木香烃内酯对照品和样品进行测定，样品的色谱图中在对照品的保留时间处有相应的色谱峰，且与杂质有较好的分离。

2.3.8 回收率试验 采用加样法，精密称取已知木香烃内酯含量的T3样品，分别精密加入木香烃内酯对照品 56 μg，70 μg，84 μg，按“供试品溶液的制备”项下进行处理并测定，计算回收率，得木香烃内酯的平均回收率分别为99.3%，99.3%，99.4%，RSD分别为0.2%，1.1%，0.3%，结果见表1。由表1可知，回收率良好，符合要求。

2.3.9 样品的含量测定 取T1、T2、T3、T4四种样品，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下进行处理并测定，计算含量，结果见表2。

表1 回收率试验结果

表2 含量测定结果

根据上述测定结果表明，木香烃内酯含量为不灭菌＞部分辐照部分流通蒸汽灭菌＞60Co辐照灭菌＞流通蒸汽灭菌。

3 讨 论

在试验过程中考察了提取时间（30 min、60 min、90 min）以及提取次数（1次，2次，3次）对含量的影响，测定结果表明，供试品用甲醇超声提取1次，每次60 min，木香烃内酯基本提取完全，并且与相邻杂质峰的分离效果较好。

人参健脾丸为中国药典2005年版（一部）收载品种，木香为其佐药，本实验结果表明，60Co辐照灭菌对有效成分木香烃内酯的破坏较小，而流通蒸汽灭菌法破坏较大，故对热不稳定的中药应选用60Co辐照灭菌而避免使用流通蒸汽灭菌法。

［1］张艺，肖小东.木香的药理及制剂研究概述［J］.中国药业，2003，12（4）：75.

［2］王永兵，王强，毛福林.木香的药效学研究［J］.中国药科大学学报，2001，32（2）：146-148.

［3］国家药典委员会.中国药典［M］.北京：化学工业出版社，2005：315.