灵芝蒜颗粒对小鼠急性酒精性肝损伤保护作用的研究

姚 锐，许克勇，姚 晖，邓虹珠，焦河玲，原海晓

（1.南方医科大学中医药学院，广东 广州 510515； 2.广东开平健之源保健食品有限公司，广东 开平 529300）

世界卫生组织统计显示，我国长期饮酒者接近2亿人，再加上一般的饮酒者饮酒人数超过5亿，每年有11万人因酒精中毒而死亡［1］。酒精对人体的损害作用是多方面的，可累及全身主要脏器，对肝脏的影响尤大。灵芝蒜颗粒提取物是由灵芝提取物、大蒜提取物、麦芽糊精组成的固体冲剂，灵芝、大蒜都具有保肝、抗氧化和清除自由基等多种作用。本实验采用酒精所致急性肝损伤模型，探讨灵芝蒜颗粒的保肝护肝作用，以期为其保健功能评价、开发利用提供进一步的科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SPF级健康雄性昆明种小鼠60只，18 g～22 g，由南方医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：2006A044；饲养室温度：20℃～25℃，相对湿度：40%～70%，实验动物中心使用许可证号SCXK（粤）2006-0015。置动物于室温18℃～22℃，相对湿度65%，光照周期12 h，自由饮水，进食普通饲料。

1.1.2 药物与试剂 灵芝蒜颗粒：由开平健之源保健食品有限公司提供，样品为棕褐色颗粒，1 g/袋，批号：091101。人体推荐剂量为2 g/d，即按体重量计22.5 mg/60 kg；联苯双酯滴丸，广州星群（药业）股份有限公司，批号：GF40052；丙二醛试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20100526；谷胱甘肽试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20100526。其他试剂均为分析纯。

1.1.3 实验仪器 岛津UV1700 PharmaSpec（日本）；FSH-2型可调高速匀浆器（江苏金坛市荣华仪器制造公司）；PL-303型电子天平（瑞典 METTLER TOLEDO公司）；Sigma 3K30型低温高速离心机（Sigma公司）；日立 7020全自动生化仪（北京百和营科技发展有限责任公司）；L420台式低速自动平衡离心机（长沙相仪离心机仪器有限公司）；DK-8AD型电子恒温水浴锅（上海-恒科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 酒精性肝损伤模型的建立［2］

60只小鼠随机分为6组，每组10只，分别为空白组、模型组、联苯双酯组、LZS高、中、低剂量组。按照“实验动物与人体表面积等效量换算比率”可算出小鼠用药量：LZS等效量为0.34 g/kg，LZS高剂量组为0.68 g/kg，中剂量组为0.34 g/kg，低剂量组为0.17 g/kg。联苯双酯组灌胃0.003 75 g/kg联苯双酯，模型组和空白组灌胃生理盐水，连续15 d，最后1次给药后1 h，除空白组灌胃给予生理盐水外，其余各组依据《保健食品检验与评价技术规范》一次性灌胃给予50%乙醇12 mL/kg，禁食16 h，处死小鼠，采集血液样品和肝组织样品。

1.2.2 血清ALT、AST、TG含量的测定 将血液样品3 000 r/min离心10 min后取上清，用全自动生化仪测定ALT、AST、TG含量。

1.2.3 肝组织匀浆中MDA、GSH含量的测定 取0.2 g 肝左叶，按 1∶9（W∶V）加入冷生理盐水，用匀浆器在冰浴中匀浆，取10%的组织匀浆在低温离心机（4℃，3 000 r/min）离心10 min后取上清。按照试剂盒方法检测肝组织匀浆中MDA、GSH的含量。

1.2.4 组织病理学检查 取右叶肝脏以10%中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋、切片、HE染色供常规光镜观察肝组织病理变化。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 LZS对酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST、TG含量的影响结果见表1。

表1 LZS对酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST、TG含量的影响 （）

表1 LZS对酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST、TG含量的影响 （）

注：与模型组比较，1）P<0.05，2）P<0.01；与空白组比较，3）P<0.05

?

由表1可见，与空白组比较，模型组小鼠血清ALT、AST、TG含量升高，差异比较有统计学意义（P＜0.05），表明造模成功；与模型组比较，联苯双酯组小鼠血清 ALT、AST、TG 含量显著降低（P＜0.01），高剂量组小鼠血清ALT、AST、TG 显著降低（P＜0.05，P＜0.01），中剂量组小鼠血清ALT含量显著降低（P＜0.05），低剂量组小鼠血清ALT、AST、TG含量降低，但差异比较无统计学意义。

2.2 LZS对酒精性肝损伤小鼠肝组织MDA、GSH含量的影响结果见表2。

表2 LZS对酒精性肝损伤小鼠肝组织MDA、GSH含量的影响 （）

表2 LZS对酒精性肝损伤小鼠肝组织MDA、GSH含量的影响 （）

注：与模型组比较，1）P<0.05，2）P<0.01；与空白组比较，3）P<0.05

?

由表2可见，与空白组比较，模型组小鼠肝匀浆GSH、MDA含量降低，差异比较有统计学意义（P＜0.05），表明造模成功；与模型组比较，联苯双酯组、高剂量组小鼠肝匀浆GSH、MDA含量显著升高（P＜0.01，P＜0.05）；中剂量组和低剂量组小鼠肝匀浆GSH含量显著升高（P＜0.01）。

2.3 LZS对酒精性肝损伤小鼠肝脏组织病理学的影晌

结果见图1。由图1可见，空白组肝组织结构基本正常，清晰可见，肝细胞呈放射状排列整齐，细胞核圆形，核仁清晰，胞质内几乎无脂滴；模型组肝小叶中央静脉扩大，肝窦淤血和出血，肝细胞明显肿胀，弥漫性肝细胞脂肪变性。联苯双酯组肝小叶的组织结构基本接近正常，肝细胞未见明显肿胀，肝细胞索排列整齐，但仍可见少量充血；低剂量组肝细胞肿胀，大量肝细胞脂肪变性；中剂量组中央静脉周围部分肝细胞脂肪变性，病变范围变小，肿胀程度减轻；高剂量组肝小叶排列较齐，未见明显的窦腔狭窄，偶见散在肝细胞脂肪变性。病理组织形态学观察提示：灵芝蒜颗粒对酒精所致小鼠肝脏脂质过氧化损伤具有一定的保护作用。

图1 LZS对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏组织病理学影响（HE×100）

3 讨论

众多研究表明，当机体摄入酒精时，可以大大影响血清ALT、AST活性。肝脏是乙醇代谢的主要场所，TG是反映肝脏脂肪代谢障碍的敏感指标［3］。MDA为脂质过氧化终产物，该值的升降反映着脂质过氧化程度的强弱。GSH是一种抗氧化剂和自由基清除剂，酒精代谢过程中产生乙醛，产生过量超氧阴离子和自由基，导致肝细胞GSH含量下降，该值衡量机体抗氧化能力大小。灵芝蒜颗粒提取物由灵芝提取物、大蒜提取物、麦芽糊精组成。李时珍《本草纲目》中详尽记述道：“赤芝，苦平无毒，主治胸中结、益心气、补中、增智慧、不忘。”［4］现代药理和临床研究证明，灵芝对多种理化及生物因素引起的肝损伤有保护作用［5-7］。无论在肝脏损害发生前还是发生后，服用灵芝都可促进肝脏对药物、毒物的代谢，保护肝脏，减轻肝损伤［8］。大蒜化学成分众多，既是一种免疫激发剂，也是一种强有力的抗氧化剂。大蒜油、大蒜素、大蒜多糖等对乙醇所致的肝损伤保护作用均有报道，其作用可能与清除自由基、抑制脂质过氧化作用等有关［9-10］。灵芝蒜颗粒可降低小鼠血清中ALT，AST和MDA含量，升高GSH水平；肝脏病理切片观察显示灵芝蒜颗粒可明显减轻酒精急性肝损伤小鼠的肝脏病理损害，脂肪变性、炎性细胞明显减少，说明该药对酒精性肝损伤有治疗作用。其作用机理可能是抗氧化和清除自由基，免疫调节，改善肝脏微循环等，其确切作用机理有待进一步研究。

［1］佚名.饮酒危情——酒精危害警示录［J］.科学生活，2007，27（9）：插页.

［2］卫生部.保健食品检验与评价技术规范［S］.2003：14-15.

［3］童英，阎向东，吴少平，等.乙醇急性肝损伤敏感指标的研究［J］.中华预防医学杂志，2000，34（3）：188-189.

［4］李时珍.本草纲目（下册）［M］.北京：人民卫生出版社，1982：1 711-1 712.

［5］胡鹃.灵芝胶囊治疗慢性乙型肝炎86例分析［J］.职业与健康，2003，19（3）∶103-104.

［6］王明宇，刘强，车庆明，等.灵芝三萜类化合物对3种小鼠肝损伤模型的影响［J］.药学学报，2000，35（5）：326-329.

［7］李晔，肖志勇，毛景华，等.灵芝孢子油对化学性肝损伤保护作用的研究［J］.广西中医药，2006，29（3）：50-51.

［8］杨昆.灵芝治病研究新进展［J］.健康生活，2010，22（2）：22-24.

［9］曾涛，张翠丽，王倩，等.大蒜油与大蒜素对急性乙醇性肝损伤预防作用比较［J］.毒理学杂志，2008，22（3）：197-199.

［10］郑敏，潘世斌，姜友定，等.大蒜多糖对肝损伤小鼠血清和肝组织ALT、AST的影响及其急性毒性实验［J］.咸宁学院学报：医学版，2003，17（2）：85-87.