脑泰方对脑梗死大鼠Bax蛋白的影响

张国民，刘慧萍，葛金文，陈 懿，朱 伟

（湖南中医药大学湘杏学院，湖南 长沙 410007）

脑梗死（cerebral infarction，CI）是指局部脑组织因血液循环障碍，缺血、缺氧而发生的软化坏死，是脑血管病中最常见者，约占75%，病死率平均10%～15%，致残率极高，且极易复发，复发性中风的死亡率大幅度增加。Bax是一种Bcl-2家族的前凋亡蛋白，一般出现在细胞胞浆中，并作为一种细胞损伤和刺激的传感器，响应损伤和刺激，Bax将重新定位于线粒体表面并破坏在正常状态下抗凋亡的Bcl-2蛋白的功能。脑泰方由黄芪、川芎、地龙等组成，具有益气活血、化痰通络的功效，是治疗脑梗死的有效方剂［1］。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SD大鼠50只，SPF级，雌雄各半，体重（300±20）g。由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。许可证SCXK（沪）2008-0016。

l.1.2 实验药物 黄芪、川芎、地龙等药物，购自湖南中医药大学第一附属医院药剂科。先将药材用自来水浸泡30 min，煮沸后再煮30 min。过滤后收集煎液，待药渣冷却后加自来水再次浸泡30 min，如前煎煮，得第2次药液。2次煎液混合，于水浴恒温器上浓缩至浓度为每毫升药液含生药1 g。尼莫地平（批号：0001005，正大青春宝药业有限公司生产）。

1.1.3 实验仪器 电子天平；离心机；恒温培养箱；恒温水浴箱；Shandon切片机；Leica双目显微镜；Modtic数码显微摄像系统；北航MIAS医学图像分析系统。

1.2 实验方法

1.2.1 分组及给药 SD大鼠40只，雌雄各半，随机分为脑泰方组、空白组、模型组、尼莫地平组4组，每组10只。除空白组外，余组大鼠均参照Longa等的方法并加以改进制备大鼠左侧大脑中动脉阻塞模型（MCA）。大鼠术前禁食，用10%水合氯醛生理盐水溶液腹腔注射（按体重计算，35 mg/kg～40 mg/kg）进行麻醉，术中应用恒温循环水系统维持大鼠体温［2］。各组动物手术后用灌胃方式给药。脑泰方组每天每只大鼠灌饲量为1.3 mL（相当于成人剂量的3倍）；尼莫地平组剂量相当于成人剂量的4倍，为4 mg/（kg·d）；模型组、空白组于相同时间内灌饲蒸馏水。

1.2.2 观察指标及检测方法 取大鼠大脑组织，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，苏木精-伊红染色，显微图像摄影观察大鼠脑组织病理形态学变化，MIAS医学图像系统分析梗死面积。利用免疫组织化学的原理，采用SABC染色法，显微图像摄影，MIAS医学图像系统分析Bax蛋白阳性率。

1.3 统计学方法

采用SPSS16.0统计软件处理，对两个变量之间计量资料的比较进行t检验。

2 结果

2.1 病理形态学结果

空白组脑组织神经细胞排列有序，细胞核、核仁清楚，胞浆着色均质，无变性、坏死；模型组大脑皮质可见明显坏死灶；脑泰方组神经细胞出现水肿伴小灶性坏死；尼莫地平组脑组织出现明显水肿，可见灶性坏死。结果见图1～图4。各组大鼠一氧化氮合酶（NOS3）检测结果见表 1。

图1 空白组（HE 10×40）

图2 模型组（HE 10×40）

图3 脑泰方组（HE 10×40）

图4 尼莫地平组（HE 10×40）

表1 各组大鼠一氧化氮合酶（NOS3）检测结果 （）

表1 各组大鼠一氧化氮合酶（NOS3）检测结果 （）

注：与模型组比较，1）P＜0.01

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2.2 免疫组化Bax结果

结果见图5～图8及表2。由图5～图8可以看出，阳性细胞的胞浆被染成棕黄色，与阴性细胞形成鲜明对比；从表2可知，与模型组比较，脑泰方组大鼠的Bax蛋白阳性数显著下降（P＜0.01）。

图5 空白组（免疫组化10×40）

图6 模型组（免疫组化10×40）

图7 脑泰方组（免疫组化10×40）

图8 尼莫地平组（免疫组化10×40）

表2 各组大鼠免疫组织的Bax统计结果 （）

表2 各组大鼠免疫组织的Bax统计结果 （）

注：与模型组比较，1）P＜0.01

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3 讨 论

脑梗死属缺血性脑卒中范围，居各种脑血管疾病之首。属中医学卒中、中风、类中风、偏枯、半身不遂等范畴。祖国医学认为脑梗死多因年老气虚，无力推动血行，气滞血瘀，血阻经脉、脑窍而成，其中气虚血瘀为病机根本，益气活血为其主要治法。脑泰方由黄芪、川芎、地龙等组成，具有益气活血、化痰通络的功效，是治疗脑梗死的有效方剂［3］。

Bax是一种诱导细胞凋亡的蛋白，当脑组织发生梗死时，Bax蛋白的数目就会增加。从实验结果来看，脑泰方组Bax的数目明显低于模型组（P<0.01），实验证明模型组Bax蛋白数目明显增多，使细胞凋亡过度过多而导致脑梗死的发生；而脑泰方能促使Bax蛋白阳性数量明显减少，从而减少脑梗死的发生，达到治疗和预防脑梗死的作用。

［1］陈敏，朱惠斌，葛金文.脑泰方对脑缺血再灌注大鼠血管新生作用的实验研究［J］.湖南中医药大学学报，2010，1（3）：12.

［2］Longa E Z，Weinstein P R，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1）：84-91.

［3］贺运河，郝晓元，葛金文.脑泰方治疗气虚血瘀证脑梗塞临床研究［J］.中国中医急症，2001，10（6）：319.