离体兔Oddis括约肌压力和肌电的同步检测

张志波，李国平，何 谦，李智华

（1.福建医科大学附属第一医院肝胆胰外科，福建 福州 350004； 2.福建医科大学附属第一医院病理科，福建 福州 350004；3.第三军医大学西南医院肝胆外科研究所，重庆 400312）

Oddis括约肌在胆汁和胰液的排出过程中具有重要作用，其运动功能异常可导致多种胆道和胰腺疾病。检测离体Oddis括约肌的运动功能和肌电活动是了解各种因素对该平滑肌组织直接影响的重要手段和方法，目前国内外对Oddis括约肌运动和肌电的检测方法均采用切开肌片法［1-3］，此方法对Oddis括约肌组织的损害大，不能完整地观察该平滑肌段离体后的运动方式和肌电活动。我们在实验过程中发现快速取出的完整Oddis括约肌段在Crebs液中仍可保持较长时间的活性，用自制的黏触式肌电和压力同步检测管插入离体Oddis括约肌后测得了稳定的肌电波和压力波，该实验方法为进一步检测各种因素对Oddis括约肌的单独和联合作用提供了一个简单易行的实验模型。本文介绍离体Oddis括约肌压力波和肌电波同步检测方法，并与在体检测结果进行比较。

1 材料与方法

1.1 实验动物

12只健康成年家兔，由第三军医大学实验动物中心提供，雌雄不限，体重2.5 kg～3.0 kg。实验前12 h禁食，可自由饮水。

1.2 实验方法

1.2.1 Crebs液配制 每1 000 mL中含有（mM）：Nacl 1 112.4，KCl 4.7，MgSO4·7H2O 0.12，KH2PO41.2，NaHCO325，CaCl2（无水）2.5，葡萄糖10.1。配成无色透明溶液后以盐酸滴定pH值为7.4［4］。

1.2.2 肌电及测压系统 HW-400S恒温平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司），RM6240多道生理仪及信号采集处理系统（成都仪器厂），PC polygram HR高分辨、多通道胃肠功能测定仪（瑞典CTD-SyneticsMedical公司）；自制接触性电极和低顺应性毛细灌注测压同步检测管（图 1）［5］，其外径 1.2 mm，共 1 个测压通道和2个接触性电极。低顺应性毛细管灌注系统将Crebs液以0.2 mL/min的速度灌注入导管内腔。

图1 自制接触性电极和低顺应性毛细灌注测压同步检测管

1.2.3 在体检测肌电和压力 实验兔禁食12 h后（可自由饮水），肌注速眠新（0.2 mL/kg）麻醉，快速自腹正中线进腹，于幽门下方约3 cm左右可见白色Oddis括约肌乳头，于乳头对侧纵向切开十二指肠2 cm，将直径1.2 mm的自制接触性电极和低顺应性毛细灌注测压同步检测管插入Oddis括约肌，共1个测压通道和2个接触性电极。同时记录下肌电波和压力波。

1.2.4 离体Oddis括约肌制备及肌电和压力检测 于手术显微镜下可见胆管末端双侧对称的小血管包绕至Oddis括约肌乳头，沿此血管完整切除Oddis括约肌段至胆总管下段，长约3 cm。将切除的Oddis括约肌段立即转至37℃Crebs液中，热缺血时间均小于10 s，浴槽底部通入95%O2加5%CO2。将上述相同检测管插入离体括约肌管腔中。同法检测离体后1 h及2 h的肌电和压力波幅，此时的收缩运动及肌电基础压、压力波幅及肌电电压和频率每个时间点各取20个连续波的平均值，实验数据采取记录，使用SPSS 13.0软件进行配对样本t检验。

2 结果

12只实验兔均同步检测到稳定的离体Oddis括约肌的肌电波和压力波，压力波幅、肌电信号强度与在体检测结果比较差异无统计学意义（P>0.05），基础压及频率离体较在体明显降低，但离体后2 h与1 h强度无明显变化（见图2～图5，表1）。

图2 在体压力波

图3 在体肌电波

图4 离体后1 h压力波

图5 离体后1 h肌电波

表1 离体与在体Oddis括约肌的肌电波和压力波，压力波幅及肌电信号强度测定 （）

表1 离体与在体Oddis括约肌的肌电波和压力波，压力波幅及肌电信号强度测定 （）

注：与在体比较，1）P＜0.05

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3 讨 论

Crebs液多用于离体肌片运动的研究，如本文所述的保持完整形态的离体组织运动功能的研究未见报道，主要原因在于离体组织没有血液供应，维持其生理活动所需的各种物质及代谢后的有害物质的去除完全依靠渗透交换。家兔是一种研究Oddis括约肌肌电活动较为理想的动物［6］，我们在实验研究中发现离体后的兔Oddis括约肌仍有较好的活性，离体运动波形在2 h后仍稳定存在，较初离体时无明显减弱，说明该实验方法对于研究离体Oddis括约肌的运动是可行的。主要原因可能在于兔Oddis括约肌壁在测压管插入后本身厚仅约2 mm～3 mm，渗透交换条件较好，将非Oddis括约肌组织去除也有利于物质交换及离体后活性的保持。低顺应性灌注系统测压时通常应用无菌注射用水，但因其为低渗液，使用后对于没有血供的离体Oddis括约肌可致组织水肿，影响离体组织功能，因此我们改用Crebs液灌注。但每次使用后应用不含电解质的无菌注射用水彻底冲洗测压系统，避免Crebs液中离子沉淀后堵塞测压系统的管道。

离体后的Oddis括约肌失去了上级神经支配，其运动方式完全受肌间神经元控制。从本实验结果中我们可以看出，离体后的括约肌基础压、收缩频率较在体明显下降，反映离体平滑肌的兴奋性和紧张性较在体时下降，Oddis括约肌的收缩频率可能由上级神经元或是体液因素所支配。离体实验中测得的肌电电压无明显降低，可能说明离体和在体所测得的肌电活动都是Oddis括约肌肌间神经元和平滑肌的电活动共同活动的结果。我们可以看出离体和在体肌电中都有一个高电压的单峰波，两者周围的群波在电压大小和电波样式上非常相似，说明该离体实验模型可以很好地反映Oddis括约肌的肌电活动。实验所测得的压力波幅与在体无明显区别，此结果与肌电的强度相符合，笔者认为可能是由于平滑肌的收缩运动由肌间自主神经元所控制，上级神经的电活动主要起到频率和紧张性的调节，而非直接控制肌细胞的收缩运动，其具体机制还有待进一步研究探索。

离体Oddis括约肌的运动功能和肌电活动是了解各种因素对该平滑肌组织在排除神经体液调节影响后作用的一种重要手段和方法，该实验方法可以在保持Oddis括约肌生理形态的前题下检测其离体后的收缩运动和肌电活动，并且获得了与在体检测相一致的收缩运动的波形和肌电信号，简单易行且实验过程中检测指标稳定，可为研究各种因素对离体Oddis括约肌的作用提供一个新的简易可靠的实验模型。

［1］Sand J，Nordback I，Arvola P，et al.Effects of botulinum toxin A on the sphincter of Oddis：an in vivo and vitro study［J］.Gut，1998，42（4）：507-510.

［2］Cullen J J，Park H，Ephgrave K S，et al.Lipopolysaccharide tem －porarily impairs sphincter of Oddis motility［J］.Bio and Chem，2001，6（5）：547-554.

［3］Cullen J J，Conklin J L，Murray J，et al.Effects of recombinant human hemoglobin on opossum sphincter of Oddis motor function in vivo and in vitro［J］.Dig Dis Sci，1996，41（2）：1 292-1 294.

［4］李智，马丽.内皮素对兔离体Oddis括约肌功能的影响［J］.沈阳医学院学报，2005，7（1）：5-7.

［5］陈飞，李虎城，李智华，等.黏膜接触电极在家兔Oddis括约肌肌电测量中的应用价值［J］.中华肝胆外科杂志，2006，12（12）：544-546.

［6］徐红梅，李虎城，胡志安，等.研究Oddis括约肌肌电活动的实验动物模型的建立［J］.中华肝胆外科杂志，2006，12（12）：841-843.