赵仙文
(山西省朔州市朔城区北城医院,山西 朔州 030062)
小建中汤出自汉代《伤寒论》,原方由芍药六两,桂枝三两去皮,甘草二两,生姜三两,大枣十二枚,饴糖一升组成,具有温中补虚、和里缓急之功效,用于腹中时痛,温按则痛减,舌淡苔白,脉弦细,或四肢痠楚,手足烦热,咽干口燥;或心中悸动,虚烦不宁,面色无华的虚劳里急证[1]。中成药小建中胶囊是按传统处方配伍,将单味中药经煎煮、浓缩、干燥后混合精制而成,与传统饮片使用相比虽然具有服用量少、携带方便、剂量准确、药物稳定、便于储存等优点,但也存在大量争议。本实验用HPLC法对小建中胶囊中芍药苷的含量进行测定,现将结果总结报道如下。
日本岛津LC-2010高效液相色谱仪,CLASSVP色谱处理系统(配有四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器、柱温箱、紫外检测器),电子天平(METTLER AE-200)。
芍药苷对照品购自中国药品生物制品检定所,批号:110736-200628;乙腈、甲醇均为色谱纯;水为实验室专用纯水机XYD-10-H处理超纯水;其余试剂均为分析纯。小建中胶囊为我院自制,经我院药房主管药师鉴定。
色谱柱(4.6 mm×250 mm),十八烷基键合硅胶为填充剂,柱温检测为常温(30℃),检测波长为260 nm,以乙腈-0.1%磷酸(15∶85)溶液为流动相,流速1.0 mL/min,进样量为 10 μL。
精密称取经干燥的芍药苷对照品5.060 mg,置10 mL量瓶中,加无水乙醇,制成每1 mL含芍药苷0.506 0 mg的对照品溶液。
精密称取经干燥后研细的样品0.6 g,置具塞锥形瓶中,精密加入无水乙醇30 mL,密塞,置40℃恒温水浴中温浸4 h,不时振摇,滤过,滤渣用无水乙醇洗涤5次,每次10 mL,洗涤液与滤液合并,浓缩并定容于10 mL量瓶中,摇匀即可。
按本品处方去除白芍,按照制备工艺制成阴性对照品,并按照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
精密称取芍药苷对照品0.5 g,置100 mL容量瓶中,加稀乙醇溶液并稀释至刻度,摇匀,即得标准品储备液。分别精密吸取上述标准品储备液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL,分别稀释定容于25 mL量瓶中,各取20 μL注入色谱仪中测定,按上述色谱条件依次进样测定峰面积,以进样量为横坐标,峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=11 078.289X+3.569,r=0.999 5,芍药苷在0.1 μg/mL~1.2 μg/mL之间呈良好的线性关系。
精密吸取0.506 0 mg/mL浓度的对照品溶液20 μL,注入液相色谱仪,连续进样6次,测芍药苷峰面积,结果RSD为1.25%,表明仪器进样精密度良好。
取相同批次的小建中胶囊,按供试品溶液制备方法制备6份,分别进样20 μL,测峰面积,结果RSD为1.0%,表明测定方法重现性良好。
取同一供试样品溶液分别在 0 h、2 h、4 h、8 h、20 h进样20 μL,结果表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。
精密称取6份已知含量的研细样品0.6 g,分别置具塞锥形瓶中,照2.3项方法进行操作,得到6份供试品溶液,分别吸取上述溶液各10 μL,注入液相色谱仪测定,结果见表1。
表1 小建中胶囊中芍药苷含量测定与加样回收率结果
取不同批次的小建中胶囊,照上述方法测定5批样品中芍药苷的含量,结果见表2。
表2 5批样品测定结果
根据芍药苷测得的结果,将本品中芍药苷含量限度定为本品每丸含芍药苷(C23H28O11)不得少于28 mg。
中药复方制剂中以芍药苷为指标进行含量测定的报道近年来比较多,研究报道,使用薄层色谱法测定小建中汤复方制剂中芍药苷的含量,其操作复杂,误差大,重现性不佳[4-5]。我们使用高效液相色谱法进行小建中胶囊中芍药苷含量测定,结果表明选择性好,方法简便成熟。在检测波长的选择上,芍药苷对照品溶液在180 nm~600 nm波长范围内,最大吸收波长为260 nm,因此我们选择260 nm作为检测波长。在流动相上我们比较了甲醇-磷酸二氢钾缓冲溶液、甲醇-磷酸二氢钾缓冲溶液-水、乙腈-磷酸溶液为流动相作试验,结果表明乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相分离效果最好。在提取方法上我们比较了40℃恒温水浴中温浸4 h和超声提取芍药苷两种方法,结果表明40℃恒温水浴中温浸的提取率高于超声提取,在该实验中我们采用了40℃恒温水浴中温浸法是可取的。经实验表明,HPLC测定小建中胶囊中芍药苷的含量结果准确,精密度、重现性良好,平均回收率为99.895%,RSD为0.9%,故芍药苷可作为小建中胶囊的质量控制指标。
[1]许济群,王绵之,许子建,等.方剂学[M].上海:上海科技出版社,1985:102.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2010.
[3]张贵中.常用中药化学鉴定[M].北京:化学工业出版社,2005:191.
[4]王绮秋.中药制剂成分现代分析法[M].贵阳:贵州科技出版社,1991:18.
[5]梁宏,王春芳.高效液相色谱法测定八珍丸中芍药苷的含量[J].药物分析杂志,1999,19(2):44-45.