气相色谱法测定阿克他利中的有机溶剂残留量*

兰 静

(天津市药品审评中心，天津 300191)

类风湿性关节炎是自身免疫性疾病,发病部位主要是各运动关节,并常侵犯其他器官,对人体的危害较大。阿克他利(对乙酰氨基苯乙酸)是由日本三菱化学公司开发,并于1994 年在日本上市的新型抗风湿药物，该药主要通过纠正免疫紊乱及免疫调节作用来缓解和改善病情,是一种慢作用抗类风湿性关节炎药物,尤其对早期类风湿性关节炎疗效较好,对多发性硬化症等神经免疫性疾病有潜在疗效,对佐剂性关节炎(AA) 大鼠模型的继发性炎症有较好的抑制作用[1]。药物合成中残留的有机溶剂具有不同程度的毒性，对人体产生不同程度的损伤。因此有机溶剂残留的限量是质量控制的重要项目之一。毛细管气相色谱法以其高柱效、高灵敏度、分析速度快以及很好的重现性等特点，已广泛应用于微量挥发性有机溶剂的监测和药品、食品等相关产品的质量控制。本实验建立了毛细管气相色谱法对阿克他利合成中可能残留的乙醇、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、醋酸进行限度检查的方法。

1 仪器与试剂

Agilent6890 气相色谱仪，Agilent6890工作站(安捷伦科技公司)。乙醇、DMF、醋酸、正丙醇(分析纯，上海化学试剂公司生产)，二甲基亚砜(光谱纯，本溪市轻化工研究所实验厂)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Agilent HP-FFAP 毛细管柱(硝基对苯二酸改性的聚乙二醇，30 m ×0.53 mm，1 μm) ；气化室温度：200 ℃；程序升温：起始温度为50 ℃，以15 ℃/min升温至150 ℃，保持5 min；再以50 ℃/min升温至200 ℃，保持10 min；载气为氮气，流速3.0 ml/min；分流比为2∶1；进样量1 μl；检测器温度：氢火焰离子化检测器(FID)250 ℃。

2.2溶液的制备

2.2.1内标溶液的制备 精密量取正丙醇适量，用二甲基亚砜定量稀释成每1 ml 中含正丙醇1 mg 的溶液，作为内标溶液。

2.2.2对照品溶液的制备 精密量取乙醇、DMF和醋酸各适量，用二甲基亚砜定量稀释成每1 ml 中含乙醇、醋酸各1 mg，含DMF 0.176 mg的溶液作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5 ml，置10 ml量瓶中，精密加入内标溶液1 ml，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的制备 精密称取阿克他利样品约1.0 g，精密称定，精密加入内标溶液1 ml，用二甲基亚砜溶解并稀释制成每1 ml中约含样品100 mg 的溶液，作为供试品溶液。

2.3系统适用性试验 精密量取对照品溶液内标溶液和供试品溶液各1 μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，各色谱峰的分离度及柱效。结果表明，以各有机溶剂计算的理论塔板数均达到10 000 以上，相邻溶剂的分离度均符合要求。色谱图见图1。

2.4线性关系考查 精密量取对照品贮备液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0和8.0 ml，分别置10 ml 量瓶中，各精密加入内标溶液1 ml，用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，制成一系列质量浓度的对照品溶液，按“2.1”项下方法测定。分别以乙醇、DMF、醋酸对照品与内标物的峰面积的比值(Y) 为纵坐标,以乙醇、DMF、冰醋酸的质量浓度(X)为横坐标，进行线性回归，结果见表1。结果表明，乙醇、DMF、冰醋酸在相应的线性范围内线性关系良好。

2.5精密度试验 精密量取对照品溶液1 μl，按“2.1”项下方法操作，重复进样6 次，测得乙醇、DMF、醋酸对照品与内标峰面积比值的RSD 分别为1.8%和1.3%、0.92%(n=6)。

2.6回收率试验 精密称取样品约1 g，置于10 ml 量瓶中，共10份，1 份作为空白，其余9份分别精密加入对照品贮备液4 ml(3份) 、5 ml (3 份) 、6 ml (3份)；每份再分别精密加入内标溶液1 ml，后用二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀 。分别精密量取上述各溶液1 μl ,注入气相色谱仪，记录峰面积。计算回收率，结果乙醇、醋酸和DMF的平均回收率分别为100.7%、100.2%和99.7%，RSD分别为0.87%、1.32%和1.47%。见表2。

1.乙醇 2.正丙醇 3.DMF 4.醋酸

表1 线性范围及回归方程

表2 回收率试验结果(n=9)

2.6最低检出限的测定 取对照品溶液逐步稀释进样，记录峰高为3 倍噪音时乙醇、DMF、冰醋酸的质量浓度，测得的乙醇、DMF、冰醋酸最低检出限分别为40 ng/ml、0.22 μg/ml和40 ng/ml。

2.7样品测定 按“2.2.3 ”项下方法制备供试品溶液， 按“2.2.2”项下方法制备对照品溶液，分别测定，记录色谱图，按内标法以峰面积计算各溶剂含量，结果见表3 。

表3 样品测定结果

3 讨论

由于醋酸酸性强，所以首选在耐性的FFAP色谱柱进行实验，溶剂醋酸能够获得理想峰形，并可以将4 种有机溶剂分离的很好。在本试验条件下，各物质均可达到有效分离，4 种有机溶剂和内标的出峰顺序依次为乙醇( 3.705 min)、正丙醇(4.382 min)、DMF(7.227 min )和醋酸(9.133 min)，整个分析过程在23 min 内完成。方法学验证得到满意结果，精密度符合《中国药典》[2]的要求(RSD<5%)，该方法应用于阿克他利中的有机溶剂残留量测定准确、可信。

1 李卫东,任连生,林志彬. 阿克他利对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞分泌IL - 1 和T 淋巴细胞亚群的影响 . 中国药理学理学杂志,1999 ,13 (3) : 237

2 中国药典.二部.2010: 61-65