HPLC法测定奥硝唑乳膏中奥硝唑的含量*

张玉琪,张国华,董伟林

(⒈天津市中心妇产科医院，天津 300100； ⒉天津市安定医院，天津 300222； 3.天津医科大学新科技应用研究所，天津 300070)

奥硝唑(ornidazole)是一种继甲硝唑、替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑类衍生物，具有良好的抗厌氧菌和抗滴虫作用[1]。奥硝唑乳膏是天津医科大学新科技应用研究所研制中的新制剂，临床主要应用于治疗痤疮及毛囊虫引起的皮肤感染。参考文献资料[2]应用高效液相色谱法对其质量进行控制，建立了奥硝唑含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1仪器 美国科美特高效液相色谱仪(6000 LDI精密恒流泵，6000PVW紫外/可见检测器，Rheodyne 7725i型进样阀，Anastar色谱工作站)；Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm，天津市琛航科学仪器有限公司)；BFX5-320型台式离心机(河北省安新县白洋离心机厂)；MSB010.CX 2.5型台式高速离心机(SANYO)；三环牌YKH-1型液体快速混合器(江西医疗器械厂)；PB153-S型电子分析天平(瑞典梅特勒-托利多)；C-9860A超声波清洗器(天津市科贝尔光电技术有限责任公司)；HGC-12A氮吹仪(天津市恒奥科技发展有限公司)；Millipore-Q超纯水装置；20～200 μl微量加样器(上海大龙医疗有限公司)；100 μl微量进样器(上海高鸽工贸有限公司)。

1.2试药 奥硝唑对照品(中国药品生物制品检定所，批号100608-200301)；奥硝唑乳膏(天津医科大学新科技应用研究所，批号20090512、20090815、20091116)；甲硝唑对照品(内标，中国药品生物制品检定所，批号100191-200305)；甲醇(色谱纯)；超纯水；其余试剂均为市售分析纯。

1.3处方 奥硝唑50 g，硬脂酸120 g，羊毛脂20 g，凡士林230 g，甘油50 g，三乙醇胺20 g，羟苯乙酯2 g，蒸馏水适量共制成1 000 g。

2 方法和结果

2.1色谱条件 色谱柱Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，紫外检测波长312 nm，流动相：甲醇-水(30∶70)，流速1.0 ml/min，进样量20 μl。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液的制备 精密称取奥硝唑乳膏1.0 g，置于200 ml烧杯中，加入适量的流动相于60 ℃水浴上加热搅拌提取20 min，然后再于超声波提取器上超声提取10 min，在冰浴中冷却后移至100 ml量瓶中，流动相定容后，用微孔滤膜过滤器过滤，弃去初滤液，续滤液供含量测定用，为奥硝唑(0.5 mg/ml)供试品储备液。再精密量取奥硝唑(0.5 mg/ml)供试品储备液0.1 ml至100 ml量瓶中用流动相定容，即得供试品溶液。

2.2.2对照品储备液的制备 精密称定于105 ℃干燥至恒重的奥硝唑对照品10 mg，置于10 ml量瓶中，用流动相溶解并定容，制成含奥硝唑1 mg/ml的对照品储备液。

2.2.3阴性对照液的制备 取硬脂酸、羊毛脂、凡士林(油相)和甘油、三乙醇胺、羟苯乙酯及蒸馏水(水相)分别置适当容器中，加热至熔化或溶解，并保持70 ℃左右，在搅拌下将水相缓缓加入油相中，并按同一方向搅拌至凝，即得空白乳膏基质。再精密称取空白乳膏基质1.0 g，置于200 ml烧杯中，加入适量的流动相于60 ℃水浴上加热搅拌提取20 min，然后再于超声波提取器上超声提取10 min，在冰浴中冷却后移至100 ml量瓶中，流动相定容后，用微孔滤膜过滤器过滤，弃去初滤液，续滤液为阴性对照液。

2.2.4内标液的配制 精密称定于105 ℃干燥至恒重的甲硝唑对照品5 mg，置于10 ml量瓶中，用流动相溶解并定容，制成含甲硝唑0.5 mg/ml的内标溶液。

2.3奥硝唑乳膏标准工作曲线制备 精密量取对照品储备液适量，分别置于10 ml量瓶中，加入内标0.1 ml，用阴性对照液定容后，得奥硝唑浓度分别为0.5、1.0、5.0、10、50 μg/ml，含内标5 μg/ml对照品溶液，分别进样20 μl，以奥硝唑和内标的峰面积比值为纵坐标，以奥硝唑浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.009 1X+0.045 8(r=0.997 2)；结果表明乳膏剂中奥硝唑在0.5～50 μg/ml浓度范围内线性关系良好。

2.4系统适应性试验 取阴性对照溶液、阴性对照溶液中加入内标、阴性样品液中加入奥硝唑对照品和含内标的奥硝唑乳膏样品溶液，在上述色谱条件下分别进样，结果上述诸因素不干扰奥硝唑的测定，见图1。

1.内标 2.奥硝唑

2.5精密度试验 取同一浓度对照品溶液, 在相同色谱条件下重复进样5次，结果奥硝唑峰面积的RSD为0.42%(n=5)。

2.6稳定性试验 取同一批(批号20091116)奥硝唑乳膏样品，按“2.2.1”项下操作，得奥硝唑乳膏样品供试液，并依“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8、10、12 h时进样, 测定其峰面积，结果奥硝唑的RSD为1.20%(n=7)，表明样品供试液在12 h内稳定性良好。

2.7重复性试验 取同一批(批号20091116)奥硝唑乳膏样品，按“2.2.1”项下操作，得奥硝唑乳膏样品供试液，并依“2.1”项下色谱条件分别进样测定其含量，结果测得奥硝唑平均含量为4.94%, RSD为1.25%(n=6)。

2.8加样回收试验 精密称取已知含量的奥硝唑乳膏5份，分别精密加入3个浓度水平的奥硝唑储备液适量,按“2.2.2”项下操作，依“2.1”项下色谱条件进样计算奥硝唑加样回收率，得平均回收率为100.97%，RSD为1.01%，结果见表1。

表1 奥硝唑乳膏加样回收率

2.9样品测定 取3批奥硝唑乳膏，分别按“2.2.1”项下处理后，依“2.1”项下色谱条件测定其含量。结果见表2。

表2 3批样品含量测定结果

3 讨论

3.1提取溶剂及方法的选择 选择样品处理方法时，参考文献资料[3，4],比较了几种处理方法， 实验证明，本样品处理方法， 其分离度好， 无干扰， 峰信号较强。

3.2检测波长的选择 精密称定于105 ℃干燥至恒重的奥硝唑对照品适量，用乙醇溶解制成含奥硝唑10 μg/ml的对照品溶液；另取乳膏剂基质适量，用乙醇溶解，滤过，取续滤液，以乙醇作空白，分别在200～400 nm 波长范围内扫描,奥硝唑在波长312 nm 处有最大吸改，空白基质在此波长处对测定无干扰，灵敏度高，可准确测定奥硝唑， 故测定波长选定312 nm。

1 闵洁,王泽华.口服奥硝唑治疗滴虫性阴道炎临床疗效和安全性评价.中华医学杂志,2002，26(2):113

2 陈庆伟，阮宝强.高效液相色谱法测定奥硝唑胶囊中奥硝唑的含量.海峡药学, 2008，(4): 55

3 安媛，孙德江.奥硝唑口腔膜剂的制备及质量控制.中国药房，2005，16(12):908

4 吕红，彭彦，陈萍，等. 高效液相色谱法测定奥硝唑凝胶中奥硝唑的含量.医药导报，2008，7(4)：469