生大黄对肝性脑病大鼠肿瘤坏死因子-α和血氨水平的影响

李 军 周祯祥

1广东药学院中药学院（广东广州510006）

2湖北中医药大学（湖北武汉430065）

在临床上应用生大黄口服或者保留灌肠治疗肝性脑病（HE）取得较满意疗效［1-3］。 近年研究发现肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和血氨（BA）参与肝性脑病的发生［4］，本实验旨在观察生大黄对肝性脑病大鼠TNF-α和BA的影响，为临床应用提供实验参考。

1 实验材料

1.1 实验动物清洁级雄性wistar大鼠70只，体质量（200±20）g，购自湖北省医学科学院动物实验中心，合格证号：2009A052。

1.2 试剂及药品生大黄煎制成含生药质量浓度为1g/mL大黄水煎液，置于冰箱4℃保存备用；乳果糖口服溶液，规格：5.0g/10mL，由丹东康复制药有限公司生产，批号：091201。四氯化碳（CCl4，分析纯），由老河口市石油化工总厂生产，批号：090802，用液体石蜡配制成 20%的CCl4石蜡溶液；TNF-α（ELISA）试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司；BA、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）检测试剂盒均购自南京建成生物工程公司。

1.3 分组及造模70只大鼠采用数字表法随机分为假手术组10只，模型组、生大黄组和乳果糖组各20只。HE大鼠模型制作参照文献［5］方法。除假手术组外，采用CCl4诱导，结扎、切除2/3肝脏，建立大鼠HE模型。实验开始每日1次给大鼠灌胃20%CCl4石蜡溶液5mL/kg，连续2d。手术前大鼠禁食12h，在戊巴比妥钠麻醉下背位固定于手术板上，无菌操作，沿腹正中线上腹部小切口开腹，暴露肝脏，依次在肝蒂部结扎左前叶及中叶，将此两叶切除；然后再将暴露的肝右叶结扎，但不切除。假手术组相应地同时灌胃同等体积的生理盐水，并行假手术（剖腹但不切肝）。于实验第5日（术后禁食24 h）开始，生大黄组和乳果糖组分别予生大黄水煎液5g/100g、乳果糖0.5g/100g灌胃，连续灌胃3d。实验第8日全部大鼠在乙醚麻醉下脑电图检测和心脏采血。

1.4 标本采集与检测脑电图检测：采血前，各组大鼠均在乙醚麻醉下俯卧，安置额枕骨间电极，用八道生理记录仪描记脑电图。血清生化指标：取血5mL，离心取血清，严格按照试剂盒操作说明检测血清 TNF-α、BA、AST、ALT 水平。

1.5 统计学处理采用SPSS 12.0软件进行数据统计分析，计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠死亡率比较假手术组大鼠无死亡，模型组死亡率为 60%（12/20），生大黄组死亡率为 30%（6/20），乳果糖组死亡率为35%（7/20）；生大黄组和乳果糖组与模型组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；但生大黄组与乳果糖组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 各组大鼠脑电图变化假手术组大鼠脑电图以α波为主，无明显异常；模型组大鼠脑电频率变慢，波幅变小，多以宽大的δ波为主；与模型组比较，生大黄组和乳果糖组大鼠脑电的频率变快，尤其生大黄组接近于正常组，可见α波型。

2.3 各组大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平比较见表 1。与假手术组比较，模型组大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平显著升高（P均 ＜0.01）；与模型组比较，生大黄组和乳果糖组大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05 或 0.01）；生大黄组大鼠血清 TNF-α、BA、ALT 水平较乳果糖组低，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 各组大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平比较 （±s）

表1 各组大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平比较 （±s）

与假手术组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与乳果糖组比较，▲P＜0.05。

AST（U/L）120.53±18.65 425.32±58.62△△316.45±42.24△*351.52±46.22△*组 别 n TNF-α（pg/L）BA（mg/L）1.05±0.42 4.63±1.62△△生大黄组 14 112.46±26.43△**▲ 2.08±1.08△*▲乳果糖组 13 186.37±41.59△** 3.12±1.36△△*假手术组 10 51.38±9.42模型组 8 514.54±82.64△△ALT（U/L）52.25±10.52 942.67±185.36△△426.48±128.57△△*▲582.34±165.61△△*

3 讨 论

HE是严重肝病引起的以代谢紊乱为基础，以意识改变和昏迷为主要表现的中枢神经系统功能障碍综合征［6］。目前HE发病机制尚不十分清楚，多数认为是多种因素作用的结果，氨中毒学说仍占主导地位。BA来源分体内代谢产氨和肠道内产氨，入血后在肝脏中经鸟氨酸循环合成尿素，由尿排出。肝脏损害时，不能将进入肝脏的氨都转变为尿素，使BA升高［7］，氨进入脑细胞后干扰脑细胞的能量代谢，使Na+-K+-ATP酶活性减低，ATP缺乏，能量供应不足，以致不能维持中枢神经系统的兴奋活动，从而引起昏迷。BA在HE的发病过程中起着重要作用，能否降低BA浓度在临床上是衡量药物疗效和评估患者预后的一个重要指标，临床上常采用综合性治疗，尤其是降低BA水平来控制HE的出现［8］。TNF-α是淋巴细胞或单核巨噬细胞分泌的促炎症细胞因子，它对机体炎症反应起着重要促进作用，可刺激外周血中性粒细胞向肝组织内移动、浸润，放大肝组织内炎症应答，加重肝脏组织炎症损伤。TNF-α和BA在肝硬化合并HE患者外周血中明显升高，它们可能直接参与肝细胞功能损伤和HE 的发生［9］。

HE 属于中医学“神昏”、“痴呆”、“厥逆”、“癫狂”等范畴。 下法是中医学八法之一，是通过荡涤肠胃，将停留在肠胃的有害物质从下窍而出，以祛除病邪的一种方法，以通里攻下的方法有效防治肝性脑病［10］。生大黄具有通腑泻下，荡涤肠道积滞功效，本实验中，造模后大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平均高于假手术组，在经过乳果糖和生大黄的治疗后，血清TNF-α、BA、ALT、AST水平下降，与模型组比较差异有统计学意义；且生大黄组大鼠血清TNF-α、BA、ALT水平较乳果糖组低，生大黄疗效优于乳果糖。本研究结果显示，生大黄可改善大脑诱发电位异常和肝功能、降低血清TNF-α和BA水平，对大鼠HE有治疗作用，其作用机制可能与生大黄泻下作用，缩短肠道对氨、内毒素等有毒物质的吸收，抑制TNF-α对肝脏组织炎症损伤有关。

［1］王堂明，邱波，李树民，等.生大黄粉口服治疗肝性脑病60例［J］.中国中西医结合杂志，2008，28（6）：558-559.

［2］舒生虎.生大黄预防肝性脑病67例效果观察 ［J］.中国现代医生，2010，48（6）：53.

［3］李宜琴，马瑞英.单味大黄煎汤保留灌肠治疗30例肝性脑病及护理［J］.陕西中医，2010，31（2）：178.

［4］奕月香，靳静.肝性脑病患者肿瘤坏死因子-α、血氨水平变化及意义［J］.中国实用神经疾病杂志，2008，11（6）：84-85.

［5］熊益群，周大桥，李航森，等.实验性大鼠肝性脑病动物模型的研究［J］.中国实验动物学杂志，2002，12（6）：340-342.

［6］陆伦跟.肝性脑病的发病机制 ［J］.中华肝脏病杂志，2004，12（5）：304.

［7］徐如祥，肖华.现代临床昏迷学［M］.北京：军事医学科学出版社，2003：311-327.

［8］郭惠学，边壮.综合降低血氨浓度治疗乙肝肝硬化引起的肝性脑病［J］.中国实用神经疾病杂志，2007，10（2）：21-22.

［9］郭长青，黄宏春，李继昌，等.肝硬化腹水患者内毒素、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素水平的检测及临床意义 ［J］.临床荟萃，2005，20（2）：91-92.

［10］闫威，杨玉洁，刘铁军，等.毒消肝清颗粒对肝性脑病大鼠脑电图的影响［J］.中国老年学杂志，2010，30（2）：249-250.