钱文军,纪 勇,茅卫东,刘少平,沈 东,林 峰,陆向东
(东南大学附属江阴医院,江苏江阴214400)
肿瘤的生长和转移必须依赖于血管生成[1],抑制其血管生成能够控制其生长和转移[2]。血管内皮生长因子(VEGF)可与血管内皮细胞特异性结合,刺激血管内皮细胞增殖,并促进血管内物质渗出,为肿瘤细胞的迁徙和转移提供条件[3]。内皮抑素(Endostatin)被认为是最有效的内源性血管生长抑制因子之一,其表达水平与多种恶性肿瘤的进展和预后密切相关[4]。本研究采用 ELISA法对126例食管鳞癌患者血清中的VEGF和Endostatin进行了检测,观察其水平变化并探讨其临床意义。
1.1 临床资料 2006年8月~2009年6月收治的食管癌患者126例,男86例,女40例;年龄45~74岁。本组符合以下标准:病理学检查诊断为食管鳞癌,患者术前未接受放疗、化疗及其他任何针对癌的治疗。肿瘤位置:食管上段16例,食管中段68例,食管下段42例。肿瘤T分期:T1期24例,T2期35例,T3期44例,T4期23例。肿瘤长度(以切除后测量肿瘤侵犯食管纵轴长度为标准)3~12 cm。肿瘤组织分化程度:高分化42例,中分化36例,低分化48例。选择体检健康者14例作对照,男10例,女4例;年龄40~70岁。
1.2 VEGF、Endostatin检测方法 采用非抗凝管抽取食管鳞癌患者及健康对照者的外周静脉血5 ml,室温放置30~60 min,5 000 r/min离心10 min,分离血清。将血清置2 ml的 Eppendorf管中,-20℃冷冻。采用ELISA法检测血清VEGF、Endostatin。按试剂盒说明书操作,于450 nm处检测VEGF的光密度值(OD值),于490 nm处检测Endostatin的OD值。结果判断:①VEGF:以标准品浓度作横坐标、VEGF的OD值作纵坐标绘制标准曲线,在标准曲线上查出VEGF浓度。②Endostatin:以标准品浓度作横坐标(横轴为对数刻度)、Endostatin的OD值作纵坐标绘制标准曲线,在标准曲线上查出Endostatin浓度。所有标本重复检测2次,取均值。
1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。组内及组间均数比较用t检验,多组均数比较用单因素方差分析,方差不齐或非正态分布资料的比较用秩和检验,VEGF与Endostatin的相关性予直线回归分析。P≤0.05为差异有统计学意义。
食管鳞癌患者和健康对照者血清VEGF水平分别为(20.68 ± 3.09)μg/L、(3.82 ± 6.28)μg/L,Endostatin分别为(4.96 ± 1.72)μg/L、(1.60 ±0.37)μg/L,VEGF/Endostatin 分别为 4.17 ± 0.28、2.38 ±0.75,各指标相比,P 均 <0.05。血清 VEGF、Endostatin水平与食管鳞癌肿瘤分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期有关(P均<0.05),详见表1。食管鳞癌患者血清VEGF与Endostatin水平呈正相关(r=0.594,P < 0.01),回归方程:Y=0.065 8X+90.463。
研究表明,VEGF和Endostatin分别是目前已知的作用最强、特异性最高的血管生成促进因子和抑制因子。由于基因表达的剪切方式不同,VEGF形成5 种不同异构体,即 VEGF121、145、165、189、206,5种异构体均能诱导体内血管生成[5]。Endostatin为胶原XⅧC-末端非胶原蛋白特征结构域(NC1)中的一内源性片段,大多分布在血管的基底膜上[6],可抑制内皮细胞的增殖、迁移,并诱导其凋亡。
表1 血清VEGF、Endostatin水平与食管鳞癌患者临床病理参数的关系(μg/L,¯x ±s)
Kuroi等[7]检测了多种癌症患者血浆中的VEGF和Endostatin,发现其水平及二者比值明显高于健康对照组。本研究观察到,食管鳞癌患者血清中VEGF和Endostatin水平较健康对照者显著升高,且两者表达呈正相关。说明在食管鳞癌发生过程中,血管生成促进因子和抑制因子水平失衡,肿瘤通过分泌大量VEGF,促进血管生成,为肿瘤转移打下基础;同时,肿瘤细胞可能刺激包括Endostatin在内的多种血管形成抑制因子的合成,并通过血循环到达肿瘤部位,抑制肿瘤血管生成,与肿瘤血管生成促进因子相互拮抗[8]。
本研究发现,食管鳞癌患者血清 VEGF和Endostatin水平与肿瘤病变长度、淋巴结转移、TNM分期及分化程度等密切相关,食管鳞癌患者病变越长、细胞分化程度越低、TNM分期越晚,其血清VEGF和 Endostatin水平越高,且 VEGF/Endostatin增大。说明在食管鳞癌的发展进程中,VEGF和Endostatin相对性失衡表达,最终表现为促血管生成作用,导致肿瘤无限制生长、侵袭和转移。
综上所述,本研究结果进一步证明了VEGF、Endostatin表达失衡在食管鳞癌发生、发展、侵袭和转移中均起重要作用。血清VEGF、Endostatin水平可作为预测食管鳞癌预后、恶性行为的指标。
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