去甲斑蝥酸钠对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

史兆章，阚 晓，曾兆清

(济南市传染病医院，济南250033)

去甲斑蝥酸钠(SNCID)可抑制多种细胞的增殖，促进其凋亡［1，2］，但尚未见其对肝癌细胞影响的相关报道。HepG2细胞具有和人类肝细胞相似的代谢能力［3，4］。2010年 9 月 ～2011 年 2 月，我们观察了SNCID对HepG2细胞增殖的影响。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 细胞培养及分组 人肝癌HepG2细胞系，用含10% 小牛血清的RPMI1640培养液培养，长满后用0.25%的胰酶消化传代。取对数生长期的人肝癌细胞株HepG2，用0.25%的胰蛋白酶消化，加入含10%小牛血清的RPMI1640培养液制备成浓度为1×105/ml的单细胞悬液，接种于24孔板上，每孔加入1 ml单细胞悬液，放入5%CO237℃的温箱中孵育，24 h后取出培养板，弃去上清液，SNCID组分别添加含 5、2.5、1、0.5 μg/ml的注射用 SNCID 1 ml，对照组不添加任何药物，各个浓度均设18个复孔。待药物充分混匀后，将24孔板放入37℃、5%CO2的温箱中孵育。

1.2 细胞增殖率和细胞周期测定 培养24、48、72 h后，采用流式细胞仪和流式细胞术检测HepG2细胞的增殖周期，并计算增殖指数(PI)。操作按试剂盒说明书进行。PI=S+G2/M细胞数/细胞总数×100%。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。结果以±s表示。组间比较采用单因素方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

各组 HepG2 细胞培养 24、48、72 h G0/G1、S 期细胞比例及PI见表1。由表1可见，SNCID组G0/G1期的细胞比例明显增高(P均＜0.05)，而S期细胞比例、PI降低，此效果呈时间和浓度依赖性(P均＜0.05)。

表1 各组HepG2细胞培养24、48、72 h G0/G1、S期细胞比例及PI(%，±s)

表1 各组HepG2细胞培养24、48、72 h G0/G1、S期细胞比例及PI(%，±s)

G0/G1 S组别PI 24 h 48 h 72 h对照组 74.66±0.52 74.06±0.18 75.51±1.70 14.32±0.22 14.32±0.37 13.69±0.99 25.34±0.52 25.94±0.24 h 48 h 72 h 24 h 48 h 72 h 18 24.49±1.70 SNCID组0.5 μg/ml 74.19±1.29 75.26±1.18 74.73±0.51 14.88±0.94 14.38±1.21 13.39±1.13 25.81±1.29 24.74±1.18 25.27±0.51 1.0 μg/ml 74.08±0.79 75.86±0.51 78.54±0.54 14.50±0.49 12.38±0.53 12.02±1.00 25.92±0.79 24.14±0.51 21.46±0.54 2.5 μg/ml 76.84±0.33 78.42±0.87 81.31±0.60 14.00±0.33 10.55±0.49 9.26±0.46 23.16±0.33 21.58±0.87 18.69±0.60 5.0 μg/ml 77.76±1.23 81.77±1.42*80.50±1.21 12.91±0.92 9.46±0.84 10.01±0.9722.24±1.23 18.23±1.42 19.50±1.21

3 讨论

细胞增殖周期分为 G1/G0期、S期、G2期、M期。S期为细胞的DNA合成期。一般认为肿瘤细胞S期比率高，增殖旺盛，细胞倍增时间短［5，6］。PI是反映肿瘤细胞增殖活性的指标。本研究结果显示，用不同浓度的SNCID培养后的HepG2细胞中G1/G0期细胞比例明显增加，而S期细胞比例和PI降低，且此效果呈剂量和时间依赖性，表明SNCID可阻滞HepG2细胞停滞于G1/G0期，从而抑制其增殖，发挥抗肿瘤活性。早期肝癌患者常缺乏典型的临床表现，待出现典型的临床表现时患者多处于Okuda分期［7］的第三期，大多已丧失施行传统治疗时机［8］。SNCID是一种新型抗肿瘤药，本研究结果显示SNCID可抑制HepG2细胞增殖，展示了SNCID在肝癌治疗方面良好的应用前景。

［1］An WW，Gong XF，Wang MW，et al.Norcantharidin induces apoptosis in Hela cells through caspase，MAPK，and mitochon-drial pathways［J］.Acta Pharmacol Sin，2004，25(11):1502-1508.

［2］范跃祖，陈春球，赵泽明，等.去甲斑蝥素对胆囊癌肿瘤血管生成的作用及研究［J］.中华医学杂志，2006，86(10):693-699.

［3］李艳.生物化学检验一理论与实践［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2003:92.

［4］陈文斌，潘祥林.诊断学［M］.6版.北京:人民卫生出版社，2005:404.

［5］戎煜，凉福佑，陈莉，等.去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞系的凋亡诱导作用及 bcl-2 基因的表达［J］.癌症，2000，19(12):1077-1083.

［6］Parkin DM.Global cancer statistics in the year 2000［J］.Lancet Oncol，2001，2(9):533-543

［7］El-Serag HB，Rudolph KL.Hepatocellular carcinoma:epidemiology and molecular carcinogenesis［J］.Gastroenterrology，2007，132(7):2557-2576.

［8］Llovet JM，Burroughs A，Bruix J.Hepatocellular carcinoma［J］.Lancet，2003，362(9399):1907-1917.