乳腺导管内癌中Ezrin和Survivin表达及临床病理意义

刘现军,金东岭,席 丰,时志民

(河北工程大学医学院病理教研室,河北邯郸056002)

乳腺导管内癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)是一组异质性肿瘤,特征是局限于乳腺导管的恶性上皮细胞克隆性增生,尚未突破基膜,易外科切除治愈。然而临床上导管内癌生物学潜能和复发较难预测,有10%-50%导管内癌进展为浸润癌,是潜在的致病性疾病。近年研究表明Ezrin蛋白作为肿瘤侵袭和转移中的相关蛋白在很多肿瘤组织中都有异常表达,Ezrin蛋白参与肿瘤浸润和转移的多个环节,如从原发部位脱落侵入周边组织、穿入脉管系统、穿过基膜形成转移瘤等[1,2];Survivin具有抑制细胞凋亡和促进细胞分裂的重要作用,是促进肿瘤细胞恶性增生的重要机制之一[3,4],为研究Ezrin和Survivin在乳腺导管内癌发生和进展过程中的作用,我们采用免疫组织化学方法检测52例乳腺导管内癌和20例乳腺良性病变中Ezrin和Survivin表达情况,以探讨其临床病理意义。

1 材料与方法

1.1标本选择收集河北工程大学医学院病理教研室2004-2008年间存档的乳腺导管内癌52例,均为女性,年龄28-75岁,平均年龄为50.3岁,所有病例术前均未行放、化疗和免疫治疗;收集乳腺良性病变20例(纤维腺瘤10例、腺病10例),所有病例临床资料完整。

1.2方法和试剂对乳腺导管内癌和乳腺良性病变的手术标本均经按常规病症处理切片进行H.E染色,用作组织形态对照。同时进行S-P法免疫组化染色。Ezrin鼠抗人单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司,鼠抗人Survivin单克隆抗体及S-P免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司,按说明书进行操作,染色前经微波加热抗原修复液修复抗原,以PBS代替一抗作阴性对照,用已知阳性片作阳性对照,DNB显色苏木精复染。

1.3结果判断标准Ezrin蛋白和Survivin染色在无背景着色情况下,以细胞出现黄色颗粒者为阳性,综合考虑染色强度和阳性细胞数量,采用半定量积分判断染色结果,计算阳性细胞百分数并给予分值:≤5%为0分、6-25%为1分、26-50%为2分、51-75%为3分、＞75%为 4分;着色强度给予分值:无着色为0分、浅黄着色为1分、黄色为2分、棕黄为3分。两者相乘,0分为(-)、1-4分为(+)、5-8分为(++)、9-12分为(+++)。

1.4统计学处理所有数据采用SPSS16.0软件包处理。各组资料的比较采用 χ2检验和Fisher精确概率检验。

2 结果

2.1Ezrin和Survivin在乳腺良性病变与导管内癌中表达见表1,Ezrin在的乳腺良性病变中阳性表达为90.0%(18/20),++-+++占11.1%(2/18),主要定位于乳腺导管上皮细胞膜,表现为细胞膜呈浅黄色(图1);在导管内癌中Ezrin主要弥散在胞质内(图 2),表现为棕黄色或棕褐色,阳性表达为65.4%,++-+++占82.4%(28/34),两组比较差异有显著性(P＜0.01)。Survivin在良性乳腺病变中未见表达,在乳腺导管内癌中Survivin定位于细胞核和/或细胞质(图3),其阳性表达率为67.31%,两组比较差异有显著性(P＜0.01)。

2.2Ezrin和Survivin与乳腺导管内癌临床病理特征的关系见表2,χ2检验显示,乳腺导管内癌Ezrin和Survivin的表达与年龄、肿瘤大小无关(P＞0.05),而在组织学DIN1、DIN2、DIN3中随着导管内癌级别增高,Ezrin和Survivin表达率逐渐增高,各组间阳性表达率均具有显著性差异(P＜0.05)。

表1 Ezrin和Survivin在乳腺良性病变与导管内癌中表达情况

图1 Ezrin在乳腺良性病变导管上皮细胞膜表达

图2 Ezrin在DCIS细胞质内表达

图3 Survivi在DCIS细胞核内表达

3 讨论

Ezrin蛋白基因定位于染色体6q25.2-q26,属于ERM家庭成员,在细胞的多种活动中发挥作用,其表达产物Ezrin蛋白在N-末端有一个同源性很高的FERM功能域,在C-末端的氨基酸位置上有一个关键与激活有关的苏氨酸磷酸化位点[2,5],Ezrin蛋白以非活化状态和活化状态两种形式存在,活化的Ezrin在细胞的运动、迁移、有丝分裂等生理功能中发挥重要作用。Ezrin蛋白与多种肿瘤的发生、转移和预后有关,如妇科肿瘤、消化道肿瘤、骨肉瘤和横纹肌肉瘤等,Ezrin蛋白在肿瘤细胞中的表达异常提示其在肿瘤的浸润、转移机制中发挥重要作用,Zhang等[6]发现Ezrin蛋白与肝癌细胞的增殖侵袭和迁移呈正相关,Ezrin蛋白表达下调则抑制高转移潜能细胞系的侵袭能力,本研究对乳腺良性病变和乳腺导管内癌中表达情况发现,良性病变中Ezrin蛋白表达于导管上皮细胞膜,着色较浅,而在导管内癌细胞中,Ezrin蛋白主要定位于细胞质,表达强度明显高于良性病变,分值差异明显(P＜0.01);研究发现随着导管内癌由低级别到高级别的增高,Ezrin表达率呈渐高趋势,而与年龄和肿瘤大小无关。Ezrin蛋白的定位由乳腺良性上皮细胞膜表达转化为DCIS细胞质表达,可能系Ezrin激活,E-cadherin在细胞内聚集,而细胞表面E-cadherin减少。细胞间黏附性降低、细胞间隙增宽、伪足形成、运动力侵袭力增强[7]。因而Ezrin蛋白在乳腺肿瘤细胞质中的高表达与乳腺肿瘤的去分化和不良特征有关。

表2 Ezrin和Survivin表达与乳腺导管内癌临床病理特征关系

细胞凋亡的异常抑制与恶性肿瘤的发生、进展以及耐药的产生密切相关,Survivin是近几年克隆出来的凋亡抑制蛋白(Inhibitor of apoptosis proteins,IAP)家族的新成员,也是迄今发现的最强的凋亡抑制因子[8],研究表明Survivin不但具有抑制细胞凋亡的作用,而且可能参与细胞有丝分裂的调节,干扰Survivin与有丝分裂纺锤体微管的特异结构,可致Survivin抗凋亡活性的丧失,Survivin在细胞增殖、凋亡和血管形成等多方面起重要作用,Survivin可直接作用于细胞凋亡核心机制的caspase-3、caspase-7的活性,阻断细胞的凋亡过程,Survivin在组织中的表达具有选择性,它在大多数正常组织中不表达或仅有少量表达,但在肺癌、胃癌、食管癌、结肠癌、卵巢癌、淋巴瘤等组织中特异性高表达,田锋等采用免疫组化法和组织芯片技术检测56食管癌,发现Survivin在食管癌中高表达,与食管癌的发生发展有关[9]。Miyachi等研究认为,Survivin表达可作为某些肿瘤的预后和复发的标志,与癌的发生、转移有一定的关系[10]。在本实验中乳腺良性病变Survivin不表达,在乳腺导管内癌组织中,随着导管内癌级别的升高其表达率渐增高,相邻两组间差异有统计学意义,提示Survivin基因在乳腺导管癌早期已被激活,其过度表达通过抑制细胞凋亡,促进细胞异常增殖,最终导致浸润癌的发生,Survivin基因的表达对于预测乳腺导管内癌的转归可能有重要意义。

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