南昌地区献血者血液内毒素含量调查

苗燕平，王 健，韩 玲，何华庆

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

输血安全、有效是采供血机质量目标的重点[1-2]，细菌污染是影响血液质量最常见因素之一，而且主要是由于革兰阴性细菌感染，革兰阴性细菌可产生内毒素，为此，本中心采用动态浊度法检测南昌地区无偿献血人群血液内毒素，现将调查报告如下。

1 材料与方法

1.1 样本来源 从采集的血液中分离的血浆标本共326人份标本，自愿献血者符合国家献血健康要求的年龄l8～55岁，其中男性172人份、女性154人份，血型A、B、O和AB分别为96人份、90人份、109人份和31人份。

1.2 试剂和仪器 EKT-1M动态内毒素检测试剂盒 (批号：EKT-107, 灵敏度0.05EU/ml，北京金山川)；细菌内毒素检查用水(批号200910)；标准内毒素(批号 20090525，4EU/支，北京金山川)； MB-80微生物快速动态检测系统、T01智能恒温仪、冰浴槽均由北京金山川科技发展有限公司提供。

1.3 实验方法

1.3.1 血浆制备 血液采集与血液保存液抗凝剂(枸橼酸盐)充分混均后,取血袋导管离心，选择淡黄澄清的正常血浆(去除脂肪、溶血等异常血浆)并热合使用，血浆样本直接检测或-25℃冰冻保存待检；实验使用玻璃试管、吸头均不含有外源性内毒素。

1.3.2 待测样品制备 取上述血浆0.10ml，加入装有0.90ml样品处理液中，混匀后置70℃保温10min，取出后放入冷水浴中冷却至37℃以下即为待测血浆样品。

1.3.3 样本检测 取待测血浆样品0.20ml加入反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至9mm×65mm无热原平底反应管中，插入MB-80微生物动态检测系统中进行反应，反应结束后由标准曲线自动计算出待测血浆中内毒素含量。

2 结果

326 人份血浆内毒素含量测定结果显示见表1。

表1 326份样本内毒素测定结果

3 讨论

革兰阴性细菌为保存血液的主要感染菌群，其产生内毒素的成份为细胞壁的脂多糖，具有很强的细胞毒作用，可引起发热、微血管扩张、炎症反应，甚至引起高热、低血压休克和DIC[3]。因此对血液内毒素监测和临床辅助诊断越来越受到国内外的关注。本实验室引进MB-80微生物动态检测系统进行细菌内毒素定量检测，通过实验与摸索，建立了血液内毒素的检测方法。

从本次检测结果可以看出，南昌地区正常人群血液内毒素含量低，所使用鲎试剂灵敏度达不到人体内毒素含量最低水平，从而显示出血液内毒素含量＜0.05183EU/ml。因此，生产厂家能尽快提供灵敏度更高、稳定性更好鲎试剂，以便进一步检测显得十分必要。值得一提的是，12、32、89、90、241 号样本实测值均＞0.05183EU/ml。 由于样本未能重新检测，但笔者分析认为可能是检测污染所致。随着内毒素检测广泛应用，解决好血液样本对鲎试剂干扰和试剂灵敏度问题，检测血液的内毒素含量，对于完善血液内毒素检测和建立本地区正常人群细菌内毒素参考范围意义重大。

MB-80微生物动态检测系统进行血液内毒素检测，能直观地观察样品的变化情况，尤其是临界值的样本，对于血液及其制品的质量控制具有非常重要的意义[2]。由于血液成分十分复杂，对内毒素动态浊度检测实验的干扰较大，需要选取无乳糜、无溶血样本，同时70℃水浴10min，目的是消除血浆蛋白质对实验干扰；优化血浆同体系模型法建立标准曲线,有效的解决受检样本与标准系统的误差；最后是严谨操作防止内毒素污染，是获得检测结果准确的重要保证措施。

[1]曾晓悦,吴欣欣.2009年献血淘汰人群情况分析[J].实验与检验医学,2011,29(2):177-178.

[2]王旭安,曾晓悦.2010年血液报废情况分析[J].实验与检验医学,2011,29(4):433-434.

[3]单路娟,邱 阳,郭 莉,等.内毒素的测定与临床意义[J].大连医科大学学报,2004,26(3):231-233.

[4]张 维.MB-80微生物动态检测系统应用于血站内毒素检测探讨[J].中国当代医药,2010,17(7):130-131.