全自动生化分析仪试剂间携带污染及解决方法

杜立水

(山东省肥城矿业中心医院检验科，山东 肥城 271608)

全自动生化分析仪是临床实验室必备的检验仪器，具有快速、准确、重复性好及多样本处理能力等优点，随着检测方法学的改进和校准品质量的提高，使得临床生化分析的准确度和精密度得到了进一步的提高。但在分析过程中由于生化分析仪共用试剂针、搅拌棒以及比色杯，经过长期使用或保养不当致其清洗能力下降时，则达不到应有的清洗效果，从而引起试剂间的携带污染[1]。我们在日常工作中，使用日立7170S型全自动生化分析仪观察到同时测定含有肌酐和脂蛋白a、前白蛋白的项目组合以及总蛋白和铜离子的组合项目时，发现脂蛋白a、前白蛋白和铜离子结果明显增高，而单独复查时结果正常。用去离子水增加冲洗量和专用清洁剂清洗不能完全消除携带污染。通过改变以上项目的位置和分析顺序，则可以有效地避免试剂间的相互污染。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 日立7170S型全自动生化分析仪。肌酐试剂(碱性苦味酸法，批号60055970/4)为上海申能－德赛诊断技术有限公司产品。脂蛋白(a)试剂(免疫比浊法，批号100505)为北京利德曼生化技术有限公司生产。前白蛋白试剂(免疫比浊法，批号100303)为浙江伊利康生物技术有限公司产品。总蛋白试剂(双缩脲终点法，批号012301L)为北京利德曼生化股份有限公司产品。铜离子试剂(终点法，批号006081E)为北京利德曼生化股份有限公司产品。

1.2 实验方法

1.2.1 测定参数 严格按试剂说明书提供的参数进行设定。

1.2.2 交叉干扰实验方法 50份健康体检人员的血清标本，单独测定脂蛋白a和前白蛋白，其脂蛋白a测定值范围为38.20～300mg/L，前白蛋白测定值范围为208～391mg/L。然后再按照如下顺序分别进行混合血清测定，肌酐→脂蛋白(a)、肌酐→前白蛋白；测肌酐后用蒸馏水加强冲洗一次，再次测定脂蛋白(a)和前白蛋白。

1.2.3 用同样方法先单独测定铜离子，测定值范围为6.5～38.2μmol/L。再测总蛋白，然后再测铜离子。

1.3 携带污染率的计算 单独测定的项目结果用A表示，测定施污染项目后再次测定的受污染项目的结果用B表示。

1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0统计分析软件作配对资料的t检验处理，以P＜0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 按照实验方法，对50份标本进行分析，结果对比见表1。从表中可看出，在日立7170S全自动生化分析仪上设置清除试剂间携带交叉干扰的清洗程序，再从肌酐项目转向脂蛋白a项目时再对试剂针用蒸馏水加强冲洗一次。仍不能消除试剂携带交叉干扰。同样将上述清洗程序中使用的蒸馏水分别换为酸性、碱性清洗液加强清洗，将清洗后的测定结果与单独测定脂蛋白a和前白蛋白所得结果分别进行t检验，统计学分析结果显示除用碱性清洗液清洗后结果与单独测定结果差异无统计学意义外，其余结果差异仍有统计学意义 (P＜0.05)，具体结果见表1。

2.2 改变仪器检测顺序 在肌酐与脂蛋白a之间穿插一个项目或增加水冲洗量时，结果仍然存在试剂交叉污染。将脂蛋白a排在血脂组合项目中间，进行盲法测定，测定结果为146±38mg/L，分别与单独测定脂蛋白a所得结果进行显著性检验，P＞0.05。用同样方法，在测定铜离子时，将该项目排在组合中间，就可以避免双缩脲试剂对铜试剂的试剂针携带污染。

表1 50份标本测定结果

3 讨论

3.1 多通道生化分析仪的试剂加样针需接触各种试剂成分，按常规清洗，一般难以清洗干净，特别是搅拌棒在反应杯中将血清和试剂混匀时，就容易在两个样品间或两个测试项目之间出现携带污染。以去离子水清洗，如果清洗不干净，前一测试项目的试剂针、样品针或混匀器的残留部分将对下一测定项目造成很大影响，导致生化分析仪试剂之间存在交叉污染。如果某一试剂含有下一测试所要测定的底物或含有的某种成分与下一反应所要测定的底物有作用，则直接干扰下一反应的测定结果。在试剂污染情况下，下一反应进程是前后两种试剂综合作用的结果，也干扰下一反应的测定结果[2]。因此生化分析仪在吸取不同试剂时，要对试剂针内外壁用蒸馏水进行彻底清洗。常规清洗有时难以将取样针清洗干净，从而造成项目之间的试剂污染而影响测定结果[3]。特别是仪器老化、维护欠缺时的清洗能力低下和仪器内污垢的积聚致黏附增加使得仪器不能有效消除携带污染。增加清洗次数，可明显降低仪器的携带污染率；用专用清洗液加强清洗，可提高清洗效果[4]。日立生化分析仪专用的碱性清洗液，能够比较彻底地对仪器管道及针腔清洗，对于污染性较强的项目，如肌酐、总蛋白等，在设置分析程序时，要增加碱性清洗液冲洗量和冲洗次数，降低携带污染。

3.2 实验表明，仅用蒸馏水、酸性清洗剂加强清洗试剂针仍不能消除部分检验项目之间干扰现象。通过改变仪器的检测顺序，将被干扰项目的顺序排在干扰项目顺序之前或中间增加其它项目，隔绝两者的直接联系，可降低污染。因此建议，在生化分析仪上如果出现交叉污染时，可以用更改检测顺序的方法，同时设置使用蒸馏水加强清洗程序，从而大大减低试剂之间的交叉污染，对于污染严重的项目，应在测定该项目后设置使用碱性清洗液、蒸馏水进行清洗，将对下一个项目的干扰降到最低限度。

3.3 要求检验人员对仪器的工作状态要了如指掌，熟悉各种试剂反应的原理和各种试剂的组成成份，并在一个样本的项目选择或一个样本的最后一项与下一样本的第一个项目选择时对于试剂交叉污染的可能性加以考虑，合理安排项目顺序或样本顺序，以便得到更为合理的结果。

3.4 加强仪器的日常保养和维护，是保证测定结果准确性的基础。试剂针和搅拌棒应每天用无水乙醇从上往下轻轻擦拭，在擦拭搅拌棒时勿损伤其表面的疏水物质。有加强清洗程序的仪器应当启用该程序以减低交叉污染[5]。鉴于试剂成分的复杂性、仪器工作原理的差异，每个临床实验室所发生的携带污染也不完全相同，所以要根据实验室目前情况将携带污染项目和程度作一具体评估，并采取相应的对策，才能使检测结果更加准确可靠[6]。本实验室根据对各个检测项目进行合理安排分析顺序，对污染项目进行隔开或将被容易污染的项目放到其他分析项目的前面以及用碱性清洗液清洗试剂针等措施，在日常工作中对每天的高、中、低值质量控制运用Westgard多规则质控方法进行控制[7]，对失控情况尽快查找原因及时处理，对具体检测过程进行回顾性分析。并认真做好仪器的每日、每周和每月的维护和保养工作，使仪器处于最佳工作状态，提高了测定结果的准确性和精密度，取得了非常满意的效果。

[1]陈继中,李旭光,唐吉斌.试剂携带污染对血清总胆汁酸测定结果的影响及消除措施[J].检验医学,2006,21:228-230.

[2]于 雷.生化自动分析仪项目间试剂的交叉污染及其避免方法[J].临床检验杂志,2003,21(3):168.

[3]黄承荣,颜 娟.三酰甘油、总胆固醇试剂对总胆汁酸测定的干扰及排除[J].临床检验杂志,2006,24(3):220.

[4]顾光煜,张 葵.临床化学自动分析的携带污染与解除[J].临床检验杂志,2007,25(6):401.

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[6]谢小兵,李 萍,夏 历,等.血脂与谷丙转换酶试剂对总胆汁酸检测的携带污染观察[J].实用预防医学,2008,15(4):246.

[7]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:897.