核桃仁抗小鼠皮肤衰老的实验研究

姚媛媛 陈 勤

安徽大学生命科学院，安徽合肥 230039

延缓衰老、青春永驻是古今中外人类的梦想。皮肤因暴露于外界环境，并受情绪、生活方式、年龄等影响，故易表现衰老外观，影响美观、社交等。抗皮肤衰老一直是医学界悬而未决的课题。核桃仁是中医传统良药，《本草纲目》记述其有“补气养血，温肺润肠”等功效[1]。但有关核桃仁抗皮肤衰老的研究尚未见实验报道。本实验考察了核桃仁对皮肤衰老的延缓作用，为进一步开发提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料仪器

昆明种健康小鼠（皖医动准字01号），体重20～30 g，由安徽医科大学动物中心提供。核桃仁（购于合肥大药房）加水浸泡30 min，煎熬3次后过滤，合并滤液浓缩成1 g/mL，4℃冰箱放置。仪器有WFZ UV-2100型紫外分光光度计，德国Leica石蜡切片机等。

1.2 试验方法

小鼠随机分为正常组、模型组及治疗组，每组10只。模型组与治疗组均于皮下注射D-半乳糖1g/（kg·d）造模。第11天开始治疗组用核桃仁水提液8 mL/（kg·d）灌胃治疗，持续30 d。第41天水合氯醛麻醉处死。硫化钠液脱去背部毛发，剥离约3 cm×3 cm皮肤放入Bouin液中固定[2]，HE染色观察。取适量皮肤小块，105℃烘干，参考王红丽[3]等的方法测皮肤中羟脯氨酸（Hyp）含量。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 HE染色

正常组表皮结构完整厚度正常，细胞分层清晰，具明显的表皮突及真皮乳头，真皮层可见波浪状纤维组织。模型组表皮变薄，表皮与真皮交界不清晰，胶原纤维变细卷曲，说明本实验成功建立小鼠皮肤衰老模型。治疗组表皮结构较规则厚薄不甚均匀，有表皮突及真皮乳头，真皮层较厚，表皮与真皮界线清晰。见图1。

图1 HE染色（×100）

2.2 皮肤Hyp含量

正常组Hyp含量明显高于模型组，且差异有高度统计学意义（P＜0.01），治疗组与模型组比较，Hyp含量提高，且差异有统计学意义（P＜0.05），说明核桃仁具有良好促进皮肤Hyp含量增加的作用。见表1。

表1 核桃仁对皮肤Hyp影响

3 讨论

正常人皮肤润泽有弹性，表皮与真皮界线清晰，表皮规则，真皮层较厚，细胞层数较多，很少皱纹，结构完整。衰老时则皮肤变薄皱纹增多，缺乏光泽和弹性，表皮不规则真皮皱缩厚薄不均[4]。本实验观察到模型组皮肤表皮欠规则，真皮胶原显著变薄，与衰老皮肤形态相似，就组织形态学变化而言，D-半乳糖皮下注射的小鼠皮肤已经出现老化的基本改变，可认为造模成功。

羟脯氨酸是合成胶原蛋白特有的氨基酸，约占其总氨基酸残基的13.4%，它的含量可间接反映真皮内胶原蛋白含量的变化。随年龄增长，胶原蛋白分子交联老化，使真皮组织失去弹性形成皱纹，表现出衰老状态[4]。故测定皮肤中Hyp含量可作为判定受试动物皮肤衰老程度的一个特殊而敏感的指标。本研究通过测定衰老皮肤中Hyp含量，发现各组皮肤老化程度的差别，验证了核桃仁可有效促进皮肤Hyp含量增加，从而促进胶原蛋白生成，达到抗皮肤衰老的作用。

通过本研究，笔者初步推断核桃仁中某些物质能够提高Hyp含量，从而发挥抗衰老作用。但由于条件限制，究竟是何种物质发挥主要作用需进一步研究。

[1]顾成鹏，徐霞，潘科，等.核桃仁的功能特性及其药理研究进展[J].试验研究，2009，（9）：53-54.

[2]谢玲，崔红晶 .皮肤切片制作的体会 [J].实用医技杂志，2007，14（36）：5078-5079.

[3]陈勤.抗衰老研究实验方法[M].北京：中国医药科技出版社，1996：609-610.

[4]张艺，扬恬 .皮肤抗衰老研究进展[J].中国老年学杂志，2001，7（21）：320-321.