NM23-H1、CD44v6在无淋巴结转移非小细胞肺癌中的表达及临床意义

魏明超 ，岳世昌，王齐敏，王乃玉

(1.大连医科大学 附属第二医院 胸外科，辽宁 大连 116027；2.大连医科大学 附属第二医院 病理科，辽宁 大连 116027)

肺癌为常见的恶性肿瘤之一，其中大部分为非小细胞肺癌(NSCLC)，占了80%。大部分患者在就诊时已经发生了局部或远处转移，耽误甚至错过了最佳的治疗时机。因而，对早期肺癌患者有效治疗显得尤为重要。无淋巴结转移的非小细胞肺癌(N0NSCLC)为临床适应手术治疗的肺癌，判断这部分肿瘤患者的预后，对抉择术后治疗方案十分重要。NM23-H1和CD44v6都是肿瘤转移相关因子，本研究检测NM23-H1、CD44v6在术后病理证实为N0NSCLC组织的表达，通过分析二者表达与患者5年预后的关系，探讨它们用于预测N0NSCLC预后的可能性。

1 材料和方法

1.1 标本来源及临床资料

取大连医科大学附属第二医院胸外科2000～2005年间经术后病理证实N0NSCLC组织60例。其中，男性40例，女性20例；最大年龄77岁，最小年龄50岁，平均年龄59岁；鳞癌33例，腺癌27例。术前所有患者均未行放疗或化疗治疗。术后60例患者均通过复查或电话密切随访,期限5年。复发、转移及该病死亡为终点事件。

1.2 试 剂

所用I抗均为即用型工作液，分别为：鼠抗人NM23-H1单克隆抗体，克隆号37.6；鼠抗人CD44v6单克隆抗体，克隆号VFF-7。SP试剂盒为sp-9000型通用型试剂盒，DAB染色试剂盒为ZLI-9032型试剂盒，所有试剂均购自北京中杉金桥生物有限公司。

1.3 方 法

采用免疫组织化学法对60例NSCLC标本分别进行NM23-H1、CD44v6检测。主要步骤：将切除肺癌组织行常规福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm切片。将石蜡切片置60 ℃烤箱1 h，免疫组化步骤按照试剂盒要求进行；最后中性树脂封片。

1.4 结果判定

NM23-H1呈棕黄色染色定位于胞浆；CD44v6呈棕黄色颗粒状主要定位于胞膜，部分定位于胞浆。选取染色密集区，随机取5个高倍镜(400×)视野。采用半定量积分法，按染色强度分为：无染色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；按染色细胞数：<25%弱阳性为1分；25%～50%中等阳性为2分，>50%强阳性为3分。两者相乘，0～3分为阴性，4～5分为阳性(+)，6～7分为中等阳性(++)，8～9分为强阳性(+++)。切片由3位病理医师分别评分，最后取平均值。用本院已知阳性NSCLC阳性切片为阳性对照，以PBS代替I抗为阴性对照。

1.5 统计学方法

比较各指标阳性表达在病理分型中有无差异性采用χ2检验；生存分析采用kaplan-meier曲线图示，行log-rank检验；各指标阳性表达与5年预后相关性采用秩相关(r)，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

在 N0NSCLC当中，NM23-H1阳性表达率为66.67%，该部分患者术后5年生存率为72.50%， 而NM23-H1阴性者为20.00%，经统计学计算得出χ2=14.37 (P<0.01)，差异有显著性意义。可以认为，NM23-H1阳性者5年生存率要明显高于NM23-H1阴性者；经检测NM23-H1阳性表达与术后5年存活率呈正相关，相关系数r为0.887，相关性较高，但其在鳞癌与腺癌中的表达差异无显著性意义(χ2=2.72，P<0.05)。

在 N0NSCLC当中，CD44v6阳性表达率为35%，该部分患者术后5年生存率为28.57%，CD44v6阴性表达者为69.23%，经统计学计算得出χ2=9.56 (P<0.01)，差异具有显著性意义。可以认为CD44v6阳性者术后5年生存率要低于CD44v6阴性者；CD44v6阳性表达与存活率呈负相关，相关系数r为-0.784，但其在鳞癌与腺癌中的表达差异无显著性意义(χ2=1.77 ，P<0.05)。

具体见表1、2及图1～3。

表1 两指标表达强度及术后5年存活率的关系

表2 两指标表达与病理分型关系

图1 各组生存函数

图2 鳞癌NM23-H1浆表达 200×

图3 鳞癌CD44v6膜表达 200×

3 讨 论

NM23(nonmetatasis23，nm23)基因是Steeg等[1]在1988年用消减杂交法从不同转移潜能的鼠黑色素瘤K-1735细胞株中克隆到的一种有抑制肿瘤转移作用的基因，分为NM23-H1、NM23-H2、DR-NM23和NM23-H4四型，其中与肿瘤预后关系较为密切的就是NM23-H1，定位于17号染色体长臂，其表达产物主要存在于胞浆当中。现有的研究表明，NM23基因的表达水平、基因缺失、突变与肿瘤的临床病理生理指标和预后有一定的内在联系，如在乳腺癌、肝癌等恶性肿瘤中，NM23-H1的低表达与预后不良密切相关；但在其他肿瘤当中，有文献报道NM23-H1的高表达与预后呈负相关[2]，这可能与其选取的样本及肿瘤的特异性有关。目前，主要是将NM23-H1作为一种抑癌基因来研究，它的低表达可以影响微管的聚合与解聚，使微管微丝聚合受阻导致纺锤体形成障碍，促使非整倍体细胞的形成而诱导细胞发生恶变[3]；NM23-H1还可以影响G蛋白[4]的信号传导，调节大量的G蛋白介导的细胞信号传导反应而负性调节肿瘤的发展和转移。研究发现，可以将检测NM23-H1作为一种早期诊断、预后评价[5-7]、甚至基因治疗的手段来应用。本研究发现，NM23-H1的表达直接与患者的预后相关，其表达越高表明患者的预后越好，生存期越长；其表达越低，生存期越短。

CD44为一种分布极为广泛的细胞表面跨膜蛋白，是一个重要的细胞表面粘连分子，可以与细胞外基质中的透明质酸、层粘连蛋白等基质分子结合；还能与细胞骨架蛋白结合，参与细胞伪足形成，并与细胞的迁移运动有关[7,8]。它的跨膜结构区域十分保守，这一结构区域称为糖脂富集膜微结构域，胞浆侧的羧基尾还可介导CD44蛋白从胞浆至胞膜的转移，所以CD44蛋白可以在胞浆及胞膜同时表达。人类的CD44基因定位于11号染色体短臂，它有20个高度保守的外显子构成。根据外显子的转录方式不同，又分为组成型外显子(C)和变异型拼接外显子(V)两大类。组成型外显子共有10个，存在于所有转录产物之中。仅含有组成外显子的CD44转录子称为标准CD44(CD44S)；变异型拼接外显子也有10个，仅含有变异性拼接外显子的CD44转录子称为变异CD44(CD44v)。变异性CD44特别是CD44v6型可连续性转录[9,10]，从而使其表达产物大量表达，加剧了肿瘤细胞的迁移[11]。本研究表明，CD44v6阳性者生存期短，生存率低，预后较差，这一点与文献报道相一致[12,13]。因此，可以通过检测CD44特别是CD44v6的表达揭示其与肺癌患者预后的关系。可以将CD44v6作为临床预测患者预后的重要指标，以便于制定针对性较强的治疗方案。

参考文献：

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