温州地区阿尔茨海默病患者精神行为障碍与载脂蛋白E基因多态性的关系

朱未名 虞海萍 林长闯 胡海燕

(温州市鹿城区精神病医院，浙江 温州 325003)

阿尔茨海默病(AD)是老年人的常见病、多发病。其首要症状是智力、记忆力、感官定向能力、判断力、语言思维能力不可逆的进行性退化，并常伴有性格改变。其病理特征为:神经元外的β-淀粉样蛋白(Aβ)聚集形成老年斑(SP)，神经元内tau蛋白异常聚集形成神经纤维缠结(NFTs)，脑皮质、海马胆碱能神经元及其突触大量丢失，累及皮层动脉和小动脉出现血管淀粉样变性。从基因多态性角度来审视本病成为重要的研究思路。人们发现了越来越多的与AD相关的基因，使其在预测和治疗AD方面起到积极的作用。本研究旨在探讨温州地区AD病人的精神行为特征与载脂蛋白E(ApoE)基因之间的关系。

1 对象和方法

1.1 对象

1.1.1 病例收集 2009年2至12月在温州市3个社区里对60岁以上老人进行筛查，筛选出AD患者51例，选择同社区非AD老年人54例进行对照。AD组男20例，女31例，年龄60～90〔平均(71.34±7.34)〕岁，其中文盲18例，小学13例，初中14例，高中4例，大学2例。简易智力状态检查(MMSE)评分(10.4±7.9)分，日常生活活动能力量表(ADL)评分(61.3±17.2)分。对照组54例，男21例，女33例，平均年龄(70.68±8.65)岁。其中文盲11例，小学15例，初中18例，高中6例，大学4例。MMSE评分(26.2±3.2)分，ADL评分(27.3±6.9)分。AD组与对照组之间无任何血缘关系，所有患者居住温州1年以上。各组间患者的性别、年龄分布、病程比较无显著性差异(P＞0.05)。

1.1.2 诊断标准 采用DSM-IV-RAD关于AD的诊断标准和老年性痴呆和相关疾病学会(NINCDS-ADRDA)的可能AD标准〔1〕，MMSE评分为13～24分的轻、中度痴呆患者;年龄≥50岁的男性或绝经后的女性;Hachinski缺血指数＜4分;无重大躯体疾病;排除脑外伤、抑郁性障碍、研究前1个月使用精神药物或血管活性药物者。

1.2 认知功能及精神行为检查 包括MMSE、ADL、阿尔茨海默病行为病理评定量表(BEHAVE-AD)。其中BEHAVE-AD对AD患者2 w精神行为进行评定，共有25条项目，按7个分量统计:偏执和妄想观念、幻觉、行为紊乱、攻击行为、日夜节律紊乱、情感障碍、焦虑和恐惧。收集符合上述AD诊断标准的患者及60岁以上正常对照者，分别进行抽血检查。AD患者由二名精神科医师进行诊断评价，评定认知功能、情感行为障碍，资料存档。

1.3 ApoE基因检测

1.3.1 DNA提取 抽取5 ml全血，EDTA抗凝，采用苯酚-氯仿法抽提基因组DNA。

1.3.2 ApoE基因的PCR扩增 根据引物设计基本原则与已知ApoE基因序列，采用以下引物(由上海生工生物技术公司合成)，P1:5'ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACAC3';P2:5'TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA3'。PCR反应体系:总体系30 μl，基因组 DNA 2 μl，10 × Buffer(含镁)3 μl，4 × dNTP 2 μl，上游及下游引物各1 μl，TaqDNA 聚合酶0.2 μl，无菌双蒸水21μl。PCR反应条件:97℃预变性5 min，然后按95℃变性1 min，67℃退火1 min，72 ℃延伸2 min，共30个循环，最后进一步72℃延伸7 min，4℃保存。所得产物用2%琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，紫外光下呈现265 bp特异PCR扩增片段。

1.3.3 ApoE基因型鉴定 在8μl PCR扩增产物中加入0.5μl限制性内切酶HhaⅠ (宝生物公司)，10倍缓冲液1μl，无菌双蒸水0.5μl，37℃保温6 h。酶切产物加入8%聚丙烯酰胺凝胶板样品槽中，8 V/cm电压下垂直电泳1.5 h后，溴化乙锭染色，紫外光下观察，根据电泳带型确定ApoE的基因型。

1.4 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件，ApoE基因型和等位基因频率以百分率(%)表示，组间比较用χ2检验。

2 结果

2.1 AD组精神行为障碍与ApoE基因型频率比较 AD组精神行为障碍分7个分量统计，主要包括偏执妄想观念、幻觉、行为紊乱、攻击行为、日夜节律紊乱、情感障碍、焦虑和恐惧等方面。在ApoE的基因型中ε4/4在偏执和妄想观念、幻觉及行为紊乱、攻击方面与其他基因型有差异(P＜0.05)。见表1。

表1 AD精神行为障碍与ApoE基因型频率比较〔n(%)〕

2.2 AD组与对照组ApoE基因频率分布 共检出ApoE基因型有 ε2/2、ε2/3、ε3/3、ε2/4、ε3/4、ε4/4，AD 组与对照组 ApoE基因型频率分布比较 ε2/3、ε3/4、ε4/4有差异(P ＜0.05)。等位基因两组比较ε2、ε4有差异(P＜0.05)。见表2，表3。

表2 AD组与对照组ApoE基因型频率分布〔n(%)〕

表3 AD组与对照组的等位基因频率分布〔n(%)〕

3 讨论

ApoEε4被认为是AD的危险因素，可以影响AD的发病时间，ε4 的危险效应与年龄、性别相关〔4〕。陈等等〔5〕对中国汉族人群中160例散发性AD患者和195例正常对照组老年人ApoE基因多态性分布的差异进行了研究，结果表明，ApoE三种等位基因 ε2、ε3和 ε4的频率在 AD组和对照组分别为0.056、0.713、0.231 和 0.082、0.844、0.074。ApoE 等位基因携带个体患AD的危险为非携带个体的3.82倍。麦以成等〔6〕对广东佛山地区88例晚发AD及97例正常老年人ApoE基因多态性进行了比较研究，结果表明，ε4基因频率 AD患者为0.188，正常老年人为0.082，并与晚发AD呈正相关。本文研究结果也证实了ε4基因在AD发病中起重要作用。

ApoE基因与中枢神经系统损伤及智力障碍有关。张许来等〔7〕的结果提示，AD患者在偏执和妄想、幻觉、行为紊乱和攻击行为等方面与正常对照组比较差异显著，而ApoE基因检查结果显示携带ApoEε4基因的AD患者精神行为障碍更为明显。对AD患者执行功能障碍与ApoE基因相关性的研究结果显示，AD患者的记忆、执行功能、计算力较健康对照组有明显差异，而携带ε4基因型者认知功能损害更明显〔8〕。任艳峰等〔9〕结果表明，ApoEε4 与 ApoEε2 基因均与认知有关，其中ApoEε4基因是轻度认知障碍的可疑危险因素，而ApoEε2可能是降低轻度认知障碍危险性的因素。

ApoE基因可能影响中枢神经系统和智力。在对ApoEε4基因缺失的纯合子和杂合子鼠在Morris迷宫中进行空间学习能力测验中发现，纯合子鼠无此学习能力，而杂合子鼠则无任何困难。Raber等的研究发现ApoEε4同ApoEε2及ApoEε3相比增加了对认知损害的危险性〔10〕。海马及毗邻皮质区对ApoEε4基因的损伤作用有较强的易感性，携带ε4基因的非痴呆老年人在言语学习实验中得分比未携者低〔11〕。ApoE基因影响中枢神经系统及人类智力的机制可能是多方面的。首先ApoE与中枢胆碱能系统功能有关。其次ApoE与神经突触的整复有关。ApoEε4等位基因与AD病人海马萎缩有关，它可能在AD的病理机制中扮演了一定的角色。本研究也表明AD组精神行为障碍明显，通过BEHAVE-AD量表分7个分量测评，主要包括偏执妄想观念、幻觉、行为紊乱、攻击行为、日夜节律紊乱、情感障碍、焦虑和恐惧。结果表明，在ApoEε4的基因型中ε4/4在偏执和妄想观念、幻觉及行为紊乱、攻击方面与其他基因型有差异。

1 American Psychiatric Association.Diagnostic and statistical Manual of Mental Disorders〔M〕.4th ed.Washington DC:American Psychiatric Association，1994:143.

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5 陈 等，张俊武，张振馨，等.载脂蛋白E基因多态性与阿尔茨海默病〔J〕.遗传学报，2003;30(12):1167-70.

6 麦以成，罗有年，顾 鸿，等.载脂蛋白E基因多态性与Alzheimer病的关联研究〔J〕.临床精神医学杂志，2007;17(6):365-6.

7 张许来，张晓莉，陶领知，等.阿尔茨海默病精神行为障碍与载脂蛋白E基因研究〔J〕.临床精神医学杂志，2008;18(3):156-8.

8 张许来，张晓莉，陶领知，等.阿尔茨海默病的执行功能障碍与APOE基因相关性研究〔J〕.中国老年学杂志，2007;27(19):1897-9.

9 任艳峰，曲成毅，苗茂华.轻度认知障碍与APOE基因多态性关系〔J〕.中国公共卫生，2007;23(7):862-3.

10 Raber J，Wong D，Buttini M，et al.Isoform-specific effects of human apolipoprotein E on brain function revealed in ApoE knockout mice:increased susceptibility of females〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，1998;95(18):10914-9.

11 Bondi MW，Salmon DP，Monsch AU，et al.Episodic memory changes are associated with the ApoE-epsilon 4 allele in nondemented older adults〔J〕.Neurology，1995;45(12):2203-6.