葡萄柚茎尖微芽嫁接脱毒成苗技术研究初报

李 丽 罗君琴 徐建国 孙建华 柯甫志 聂振朋

（浙江省柑橘研究所 台州黄岩 318020）

1 材料与方法

1.1 供试品种（系）

红肉葡萄柚、黄肉葡萄柚。

1.2 砧木苗培养

茎尖微芽嫁接采用沙田柚和枳为砧木，挑选果皮完好无霉烂的果实，先用自然水冲洗去果皮表面的杂质，在无菌条件下，用75%酒精擦洗作表面消毒，反复2～3次。切去果皮，取出饱满的种子，用无菌的1mol/L的氢氧化钠溶液浸泡10min，软化种子表面的果胶，用清水冲洗直到果胶去除干净。在无菌虑纸上剥除种子的内外种皮，胚根朝下置于固体的MS培养基中，每试管接5～6颗种子。标好品种和日期，置于25±1℃的恒温培养箱中暗培养14～20d，获得黄化苗供嫁接用。

1.3 茎尖微芽嫁接

晴朗的上午10：00左右，于健壮无病的葡萄柚树株上，剪取3～5cm的未自剪的春梢，置于有清水的三角瓶中封口保湿。拿回实验室用洗洁精清洗干净嫩芽表面的杂质，在无菌条件下，用5%（v/v）的次氯酸钠溶液对嫩芽作表面消毒8min。切去砧木顶端和部分根端，留茎长2cm左右，然后用刀片在离砧木上切口0.5cm处切出三角形创口，在体视显微镜下用嫁接刀尖剥取保留生长锥及2～3个叶原基的茎尖，快速将其放到砧木的三角形切口中，用刀背按压使茎尖与砧木的横切口完全接合。嫁接好的试管苗置入滤纸桥支撑的MT液体培养基中进行光培养，培养温度为25±1℃，光照为1500～2000Lx，培养时间为12h/d。

1.4 除萌

嫁接后7～10d，砧木陆续萌蘖，生长迅速与接穗竞争营养，如不及时除萌，会严重影响接穗正常生长，当萌蘖长到2cm以上时，接穗因得不到足够的营养而褐化死亡现象明显增多。一般经过2～3次除萌，茎尖与砧木接口愈合充分的接穗开始生长，此时萌蘖不再发生。

1.5 嫁接成活苗的移栽

茎尖嫁接萌动开始后约21d左右，待接穗长出4～5片叶后，便移栽到网室大棚中。首先将待移栽的嫁接苗在实验室的自然散射光下炼苗3～5d。在此间准备好培养土，成分为2/3珍珠岩+1/3东北泥炭，经高压灭菌后备用。移栽时将嫁接苗从试管中取出，洗净根部的培养液，移入无菌的培养土中。用1/2MT营养液+800倍多菌灵混合液浇透定根。再将培养钵移入装有雾喷设施的防虫网室中进行隔离养护，保持网室80%～90%的湿度。移栽后每隔7d浇一次1/2MT营养液+800倍多菌灵混合液，14d左右待嫁接苗新根长出，移栽成活，便开始新叶生长，看护培养得当，嫁接苗生长迅速，21d左右接穗即可长到5cm以上。

2 结果与分析

葡萄柚不同品系与砧木组合嫁接成活率差异较大。红肉葡萄柚和黄肉葡萄柚茎尖微芽嫁接成活率品系间的无明显差异，不同砧木间则表现出明显的差异性。采用沙田柚为砧木，两品系的葡萄柚嫁接成活率最高，都达70.0%左右，黄肉系相对较高达70.6%；而枳为砧木，红肉葡萄柚和黄肉葡萄柚的嫁接成活率明显较低，前者为15.0%，后者为11.8%（见表1）。其原因可能是葡萄柚与柚类嫁接亲和性较好。

表1 不同砧木对葡萄柚茎尖微芽嫁接成活率的影响

3 小结

研究表明，在田间常规条件下，枳是中国目前应用最多、最广的柑橘砧木，对多数柑橘品种亲和力强，成活率高。枳是温州蜜柑、椪柑、金柑、瓯柑等常规半矮化砧；枳砧梁平柚、五步柚、晚白柚等，表现亲和性好，矮化，生长正常，早结丰产；但它对本地早、柳橙、蕉柑、莱姆、汤姆森脐橙、麻豆文旦、八朔蜜柑、尤力克柠檬、马叙无核葡萄柚、邓肯葡萄柚等则不亲和。

利用组织培养，试管微环境条件下，进行两种葡萄柚与砧木组合的茎尖嫁接试验，结果表明，试管微环境下，枳对葡萄柚也表现出亲和性差，这与田间条件下的表现一致。而以沙田柚为砧木的嫁接亲和性较佳。