GC法同时测定鲜鱼腥草中4种成分

蒋玲燕， 李 清， 陈晓辉， 戴荣华， 毕开顺

(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016)

鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houttuyniae cordataThunb的新鲜全草，又名侧耳根、紫蕺、猪鼻孔、九节莲等［1］，广泛分布于我国西北、华北、华中和长江以南各地，多生于沟边、溪边或林下湿地。其新鲜植株破碎后有刺鼻的腥臭味，故称鱼腥草［2-3］。该药性味辛，微寒，归肺经，具清热解毒，抗菌，抗炎，抗病毒，增强机体免疫力以及利尿等药理作用［4-6］。目前临床中鱼腥草及其制剂主要用于治疗上呼吸道感染，肺脓疡，尿路炎症及其它部位化脓性炎症［5］。鱼腥草除具有较高的药用价值，还具有极高的食疗价值，在许多地方将其作为野生蔬菜食用，它也可以作为辅料做成各种菜肴［7］，国家卫生部确定其为药食两用的品种之一。

《中国药典》2010年版一部鱼腥草项下对鱼腥草只有鉴别项，无定量测定项［8］。阮桂平等［9-14］均是通过测定单一成分甲基正壬酮的量控制鱼腥草药材质量。中药成分复杂，单一成分定量测定不能全面反应中药的质量控制，建立多指标成分测定对中药质量控制具有重要意义，因此本实验采用气相色谱法同时测定鱼腥草药材中的4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯和甲基正壬酮。所建立的方法简便，准确，可以作为鱼腥草药材质量控制的依据。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 Agilent 6890N气相色谱仪(Agilent公司);电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司);电子天平(天津市天马仪器厂);AGBP210S电子天平(德国Satorius公司);挥发油提取器。

1.2 试剂 甲基正壬酮对照品(批号:118034-200502)和乙酸龙脑酯对照品(批号:110759-200303)购自中国药品生物制品检定所。4-萜烯醇对照品和α-松油醇对照品由湖南正清制药集团提供，纯度均大于 97%。十一碳烯(纯度大于99.5%)购自Fluka公司。正己烷(色谱纯)，购自山东禹王实业有限公司化工分公司，无水硫酸钠(分析纯)购自天津大茂化学试剂厂。鲜鱼腥草药材由湖南正清制药集团提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:DB-1毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm);程序升温:70 ℃保持 5 min，以5℃/min上升至140℃，保持5 min，再以20℃/min上升至250℃;进样口温度250℃;检测器温度280℃(FID);分流比 10 ∶1;进样量 1 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液配制 分别取4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯和甲基正壬酮适量，精密称定，加正己烷配成 0.990、0.516、8.16、10.40 mg/mL 的贮备液，分别精密量取上述对照品贮备液2、1、1、4 mL置10 mL量瓶中，正己烷定容至刻度，作为混合对照品贮备液，4℃冰箱中保存。

2.2.2 内标溶液配制 取十一碳烯适量，精密称定，加正己烷配成1.988 mg/mL的贮备液，4℃冰箱中保存。

2.2.3 供试品溶液配制 称取本品50 g，洗净，剪碎，置圆底烧瓶中，加150 mL水，连接挥发油测定器。自测定器上端加水充满刻度部分，加正己烷1 mL，加热至沸，保持微沸4 h，停止加热，冷却至室温，分取正己烷层，加无水 Na2SO4约0.4 g，除去水分，取上层溶液至10 mL量瓶，精密加入1 mL内标溶液，正己烷定容，作为供试品溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 专属性考察 取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下测定，结果显示在对照品和内标保留时间处无杂质峰干扰，供试品溶液中其他成分对测量无干扰，表明方法专属性良好。见图1。

图1 空白溶剂(A)，对照溶液(B)和供试品溶液(C)GC色谱图谱Fig.1 GC chromatograms of blank solution(A)，reference solution(B)，sample solution(C)

2.3.2 标准曲线与线性范围 分别精密量取混合对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.5、1、1.5 mL 置2 mL 量瓶中，精密加入 0.2 mL内标溶液，正己烷定容，即得系列混合对照品溶液，在上述色谱条件下测定。以对照品与内标峰面积比(Y)为纵坐标，以各对照品浓度(X∶mg/mL)为横坐标，进行线性回归，回归方程见表1。结果表明4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯和甲基正壬酮分别在 9.90 ～148.5 μg/mL，2.580 ～38.70 μg/mL，40.80 ～612.0 μg/mL，208.0～3 120 μg/mL范围内线性关系良好。

表1 鲜鱼腥草药材中4种成分的回归方程Tab.1 Regression equation of four components in Houttuynia cordata

2.3.3 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样5次，测得4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯和甲基正壬酮的峰面积与内标峰面积比值的 RSD 分别为 0.8%，1.7%，0.8%，1.1%，结果表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性试验 分别精密称取6份同一批号样品，每份50 g，照2.2.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，测得4-萜烯醇，α-松油醇，乙酸龙脑酯，甲基正壬酮的RSD分别为2.4%，1.5%，1.9%，2.3%，结果表明方法重复性好。

2.3.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温下放置，分别于 0、2、4、8、12、24 h 在上述色谱条件下测定，测得4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯和甲基正壬酮与内标峰面积比的RSD分别为2.6%、1.7%、1.2%、1.4%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.3.6 回收率试验 称取已知量的同一批号鱼腥草药材25 g，共6份，分别加入各对照品贮备液适量，照2.2.3项下方法制备溶液，在上述色谱条件下测定，4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯和甲基正壬酮的平均回收率分别为 96.1%、95.5%、97.4%、96.7%，RSD 分别为 1.2%、2.4%、2.4%、2.7%。

2.4 样品测定 取10批鱼腥草药材，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，计算鲜鱼腥草药材中4种成分质量分数，结果见表2。

表2 鱼腥草药材4种成分测定结果 (n=3)Tab.2 Determinnation of four components in Houttuynia cordata (n=3)

3 讨论

3.1 分别考察了 HP-5，DB-1，DB-17毛细管色谱柱，结果表明采用DB-1色谱柱时分离效果最好，因此选用DB-1毛细管色谱柱。

3.2 考察了提取时间分别为3，4，5 h时挥发油的提取量，结果表明提取4 h和提取5 h提取效率均较高，考虑到节省时间，故选择4 h作为提取时间。

3.3 分别考察了加入3倍量，4倍量和5倍量水时挥发油的提取量，结果表明加入3倍量水时挥发油提取最完全。

3.4 实验结果表明不同批次药材中4-萜烯醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯和甲基正壬酮量差别较大，这可能与药材的采收时间和用药部位不同有关。其中批号为090904的药材茎叶已有严重干枯萎蔫现象，导致挥发油量降低，所以在实验中未检测到。

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